几种新型毒品在急性中毒大鼠体内死后再分布情况的探索

代 勇， 李华云， 周晓英， 龚 冶， 蔡玉刚

(1.四川警察学院刑事科学技术系， 四川泸州 646000； 2.西南医科大学附属医院， 四川泸州 646000；3.泸州市公安局， 四川泸州 646000)

0 引言

新型毒品，常被称作 “俱乐部药”、“休闲药”、“舞会药”等，主要为人工化学合成的毒品，所以又被称作 “实验室毒品”、“化学毒品”。我国主要将新型毒品分为4类：第一类是以中枢兴奋作用为主，代表物是包括甲基苯丙胺(俗称“冰毒”)在内的大部分苯丙胺类兴奋剂；第二类是致幻剂，如麦角乙二胺(LSD)、麦司卡林和氯胺酮(俗称“K粉”)；第三类是兴奋致幻剂，以3，4-亚甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA，俗称“摇头丸”)为代表；第四类则以中枢抑制作用为主，包括三唑仑、γ-羟基丁酸等[1-4]。药物滥用是指反复、大量地使用具有依赖性特性或依赖性潜力的药物,属于非医疗目的用药。随着滥用行为日渐广泛，联合滥用也逐渐普遍，并且针对特定滥用物质组合出现特定称谓，如MDMA和LSD合用称为“candy flipping”，MDMA和致幻菌素联用则称为“hippy flipping”，MDMA和K粉合用称为“kippy flipping”[5]。自上世纪以来，多药滥用现象十分普遍，已成为主要的药物滥用模式。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：Agilent-1200 series液相色谱仪，配G6130A质谱仪；色谱柱为键合EC-C18柱(4.6×100 mm，2.7 μm；Agilent公司)。萃取头(美国Supelco公司)：85 μm聚丙烯(PA) 、100 μm聚二甲基硅氧烷(PDMS)、60 μm聚二甲基硅烷- 二乙烯基苯共聚物萃取头(PDMS/DVB)，SPME 进样器(美国Supelco公司)，CORNING固相微萃取采样台(美国Supelco公司)，GPA224S万分之一分析天平(Sartorius公司)；KH3200E型超声清洗仪(上海声源超声波仪器设备有限公司)；XH-B型旋涡混合器(江苏康健医疗用品有限公司)；JJ-2型组织匀浆机(荣华仪器制造有限公司)；TG-16高速离心机(四川蜀科仪器有限公司)、移液枪(德国Eppendorf公司)。

试剂：盐酸亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)、盐酸氯胺酮标准品，盐酸氯胺酮注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司)，均由泸州市公安局提供。甲醇、乙腈均为色谱纯，乙酸铵等其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

动物：SPF级Wistar大鼠48只，体重250±15.29 g。由成都达硕实验动物有限公司提供，使用许可证号：SYXK(川)2013-098，饲养于清洁恒温室中，动物室内的温度为24 ℃，相对湿度为50%～60%，保持12 h光照循环，自由摄食饮水。

1.2 急性染毒模型的建立

将48只Wistar大鼠随机分成4组，分别为A组(氯胺酮组)、B组(MDMA组)、C组(联合用药组)、D组(对照组)，每组12只。禁食不禁水12 h。A组按120 mg·kg-1剂量灌胃，B组按120 mg·kg-1剂量灌胃，C组按A和B组剂量灌胃，D组给与同等体积的生理盐水，同时观察大鼠的行为表现。2 h后，将4组大鼠颈椎脱臼处死，室温下仰卧放置，分别于0 h、6 h、12 h、24 h、48 h进行解剖取材(心血、心肌、肝、肾、脾、肺)。

1.3 样品处理

将大鼠心血或者组织(心肌、肝、肾、脑、肺)剪碎，加入0.5倍生理盐水，匀浆，准确量取1 mL大鼠心血或者称取1 g组织匀浆液放入10 mL样品瓶中，放入磁搅拌子，拧紧瓶盖，将样品瓶置于SPME专用采样台上于35 ℃下加热搅拌，同时将经老化过的含60 μm聚二甲基硅烷- 二乙烯基苯共聚物萃取头(PDMS/DVB)的SPME针管插入样品瓶中，推出萃取纤维头，使之浸入样品液中萃取10 min后取出，再将SPME针管插入SPME/HPLC接口解吸池中解析1 min后，进行数据采集。

1.4 仪器分析条件

色谱条件：采用EC-C18柱(4.6×100 mm，2.7 μm)色谱柱，以0.1%(v/v)甲酸(A)-甲醇(B)作为流动相，梯度洗脱：0～6 min，70%A→30%A，6～7 min，30%A→10%A，保持2 min。流速0.2 mL·min-1，进样量1 μL，柱温40°。

质谱条件：采用电喷雾电离源正离子扫描(ESI+)，SIM模式；干燥气(N2)流速：10 L/min，干燥器温度：350°，雾化电压3 kV，数据采集0～7 min。待检测物的SIM监测离子和碰撞能见表1。

表1 SIM监测离子和碰撞能

1.5 数据处理

采用SPSS19.0统计软件对数据进行统计分析，结果采用均数±标准差表示。

2 结果

2.1 染毒后大鼠的反应观察

给药后，A组与D组相比，大鼠活动异常活跃，上蹿下跳，发出“唧唧”的尖叫声，给药15 min后，A组大鼠有浅快呼吸、四肢震颤现象； B组、C组的大鼠与D组相比，给药20～30 min后开始出现均全身震颤、头部晃动明显、呼吸频率加快、性情凶猛、难以捕捉的现象。

2.2 死后48 h内大鼠各组织中氯胺酮的浓度变化

死后48 h内，采集大鼠心血、心肌、肝、肾、脾、肺，经检验后得到A组和C组大鼠各组织中氯胺酮的浓度，详细值见表2。以采集时间(h)为横坐标，氯胺酮的浓度(μg·mL-1或μg·g-1)为纵坐标，做死后48 h内各组织氯胺酮浓度变化曲线图，结果见图1。死后0 h，A组和C组各组织氯胺酮的浓度分布基本一致，依次为：肾、肝、脾、心肌、肺、心血(C组的肝浓度稍高于肾浓度)。随着死后时间的延长，A组和C组的大鼠各组织均呈现一定的变化，死后48 h和死后0 h心血浓度之比分别为280%和290%，心肌浓度之比分别为77%和103%，肝脏的浓度之比分别为165%和80%，肾脏的浓度之比分别为106%和108%，脾的浓度之比分别为139%和60%，肺的浓度之比分别为146%和199%。

2.3 死后48 h内大鼠各组织中MDMA的浓度变化

死后48 h内，采集大鼠心血、心肌、肝、肾、脾、肺，经检验后得到B组和C组大鼠各组织中MDMA的浓度，详细值见表3。以采集时间(h)为横坐标，MDMA的浓度(μg·mL-1或μg·g-1)为纵坐标，做死后48 h内各组织MDMA浓度变化曲线图，结果见图2。死后0 h，B组和C组各组织MDMA的浓度分布基本一致，依次为：肝、脾、肺、心血、心肌、肾(C组的肾浓度稍高于心肌浓度)。随着死后时间的延长，B组和C组的大鼠各组织均呈现一定的变化，死后48 h和死后0 h心血浓度之比分别为495%和462%，心肌浓度之比分别为529%和637%，肝脏的浓度之比分别为454%和372%，肾脏的浓度之比分别为964%和900%，脾的浓度之比分别为351%和388%，肺的浓度之比分别为477%和89%。

表2 死后48 h内不同时间点大鼠各组织中氯胺酮的浓度(μg·mL-1或μg·g-1)

图1 大鼠死后48 h内各组织中氯胺酮的浓度变化曲线图

3 讨论

随着大鼠死后时间的延长，外周血的采集越困难，所以本实验仅取了心血作为检测的体液样本。实验采用的提取方法为固相微萃取法，该方法使用的萃取头非常纤细，易折断，所以各组织的匀浆应该尽量均匀，避免萃取头被破坏。

表3 死后48 h内不同时间点大鼠各组织中MDMA的浓度(μg·mL-1或μg·g-1)

图2 大鼠死后48 h内各组织中MDMA的浓度变化曲线图

氯胺酮的亲脂性较好，与血浆蛋白结合相对较少，进入体循环后可以迅速分布到血液运输较为丰富的组织，在2 h可达到峰浓度。在本实验中，只灌胃氯胺酮的大鼠在死后48 h内心血、肺部的氯胺酮浓度呈上升趋势，肾脏和脾脏呈先上升后下降趋势，说明在大鼠死后，氯胺酮存在再分布现象。大剂量的氯胺酮给药时，体内代谢情况与正常的代谢有所不同，氯胺酮在体内大量蓄积，并未被代谢，当大鼠死后，氯胺酮浓度较高的组织如肾脏开始向肝脏等部位进行转移，形成了再次分布。氯胺酮在肝脏中的浓度较高，可能因为65%～85%的氯胺酮是经过肝P450酶代谢的，而肾中浓度较高可能与其主要肾脏排泄和肾小管重新收相关。MDMA是弱碱性药物，有一定的亲脂性，在小肠的吸收最为迅速。MDMA滥用会危及心血管功能，引发脑部供血损伤，还可能导致凝血功能障碍、肝损伤和肾衰竭。有研究表明，口服75 mg或125 mg MDMA后，血压和心率显著升高。服用125 mg的峰浓度达标时间远小于75 mg的峰浓度达标时间。本实验发现，大剂量灌服MDMA的大鼠在死后48 h内，各组织MDMA浓度均呈现不同程度的升高，说明在大鼠死后，氯胺酮存在再分布现象。同时灌胃氯胺酮和MDMA的多药滥用组大鼠死后48 h内，心血的变化趋势与单灌胃氯胺酮或MDMA组的变化趋势一致，均呈上升趋势，但是在心肌、脾和肝的变化趋势有所不同。