毕长红
(吉林省德惠市动物疫病预防控制中心,吉林 德惠 130300)
病料应在尸检时采取,选取的材料按规定经处理、保存、包装后才能寄送,寄送时附上病例报告、尸检记录及其他有关说明。
采取的组织应具有代表性,选取典型病变部位,并连同邻近的健康组织。心应包括心肌及内、外膜,肾要皮质、髓质完整,胃肠应使各层相连。
用作切片的组织块大小可依具体情况而定,一般为长和宽各约1 cm,厚0.3~0.5 cm。但在尸检取材时可适当大些,经固定后再按上述大小修整。组织块一般可用10%福尔马林(甲醛一份加水9份)固定,也可用其他固定液(95%酒精)固定。固定液的量至少要大于组织块体积的5倍。固定时间1~2 d,不同的病例,应在不同的容器中固定,或分别用纱布包裹后在较大的同一容器中固定,但要用铅笔书写标号以便区别。
固定好的组织块用固定液浸湿脱脂棉和塑料纸包裹,装入广口瓶中,用蜡和胶布封口;或装入不漏水的双层塑料袋中,结扎袋口。然后将广口瓶或塑料袋放入有填料的木盒内寄送即可。
一般应在病的早期采集病料,不同的病毒传染病其病料的采取部位亦不同。急性全身感染(如猪瘟),应在高热期采血;呼吸道感染则采取鼻道深处和咽喉部的黏液;水泡性疹(如痘、口蹄疫),采取水泡液或水泡皮。死后尸体剖检可采取组织器官病料,如脑脊髓组织(狂犬病)、肺(流感)、脾(猪瘟)等。所采取的组织块、应浸在50%甘油盐水中送检。天气热时,应在冰瓶中冷藏送检。
检验室接到病料后,应做如下处理:液体病料,如血液和脑脊髓液等,可直接接种实验动物或进行培养。棉花拭子,洗于pH 7.2~7.4 的等渗磷酸盐缓冲液中,然后接种或培养。组织块、水泡皮等,置乳钵中加入pH 7.2~7.4 的磷酸盐缓冲液研碎(1:10悬液),离心后取上清液接种或培养。病料污染严重,用滤器过滤后使用。利用细菌滤器过滤病料,可以将病毒从污染材料中分离。根据所用滤器的孔径,还可以粗略地知道病毒的大小。
血液:生前采血,可从静脉(牛、羊)、耳静脉(猪)或翅静脉(禽)无菌采取血液5~10 mL,注入加有5%枸橼酸钠溶液0.5~1 mL 的小试管中,立即加塞混匀。某些慢性传染病常采血清进行检验,可在无菌操作下抽取被检畜禽血液5~10 mL,置于灭菌试管中,摆成斜面,待血液凝固,血清析出后,以灭菌吸管吸出置于灭菌的小瓶中,加塞送检。
乳汁:乳头、乳房以及术者的手,先用0.1%的新洁尔灭清洗消毒,将最初挤出的乳扔掉,然后采乳10~20 mL,注入灭菌试管中。
浓汁、水泡液等:用灭菌注射器抽取,注入灭菌试管中。
鼻液:以灭菌棉签取鼻黏膜上分泌物置于灭菌试管中。如疑似病毒材料,可将棉签上的分泌物洗入加有抗生素的肉汤中。
淋巴结、肝、脾、肺、肾等:淋巴结可连周围脂肪整个采取,其他器官可在病变明显部位采取1~4 cm2小方块或更大一些,分别置于灭菌容器中。
肠:选取适当肠段7~10 cm,两端结扎,在结扎线外剪断,置于灭菌容器中。
脑:可将其浸入50%甘油盐水中,或将整个头割下,用浸过0.1%升汞溶液纱布包好,装箱送检。
粪、尿:挑取新鲜少许粪便(约1 g)置于小瓶内,尿液可用导尿管采取,20~30 mL,立即送检。
小家畜、家禽尸体及流产胎儿:可用消毒液浸过的纱布包裹后装入塑料袋中送检。
如不能及时送检,最好采取冷藏法,可在病料装瓶后,置于冰瓶中送检。也可将病料置于保存液中,细菌检验用材料,可用30%甘油缓冲液;病毒材料可用50%甘油缓冲液或鸡蛋生理盐水液。血清可在每mL 中加入3%~5%石碳酸溶液1~2 滴进行保存。为了能长期保存或留待研究及送有关单位鉴定,必须固定保存。寄生虫材料的保存方法:吸虫和绦虫用生理盐水洗净,使其自然死亡,取绦虫的头节、成熟节片、孕节或吸虫用滤纸吸干,放在两张玻片中轻压,两端轻轻用橡皮筋扎紧,放在10%福尔马林液固定保存。线虫和棘头虫虫体洗净后投入加热至70 ℃的5%福尔马林中固定,待冷却后取出保存于巴氏液或甘油酒精中。蠕虫虫卵用各种集卵法浓集的虫卵。把福尔马林液加热至将沸,立即倾入粪便沉淀物中,摇匀,保存。昆虫通常用干燥法保存。先放在毒瓶中杀死,用针插法晾干,存放在装有樟脑丸的虫盒内,昆虫、虱、螨等可保存于70%酒精中。
包装要密封,且防止容器破裂,尤其是对危险的传染病病料,可将盛放材料的容器口用蜡密封,装入木盒、金属盒或较大的玻璃器皿中,中间填以纸屑、棉花等,以免损坏。病料的记录与送检时,病料的容器均应有标签,写明编号、宿主、病料名字、采集时间及地点等,详加记录。送检单位一式三份,一份存查,两份送往检验单位,检验完毕退回一份。微生物检验材料尽可能专人送检。送检时避免高温、振动和冲撞。