2型糖尿病气阴两虚型患者尿液中氨基酸与相关指标的分析

鲁 娜， 马晓丽， 李琳琳， 王 烨， 王丽凤， 骆 新， 毛新民， 兰 怡

(新疆医科大学1省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室， 2药学院， 3基础医学院， 4中医学院， 乌鲁木齐 830011；5附属中医医院， 乌鲁木齐 830000)

2型糖尿病(T2DM)约占糖尿病(DM)患者总人数的90%以上。文献回顾总结发现气阴两虚证型处于T2DM中所有证型的首要位置[1]。有研究发现，体质指数(BMI)、腰围(WC)和腰臀比(WHtR)预测糖尿病、高血脂、肥胖等相关疾病风险的可行性和重要价值已被肯定[2]，支链氨基酸(异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸)和芳香族氨基酸(酪氨酸、苯丙氨酸)升高能增加糖尿病的患病风险[3]。本课题组前期利用HPLC技术对2型糖尿病气阴两虚型患者尿液进行研究，发现其氨基酸代谢性标志物为异亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸[4-5]。有研究认为，T2DM的不同中医辨证分型与BMI、WC等临床指标密切相关，具有一定的差异性[6]。本研究探讨2型糖尿病气阴两虚型的特征性氨基酸代谢物与生理、生化指标的相互联系，为T2DM中医辨证分型客观量化提供依据。

1 资料与方法

1.1研究对象对新疆医科大学附属中医医院177例2型糖尿病(T2DM)志愿者进行资料采集，其中气阴两虚型89例，男性43例，女性46例。由专业医护人员测量志愿者的身高、体质量、腰围、臀围，其单位分别是cm、kg、cm、cm。

1.1.1 诊断标准 体质指数(BMI)<18.5 kg/m2为体重过低，24 kg/m2≤ BMI<28 kg/m2为超重，BMI ≥ 28 kg/m2为肥胖(标准参照《成人体重判断》)；收缩压(SBP)≥140 mmHg和舒张压(DBP)≥90 mmHg为高血压(标准参照《中国高血压防治指南》)；总胆固醇(TC)≥ 6.2 mmol/L、甘油三酯(TG)≥2.3 mmol/L，满足以上1种即判为血脂异常(标准参照《中国成人血脂异常防治指南》)；空腹血糖(FBG)≥7.0 mmol/L或餐后2 h血糖>11.0 mmol/L为糖尿病(参照《中国糖尿病诊疗标准》)。

1.1.2 中医辨证分型标准 参照周仲英主编普通高等教育“十五”国家级规划教材《中医内科学》,进行中医辨证分型，气阴两虚型：倦怠乏力，自汗盗汗，气短懒言，口渴喜饮，五心烦热，心悸失眠，渡赤便秘，舌红少津，舌体胖大，苔薄或花剥，脉弦细或细数。

1.2方法

1.2.1 实验试剂及仪器 AQC衍生试剂包(美国Waters公司),乙腈(色谱纯，Sigma-Aldricl试剂公司),甲醇(色谱纯，Sigma-Aldricl试剂公司),高效液相色谱仪(Waters e2695),荧光检测器(Waters 2475),全自动生化分析仪(BS-120),离心机(Thermo，LEGEND MICRO21)。

1.2.2 氨基酸代谢性标志物 采用HPLC法检测尿液中17种氨基酸含量，找到氨基酸代谢性标志物，2型糖尿病气阴两虚型患者尿液中氨基酸的特征性代谢物是赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)和异亮氨酸(Ile)。

1.2.3 尿样处理 收集志愿者尿液，离心(10 min，4℃，12 000 r/min)，取上清液，过滤，加入70 μL Buffer和15 μL 2A，反复吸打，水浴(55℃，10 min),进样10 μL进行HPLC色谱分析。

1.2.4 溶液的配制 在蛋白干预对气阴两虚型2型糖尿病大鼠的影响[7]的实验研究中有氨基酸标准品储备液的配制、衍生试剂制备、空白衍生试剂制备、标准物质衍生化反应进行溶液配制方法的详细描述。

1.2.5 生化指标的检测 运用全自动生化分析仪检测血清中空腹血糖(FBG)、葡萄糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平。

1.3统计学处理采用SPSS17.0统计学软件，运用Pearson相关分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

Pearson相关性分析显示，2型糖尿病气阴两虚型患者中，Met与BMI、TG呈显著性正相关，与身高呈显著性负相关(P<0.05)，Ile与BMI、WC、WHtR呈显著性正相关(P<0.05)，Lys与BMI、DBP、FBG呈显著性正相关(P<0.05)(表1)。

表1 2型糖尿病气阴两虚型Met、Ile、Lys与客观指标的相关性

注:*P<0.05,**P<0.01。

3 结论

目前，全球DM患病率正呈快速上升趋势，已成为世界上重要的公共健康问题之一[8]。其中T2DM起病较慢，多见于中老年人，偶见于幼儿，其发病与遗传、体质肥胖、年龄及生活方式等因素有着直接的关系[9-10]。在T2DM的治疗和预防中，BMI、FBG是一个重要的参考指标，且BMI、FBG对T2DM的预测价值高于WC、TG和WHtR。肥胖和超重是T2DM的危险因素，积极控制体质量和肥胖有利于T2DM的预防[11]。王家乐等[12]的研究表明，肥胖个体血浆游离氨基酸中丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸等氨基酸水平比正常个体高，且肥胖个体的BMI与苯丙氨酸、异亮氨酸密切相关。本课题组前期工作研究[13]发现2型糖尿病气阴两虚型的氨基酸代谢标志物有Ile、Lys和Met。

本研究结果显示，2型糖尿病气阴两虚型患者尿液中Met与BMI、TG呈正相关，与身高呈负相关，Ile与BMI、WC、WHtR呈正相关，Lys与BMI、DBP、FBG呈正相关。高贝贝[3]研究发现2型糖尿病气阴两虚型患者尿中的Lys、Met、亮氨酸(Leu)与BMI具有显著性正相关，Val、Lys与DBP呈显著性正相关，本研究结果与之类似。必需氨基酸Met是构成蛋白质的一种含硫醚结构的非极性脂肪族氨基酸，在机体生理功能和生化反应中起到不可替代的重要代谢与调控作用，如参与体内胆碱的合成、DNA和蛋白质的甲基化等过程，参与机体组织生理代谢活动[14-15]，故Met浓度的变化对身高、BMI、TG水平具有一定的影响。Lys为碱性必需氨基酸，占人体必需氨基酸的12.5%，由于谷物食品中的Lys含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸[16]，具有增强胃液分泌、提高蛋白质的利用率、增强造血机能等作用，如长期单纯食用谷类食物，势必会造成人体所需Lys的缺乏，从而导致食欲减退、新陈代谢紊乱、体内生物酶活性降低、造血机能障碍等症状，以至发生贫血、浮肿、肌肉萎缩、体质量下降和早衰等现象[17]，故Lys对体质量、BMI、FBG水平具有显著影响。Ile的作用包括与亮氨酸和缬氨酸一起合作修复肌肉，控制血糖，并给身体组织提供能量，它还提高生长激素的产量，并帮助燃烧内脏脂肪，这些脂肪由于处于身体内部，仅通过节食和锻炼难以对它们产生有效作用[18]，故Ile与BMI、FBG具有很强的相关性。

由于2型糖尿病气阴两虚型患者尿液中的Ile、Met、Lys与身高、BMI、TG、WC、WHtR、DBP、FBG密切相关，因此控制好血糖、血压、血脂、BMI等相关指标，可以提高2型糖尿病气阴两虚型患者的生存质量，也对中医辨证分型治疗T2DM有一定的指导价值。