甲状腺癌组织中TIPE2、MCM7蛋白表达变化及其相关性分析

马文飚

(青海省人民医院，西宁810007)

流行病学研究表明，甲状腺癌的发病率接近241～627/10万人[1]，特别是在接触放射线或者具有相关家族史的人群中，甲状腺癌的发生风险更高[2]。在研究影响甲状腺癌细胞发生相关机制时发现，细胞生物学因子能够显著影响甲状腺上皮细胞的增殖、分化、凋亡等过程，提高甲状腺上皮细胞异常增殖的风险，从而促进癌细胞的发生。免疫负调控分子肿瘤坏死因子诱导蛋白8样蛋白2(TIPE2)能够通过调控癌细胞的分化成熟，抑制癌细胞的过度增殖，稳定癌细胞的细胞周期，从而降低恶性肿瘤的发生风险[3]；微小染色体维持蛋白7(MCM7)能够影响染色体DNA的转录活性，导致癌细胞的增殖速度提升，并可显著提高癌细胞的黏附和转移能力[4]。2015年1月～2018年1月，我们观察了甲状腺癌组织中TIPE2、MCM7蛋白的表达变化，并分析二者表达的相关性，旨在为临床上甲状腺癌的诊疗提供理论基础。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集同期青海省人民医院收治的甲状腺癌、甲状腺良性肿瘤患者。纳入标准：①甲状腺癌、甲状腺良性肿瘤符合中华医学会制定的诊断标准；②甲状腺癌、甲状腺良性肿瘤均经过甲状腺超声、穿刺活检证实；③年龄<60岁；④甲状腺癌患者术前未接受放化疗、免疫治疗；⑤术中留取病灶组织标本；⑥患者均签署知情同意书。排除标准：①临床资料不完整；②伴有其他部位恶性肿瘤。共选取甲状腺癌组织80例(甲状腺癌组)、甲状腺良性肿瘤组织40例(良性组)。甲状腺癌组男17例、女63例，年龄(44.5±9.8)岁，TNM分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期24例、Ⅲ期30例、Ⅳ期8例，病理类型：乳头状癌33例、滤泡状癌21例、未分化癌14例、髓样癌12例，发生淋巴结转移40例。良性组男9例、女31例，年龄(45.2±10.2)岁，其中甲状腺腺瘤28例、结节性甲状腺肿12例。本研究获得医学伦理委员会批准，两组性别、年龄具有可比性。

1.2 TIPE2、MCM7蛋白检测方法 采用免疫组化SP染色法。将石蜡切片脱蜡至水，3%H2O2封闭内源性过氧化物酶；PBS冲洗5 min，滴加正常山羊或兔血清37 ℃封闭处理15 min。用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体37 ℃孵育2 h；滴加生物素化的二抗，37 ℃孵育40 min；PBS冲洗5 min，DAB显色；苏木素复染，中性树胶封片。TIPE2蛋白阳性着色表达于细胞质与细胞核、MCM7蛋白阳性着色表达于细胞核，均呈黄色、棕黄色、褐色表达。显微镜下观察5个视野，每个视野计数细胞200个，根据着色强度、阳性细胞比例判断阳性表达情况。着色强度：0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色或黑色，阳性细胞比例：≤10%为1分、11%～50%为2分、51%～75%为3分、﹥75%为4分，两项积分相乘<3为阴性、≥3为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。计数资料以例表示，数据比较行χ2检验或秩和检验，相关关系采用Spearman相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TIPE2、MCM7蛋白表达情况比较 甲状腺癌组中TIPE2、MCM7蛋白阳性表达率分别为36.25%(29/80)、76.25%(61/80)，良性组分别为70.00%(28/40)、10.00%(4/40)，两组TIPE2、MCM7蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(χ2分别为12.180、47.144，P均<0.05)。

2.2 不同病理学特征的甲状腺癌组织中TIPE2、MCM7蛋白表达情况比较 见表1。

表1 不同病理学特征的甲状腺癌组织中TIPE2、MCM7蛋白表达情况比较(例)

2.3 甲状腺癌组织中TIPE2、MCM7蛋白表达的关系 相关性分析显示，甲状腺癌组织中TIPE2、MCM7蛋白表达呈负相关(r=-0.582,P<0.05)。

3 讨论

流行病学显示，在合并有甲状腺功能亢进、甲状腺结节等的人群中，甲状腺癌发病风险较高，病死率或者无瘤生存时间等预后指标较差[5,6]。现阶段临床上通过手术或综合放化疗措施，能够提高甲状腺癌的总体治疗水平[7,8]。但长期的随访研究证实，甲状腺癌治疗后生存转归的改善仍然不明显，治疗后远期器官转移的发生风险仍然较高[9]。

临床上，甲状腺癌的发生机制仍不清楚。一般认为，甲状腺癌具有遗传易感基因的携带、放射性物质的接触史等，均能增加甲状腺滤泡上皮细胞异常增殖的风险，导致癌细胞转录水平改变。TIPE2蛋白的表达能够稳定癌细胞的细胞周期，降低G1/S期细胞比例，提高上皮细胞的分化成熟能力，降低上皮细胞的调控异常导致的DNA持续性扩增。基础领域的研究也表明，TIPE2蛋白的表达能够稳定肿瘤坏死因子家族成员，降低炎症反应在早期恶性肿瘤细胞增殖过程中的促进作用[10]；MCM7蛋白是重要的染色体结构调节蛋白，MCM7蛋白的表达能够提高染色体DNA的扩增速度，并能够通过甲基化或者磷酸化的修饰功能，提高癌细胞的浸润和黏附能力[11,12]。部分研究探讨了MCM7蛋白在消化系统恶性肿瘤发生过程中的作用，认为MCM7蛋白阳性表达是促进肿瘤患者临床分期进展、癌细胞浸润深度增加的重要因素，但对于TIPE2蛋白的表达分析研究不足。

本研究发现，TIPE2、MCM7蛋白在甲状腺癌病灶组织中的阳性表达率明显变化，其中TIPE2蛋白阳性表达率明下降，而MCM7蛋白阳性表达率上升，且二者表达呈负相关，提示了不同的生物学蛋白均影响到了甲状腺癌的病情进展过程。荟萃国内外相关基础方面的研究，笔者认为TIPE2、MCM7蛋白异常表达促进甲状腺癌的发生主要与下列因素相关：①TIPE2蛋白表达下降，影响到了甲状腺滤泡上皮细胞的基因错配修复能力，导致上皮细胞的DNA突变风险增加，影响到了癌基因的转录活性；②MCM7蛋白表达水平的改变，能够提高甲状腺上分化障碍的风险，诱导下游AKT或者MAPK信号通路蛋白的激活，促进肿瘤细胞的浸润。李义等[13]通过分析62例甲状腺癌患者的免疫组化资料发现，MCM7蛋白表达水平可平均上升18%以上，同时在癌细胞分化程度较差或者细胞异质性较为明显的甲状腺癌患者中，MCM7蛋白表达水平可进一步上升。本研究发现，TNM分期Ⅰ期+Ⅱ期、未发生淋巴结转移的甲状腺癌组织中TIPE2蛋白阳性表达率高于临床分期较晚、发生淋巴结转移者，提示TIPE2蛋白能够影响甲状腺癌的进展。这主要由于TIPE2蛋白表达下降，失去了其对于癌细胞的浸润能力、突破基底膜能力或者淋巴结黏附能力的调控有关。而在临床分期较晚或者发生了淋巴结转移的甲状腺癌组织中，MCM7蛋白阳性表达率上升。这提示MCM7蛋白阳性表达能够显著促进甲状腺癌的病情进展，提高癌细胞的转移风险。由上可见，甲状腺癌组织中TIPE2蛋白表达下调、MCM7蛋白表达上调，并且与肿瘤的分期密切相关，二者在甲状腺癌的发生发展中起重要作用。