成都地区β珠蛋白生成障碍性贫血基因携带合并妊娠患者的基因型及表现型分析

王 慧，李 贝，肖雪莲，童 闻，韩 笑，马 健

(四川锦欣妇女儿童医院检验科,四川成都 610000)

β珠蛋白生成障碍性贫血(原名地中海贫血，简称地贫)是世界上最常见的单基因遗传性疾病之一，是由于第11号染色体的β珠蛋白基因簇发生缺失或点突变导致血红蛋白链合成缺失或不足，从而引起的以贫血为主要表现的溶血性疾病。目前世界上已发现超过200种β珠蛋白基因变异，国内已报道的有46种突变型和5种缺失型。β地贫表型变化的严重程度与其β基因型相关，根据表型不同分为β贫血基因携带者、中间型和重型。重型β地贫的溶血和无效造血目前尚无确切有效的、普及的根治方法，患者只能依赖规律输血和应用铁螯合剂维持生命，如不治疗多会在青少年期死亡。造血干细胞移植虽为根治的主要方法，但手术要求高，配型难，费用巨大，给患者家庭及社会均带来沉重负担。面对这一世界公认的公共卫生问题，目前有效预防β地贫的方法是通过产前筛查，对筛查高风险的胎儿进行产前诊断，从而阻止重症胎儿的出生。β地贫高发于地中海沿岸地区及东南亚一带，我国地贫主要集中在两广、海南、福建及云贵川等南方地区[1-4]。四川成都地区作为地贫高发地，人群中β地贫基因携带率虽高，但流行病学调查、产前筛查及产前诊断工作才开始在基层普及。为了了解四川成都地区β地贫合并妊娠患者的表型与基因型特点，本文对2016年3月至2017年6月来本院建档并确诊为β地贫的孕妇进行研究分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2016年3月至2017年6月来本院建档并确诊为β地贫的孕妇作为研究对象，年龄(28.0±4.5)岁，孕8～15周，均为汉族人。所有研究对象能自主表达意愿，并签署相关知情同意书，排除缺铁性贫血及其他贫血疾病、严重器官疾病及严重精神性疾病。

1.2方法

1.2.1血常规分析 抽取受试者外周静脉血4 mL[乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝]待检。所有标本在采集后12 h内用迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪进行血常规检测，严格按照说明书操作。

1.2.2碱性血红蛋白电泳 所有标本在采集后24 h内用海伦娜SPIFE3000进行碱性血红蛋白电泳检测，严格按照说明书操作。

1.2.3地贫基因分析 所有标本在采集后24 h内用β地贫基因检测试剂盒(亚能生物技术有限公司)进行反向斑点杂交法基因检测分析17种常见β地贫基因[CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654、β EM、TATAbox-28、CD71-72、CD43、TATAbox-29、CD27-28、CAP+40-+43(以下简写为CAPM)、IVS-Ⅰ-1、CD31、TATAbox-32、TATAbox-30、CD14-15、Int和IVS-Ⅰ-5]，所有标本严格按照说明书操作。

2 结 果

2.1320例患者各基因型构成情况 320例阳性标本中有306例单独β基因杂合突变和14例合并α地贫的β突变，分别分析如下。

2.1.1单独β基因杂合突变型构成情况 306例单独β基因杂合突变共包括10种突变类型，其中，占前3位的突变分别为CD17(101例，占33.01%)，CD41-42(74例，占24.18%)，IVS-Ⅱ-654(68例，占22.22%)，前3种共占突变的79.41%；前6种突变(CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654、β EM、TATAbox-28、CD71-72)占突变的95.42%。按基因型分成CAPM组、β EM组(简写为E组)、TATAbox-29组(简写为-29组)、TATAbox-28组(简写为-28组)、CD27-28组(简写为27-28组)、IVS-Ⅱ-654组(简写为654组)、CD41-42组(简写为41-42组)， CD43组(简写为43组)、CD17组(简写为17组)和CD71-72组(简写为71-72组)，共10个组。见图1。

图1 单独β基因杂合突变型构成情况

2.1.2合并α地贫的β突变型构成情况 14例合并α地贫的β突变中，有6种不同组合，分成6组，见图2。

图2 合并α地贫的β突变型构成情况

2.2各组碱性血红蛋白(Hb)电泳结果的比较

2.2.1β基因杂合突变异常带与A2值分析 在306例β基因杂合突变标本中，A2异常者为306例，其中A2值大于参考值上限(3.50%)的为284例(占92.8%)，A2值小于参考值下限(2.50%)的为1例(占0.3%)，未测得A2值的21例(占6.9%)。值得注意的是，未测得A2值的21例标本突变类型均为β EM，由于其出现异常带且异常带的位置与A2值位置太靠近，用本实验室现有方法无法区分，因此无法测得A2值，见表1。根据数据分析，E组均发生异常条带，此外，17组、41-42组、65组4、-28组、27-28组也发生异常条带表型。

2.2.2β基因合并α基因突变型A2值 14例合并α地贫的β突变标本中，A2异常者为14例，其中A2值大于参考值上限(3.50%)的为13例(占92.9%)，A2值正常(2.50%～3.50%)的为1例(占7.1%)，均无异常条带。见表2。

2.3各组血常规参数比较

2.3.1β基因杂合突变标本平均红细胞体积(MCV)分析 E组的MCV显著高于除CAPM外的其他组，-29组、-28组MCV显著高于654组、41-42组、43组、17组、71-72组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见图3。

2.3.2β基因杂合突变标本平均红细胞血红蛋白含量(MCH)分析 E组及-28组的MCH显著高于除CAPM外的其他组，-29组MCH显著高于43组和71-72组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见图4。

表1 β基因杂合突变异常带与A2值分析

注：-表示因技术原因无法测出

表2 β基因合并α基因突变型A2值

注：与E组比较，*P<0.05;与-29组、-28组比较，#P<0.05

图3 β基因杂合突变标本MCV分析

注：与E组、-28组比较，*P<0.05;与-29组比较，#P<0.05

图4 β基因杂合突变标本MCH分析

2.3.3β基因杂合突变标本平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)分析 E组MCHC显著高于-28组、654组、41-42组、43组、17组及71-72组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见图5。

注：与E组比较，*P<0.05

图5 β基因杂合突变标本MCHC分析

2.3.4β基因杂合突变标本Hb分析 E组、-29组、-28组的Hb显著高于654组、41-42组、17组及71-72组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见图6。

注：与E组、-29组、-28组比较，*P<0.05

图6 β基因杂合突变标本Hb分析

2.3.5β基因杂合突变标本其他情况分析 在306例β基因杂合突变标本中，仅发现1例CAPM型，MCV为90.2 fL，MCH为29.4 pg，MCHC为326 g/L，Hb为122 g/L，A2为2.41%。该样本无常规β地贫的小细胞低色素性贫血的血液学表现，在初筛的时候容易漏诊，值得注意。且A2的值不升高，与其他β地贫杂合突变明显升高不同，需要进一步了解原因。

2.3.614例合并α地贫的β突变标本其他情况分析 14例合并α地贫的β突变标本中，虽有6种不同组合，但由于标本数量较少，统计分析困难，以各项血常规指标区间分析：MCV 67.8～76.4 fL，MCH 21.2～24.4 pg，MCHC 307～326 g/L，Hb 94～119 g/L。该组标本均表现出血常规的小细胞低色素性，但贫血情况不明显，在初筛的时应注意。

3 讨 论

地贫是临床常见的遗传性溶血性贫血，世界人口携带率约为1.5%，每年有20万以上的新生儿携带此基因出生。据报道，我国南方地区β地贫的平均携带率为1.00%～7.00%，而广西地区高达6.43%，四川地区携带率2.18%，各民族间β携带率有一定差异，海南黎族人群的携带率高达8.00%～11.60%[2]。近年由于社会发展人口流动，各区域之间人群携带率可能发生变化。

β地贫的基因缺陷以点突变为主，本研究检出的10种突变类型，均在国内已报道的46种突变类型中。其中，本研究中占前3位的突变分别为CD17、CD41-42及IVS-Ⅱ-654，前3种共占突变的79.41%；前6种突变(CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654、βEM、TATAbox-28、CD71-72)占突变95.42%。这与重庆、两广、泸州、贵州、云南等地报道，差异有统计学意义(P<0.05)[6-11]，说明地贫的基因型分布有明显的地域差异。针对这些常见类型进行有效的婚前、孕前检查，可以有效降低重型β地贫患儿的出生率。此外，合并α地贫的β突变在此次研究中占比4.4%，此类孕妇虽然临床表型有所改善，但生产中型或重型地贫患儿的概率更大。因此，建议此类人群以家庭为单位进行地贫筛查、产前诊断，从而减少中型或重型地贫患儿出生。

目前血常规参数和Hb电泳被联合作为地贫筛查的重要指标。因地域差异各地采用不同的方法和指标，但相同的是需排除同样表现为小细胞低色素性缺血性贫血(IDA)[12-13]。目前，我国推荐的地贫初筛标准为MCV<80 fL、MCH<27 pg[14]。然而，有研究发现地贫基因携带者中有MCV>80 fL的情况[15]。本次研究的320例β地贫阳性样本中，有19例MCV>80 fL，占5.9%。有13例MCH>27 pg，占4.0%。提示全国范围的地贫初筛标准范围可能稍窄，β地贫的人群携带率可能更高。行业内普遍将血红蛋白A2(HbA2)升高或血红蛋白F(HbF)升高或出现异常带作为β地贫发生的必要表现，因此，对Hb结果阴性的患者做出不携带此基因的判断。本研究结果发现，5例(占1.6%)β地贫杂合突变，其HbA2不升高甚至有1例低于正常范围。这提示仍然存在一些HbA2不升高的β地贫携带者，在做报告解释和遗传咨询时应该注意，对配偶一方已确诊为β地贫携带者的，另一方在做地贫初筛和确诊时更应多重考虑。另外，血液学表型与β地贫突变型别有一定关系，可以联合考虑。

4 结 论

四川地区的β地贫基因携带率较高，存在多种突变类型。应针对地区分布特点，开展常规的地贫筛查。对筛查阳性的病例进行针对性的基因检测，从而从患者优生优育的角度做好遗传咨询是防治β地贫的有效策略。