HPLC测定排毒养颜胶囊中番泻苷A、番泻苷B含量

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(1.成都中医药大学 药学院，四川 成都 611130;2.成都市食品药品检验研究院，四川 成都 610045)

排毒养颜胶囊(原名：通便消痤胶囊)收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册[1]，处方由大黄、白术、西洋参、芒硝、枳实、青阳参、小红参、肉苁蓉、荷叶等9味药材组成，现标准只有大黄的薄层鉴别。大黄为多基原中药，作为方中君药，其泻下通便主要活性成分为番泻苷A、番泻苷B，而不同基原、不同产地、不同生长年限、栽培、野生等因素对大黄中番泻苷A、番泻苷B的含量影响较大[2-5]。目前尚未有测定排毒养颜胶囊中番泻苷A和番泻苷B含量的报道，为进一步完善排毒养颜胶囊的质量评价体系，保证其临床用药的有效性，本试验采用高校液相色谱法，对制剂中番泻苷A和番泻苷B两种成分进行了含量测定研究，现报道如下。

1 仪器与材料

Agilent 1260 高效液相色谱仪；ME-204E电子天平；XPE-26电子天平；SK250H超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。番泻苷A对照品(批号：110824-201301，纯度94.7%)、番泻苷B对照品(批号：110825-201502，纯度95.6%)均由中国食品药品检定研究院提供。排毒养颜胶囊由云南盘龙云海药业有限公司提供，规格：0.4g/粒。流动相中乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Sepax-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-5 mmol/L四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=5.0)(15∶85)为流动相，流速1.0 mL/min；检测波长340 nm；柱温35 ℃；进样量10 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取番泻苷A、番泻苷B对照品各适量，置于100 mL容量瓶中，用0.1 %碳酸氢钠溶液溶解并稀释至刻度，制成混合对照品溶液(番泻苷A和番泻苷B浓度分别为2.635 mg/mL、1.086 mg/mL)，色谱见图1。

2.2.2 供试品溶液 精密称取本品内容物5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入0.1 %碳酸氢钠溶液20 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率：250 W，频率：50 kHz)15 min，放冷，称重，用0.1 %碳酸氢钠溶液补足失重，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，即得。色谱见图1。

图1 高效液相色谱

2.3 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液0.1、0.25、0.5、1.25、2.5、5 mL分别置于10 mL容量瓶中，加0.1%碳酸氢钠溶液稀释至刻度，摇匀。精密取上述6种不同浓度的对照品溶液各10μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以对照品进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得到番泻苷A和番泻苷B的回归方程分别为：Y=123.34X-0.936 8(R2=1)、Y=119.7X-0.6324(R2=1)，分别在0.002 635～0.131 75μg、0.001 086～0.054 30 μg范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，番泻苷A和番泻苷B峰面积平均值分别为3 204.7、1 287.3，RSD分别为0.22%、0.07%，结果表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验

取同一批样品(170321)粉末，每份约5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积并计算含量。结果，番泻苷A和番泻苷B含量的平均值分别为1.358 5 mg/g、0.553 7 mg/g，RSD分别为0.83%、0.85%，表明该方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取同一批样品(批号170321)适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，于第0、2、4、8、12、24 h进样，测得番泻苷A和番泻B峰面积的RSD分别为0.86%、0.84%，表明供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。

2.7 加样回收试验

取已知含量的同一批样品(170321)6份，每份精密称取0.2 g，分别加入番泻苷A和番泻苷B对照品适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.8 样品含量测定

取不同批次样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，每批平行制备2份，在“2.1”项色谱条件下测定。结果见表2。

3 讨论

试验中分别考察了乙腈-5mmol/L四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=5.0)(15∶85)[6]、乙腈-0.1%三氟乙酸(梯度洗脱)、乙腈-0.1%磷酸(梯度洗脱)[7,8]、甲醇-0.1%磷酸(梯度洗脱)[9，10]等多个流动相体系。发现只有在使用乙腈-5mmol/L四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=5.0)(15∶85)作为流动相时，杂质干扰少，供试品分离度好，基线较平稳。

表2 样品含量测定结果 (mg/粒)

本试验虽能适用于排毒养颜胶囊的质量监测，但流动相中的四庚基溴化铵对实验人员、色谱仪器、环境的损害较大，尚需开发一种检测条件温和、环保、色谱分离度高、准确性高的分析方法。