高血压心衰合并高尿酸血症患者hURAT1(T6092C)基因多态性对氯沙坦降尿酸疗效的影响

余广炜 刘青 吴文伟

[摘要] 目的 探讨hURAT1（T6092C）基因多态性对高血压心衰合并高尿酸血症患者服用氯沙坦疗效的影响。方法 方便选取2014年1月—2018年8月该院急诊科收治的高血压性心脏病、心功能不全合并高尿酸血症患者146例为研究对象，应用多聚酶链-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测146例患者的hURAT1（T6092C）基因多态性，同时观察不同基因组服用氯沙坦后尿酸值下降幅度的差异。结果 患者TT、TC、CC 3组基因型服用氯沙坦后尿酸值下降幅度差异有统计学意义（P<0.05），TT基因型个体血尿酸下降幅度为（132.3±62.7）μmol/L，高于TC（7.3±12.4）μmol/L和CC基因型个体（2.0±13.9）μmol/L。结论 氯沙坦对hURAT1（T6092C）基因突变的高血压性心脏病、心功能不全合并高尿酸血症患者疗效降低，应该注意联合用药提高疗效。

[关键词] hURAT1;氯沙坦;疗效;高血压;高尿酸血症;基因多态性

[中图分类号] R589          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2019）11（b）-0004-04

[Abstract] Objective To investigate the effect of hURAT1 （T6092C） gene polymorphism on the efficacy of losartan in patients with hypertensive heart failure complicated with hyperuricemia. Methods Convenient selected a total of 146 patients with hypertensive heart disease， cardiac insufficiency and hyperuricemia admitted to the hospital from January 2014 to August 2018 were enrolled in the study. Polymerase-restriction fragment length polymorphism was used. The （PCR-RFLP） method was used to detect the hURAT1 （T6092C） gene polymorphism in 146 patients， and to observe the difference in the decrease in uric acid value after taking losartan in different genomes. Results There was a statistically significant difference in the decrease of uric acid value between patients with TT， TC and CC genotypes after taking losartan （P<0.05）， the decrease of blood uric acid in TT genotype was （132.3±62.7）μmol/L， higher than TC （7.3±12.4）μmol/L and CC genotype （2.0±13.9）μmol/L. Conclusion Losartan is effective in the treatment of hypertensive heart disease， cardiac insufficiency and hyperuricemia with hURAT1 （T6092C） gene mutation. It should be noted that the combination therapy can improve the curative effect.

[Key words] hURAT1; Losartan; Efficacy; Hypertension; Hyperuricemia; Genetic polymorphism

近年來，较多研究显示，血尿酸水平的升高是引发心血管疾病的一个重要危险因素，且其与血脂异常、肥胖症、高血压的发生有关。高血压所致高血压性心脏病及最终发展至心功能衰竭是许多高血压患者致死率的主要原因。该文研究了高血压心衰合并高尿酸患者在基因多态性层面对氯沙坦降尿酸疗效的影响，指导临床进一步在药物基因组层面进行该类患者尿酸水平的控制。该院方便选取2014年1月—2018年8月该院急诊科收治的高血压性心脏病、心功能不全合并高尿酸血症患者146例为研究对象展开研究，现报道如下。

1  对象与方法

1.1  研究对象

该研究对象为方便选取该院收的高血压心脏病、心功能不全合并高尿酸血症患者，共146例。高血压心脏病、心功能不全入选标准为根据中国高血压指南及中国心衰指南要求，高血压诊断标准：成人：舒张压≥95 mmHg，收缩压≥160 mmHg，临界高血压：90 mmHg<舒张压<95 mmHg，或140 mmHg<收缩压<160 mmHg，同时符合心功能不全诊断标准（每例患者均行心脏彩超检查，（LVEF<40%，NT-proBNP>125 ng/L），并符合高尿酸血症入选标准。该研究所选病例均经伦理委员会批准，患者均曾经口服或间断口服过该药物，均知情同意。

1.2  实验试剂与仪器

①利用PCR-RFLP方法建立hURAT1（T6092C）基因分型体系。hurat1 T6092C基因引物根据Jean-Sebastien Hulot等文献设计上游引物：3-CCAGAACGAAAGTCGGTA-5，由上海英骏生物技术有限公司合成下游引物：5-ACAGCATCCCAACCACAATC-3。酶切位点应用Restrictin Enzyme Site Mapper version 3 软件查找。酶切后酶切产物在3%琼脂糖凝胶电泳后，紫外光下观察结果：PCR扩增片段总长度为539 bp，含CC等位基因的突变型纯合子凝胶电泳仅539 bp一条带;含TT等位基因的野生型凝胶电泳显示357 bp和182 bp两条带;而含TC等位基因的突变型杂合子则显示539 bp、357 bp和182 bp 3条带。

②测序验证。选取所分型的PCR扩增产物样本50 μL送至英骏生物公司（中国上海）进行测序验证。

③分组治疗。各基因型患者均口服氯沙坦片（50 mg，H20130409）10～14 d（50 mg/d）。

1.3  统计方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，正态性检验方法采用K-S检验法（Kolmogorov-Smirnov Test），并行方差齐性Levene检验，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验;计数资料以[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，若四格表有格子1≤T<5，则应用Fisher精确检验进行分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  Hardy Weinberg遗传平衡检验

146例高尿酸血症合并高血压患者中，SLC22A12 T6092C分别经Hardy Weinberg遗传平衡检验软件检验基因型分布频率观测值与预计值之间差异无统计学意义（P>0.05），与Hardy-Weinberg遗传平衡相符合，说明样本具有一定的代表性，均来自一个处于随机婚配、较大的平衡状态的群体。

2.2  高尿酸血症合并高血压患者组用药前不同基因型临床资料的比较

参与实验的146例高尿酸血症合并高血压性心脏病、心功能不全患者治疗前的基因分型、一般情况及实验分组见表1。

2.3  高尿酸血症合并原发性高血压组服用氯沙坦前后3组基因型间尿酸测定值比较

氯沙坦治疗前及10～14 d后尿酸测定值比较，在SLC22A12 TT野生型个体治疗前后差异有统计学意义（P<0.01），在SLC22A12  TC突变型杂合子个体治疗前后差异有统计学意义（P<0.05），在SLC22A12  CC突变型纯合子个体治疗前后差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2.4  服用氯沙坦后3组基因型间尿酸测定值下降幅度比较

氯沙坦治疗10～14 d后尿酸测定值下降幅度比较，TT、TC、CC 3组基因型个体尿酸下降幅度分别为（132.3±62.7）μmol/L、（7.3±12.4）μmol/L、（2.0±13.9）μmol/L，3组之间方差分析比较差异有统计学意义（P<0.001），两两比较显示，在SLC22A12  TT野生型个体下降幅度较SLC22A12  TC突变型纯合子个体明显（P<0.01），在SLC22A12 TC突变型杂合子个体较SLC22A12  CC突变型纯合子个体明显，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3  讨论

人尿酸盐阴离子交换器（hURAT1）是由SLC22A12基因所编码的，SLC22A12基因主要定位在11q13，其cDNA编码区长1 659 bp，全长2 642 bp，含有9个内含子和10个外显子，由其编码的氨基酸共555个[1]。hURAT1通过与少数无极阴离子和多种单价的有机阴离子交换来完成对尿酸的少量分泌及重吸收，其主要是重吸收在肾近端小管的尿酸，进而对血清中尿酸浓度发挥调节作用，是血清中尿酸水平达到动态平衡[2]。

尿酸在人类血清中的浓度主要是经过近端肾小管的重吸收来平衡的[3]。因此hURAT1对于调节人体血尿酸水平发挥着重要作用。hURAT1基因突变或者多态与高尿酸血症的发生存在相关性，Hamada 等[4]研究发现在高血压患者中hURAT1 的一些功能性突变比如G269A/C1429A/ G774A 会消除氯沙坦的降尿酸作用，其中TT基因型个体血尿酸下降幅度为（130.3±65.3）μmol/L， TC（6.8±11.5）μmol/L和CC基因型个体（2.0±12.8）μmol/L而hURAT1 未突变患者仍能降低血尿酸水平，因此该方面已经成为国内外学者研究的热点。与该次研究TT基因型个体血尿酸下降幅度为（132.3±62.7）μmol/L，高于TC（7.3±12.4）μmol/L和CC基因型个体（2.0±13.9）μmol/L相似，患者TT、TC、CC 3组基因型服用氯沙坦后尿酸值下降幅度差异有统计学意义（P<0.05），单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism， SNP）的检测方法多种多样，如等位特异性杂交，等位特异性PCR，PCR-单链构象多态性（PCR-SSCP），PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）和直接测序等[5]。该研究采用PCR-RFLP方法进行基因分型，每一个样本两次的PCR-RFLP分析结果均相同，并且与测序的结果相吻合，说明所有方法均有很好的可重復性和准确性。

药物基因组学主要是通过应用已知的基因组学理论，来分析遗传因素与药物反应的相关性，或者可以说是以药物安全性和药物效应作为主要研究目标，来分析药物学差异和药物动力学的基因特征，以及因基因变异而对不同个体对药物所作出的不同反应，其主要包括基因组学（genemics）与遗传药理学（phanacogenetics）[6-7]。药物基因组学的研究内容和基础是基因多态性。药物代谢酶多态性主要是因在同一个基因位点上存在多个等位基因所引发的，其多态性决定药物代谢酶活性和表型多态性，并呈现基因剂量-药效的关系，导致不同的个体发生不同的药物代谢反应，是丧失或降低药效及产生药物不良反应的主要原因之一。大多数药物能与其特异性蛋白发生相互作用而产生药物效应，药物作用靶点的基因多态性导致靶蛋白对特定药物存在不同的亲和力，这是产生药物产生不同疗效的原因之一[8-10]。该研究通过高血压心衰合并高尿酸患者在基因多态性层面对氯沙坦降尿酸疗效的影响进行分析，结果显示，治疗后，高尿酸血症合并原发性高血压组服用氯沙坦前后3组基因型间尿酸测定值均较治疗前降低，且治疗后SLC22A12  CC突变型纯合子个体的尿酸测定值明显高于SLC22A12  TC突变型杂合子个体、SLC22A12 TT野生型个体，SLC22A12 TT野生型个体尿酸水平下降幅度明显高于SLC22A12  CC突变型纯合子个体、SLC22A12  TC突变型杂合子个体，说明不同基因型患者发热疗效不同，与文献报道相符[11]，氯沙坦对基因型为SLC22A12 TT野生型个体效果更显著。国内有利用患者及健康志愿者进行的临床研究表明，服用氯沙坦后，突变基因型患者（TC/CC）的Ur和Cr的降低水平均明显低于TT基因型患者（P<0.05），并且TC和CC型患者的Ur降低幅度也明显低于TT基因型患者（P <0.05），URAT1基因6092T/C遗传变异影响氯沙坦的降尿酸疗效，并且可能是氯沙坦降尿酸潜在的遗传靶点[12]。药物基因组学主要是研究基因突变与药物安全性和疗效之间的关系，及其在基因水平的影响。研究药物反应多态性与等位基因多药性之间的相关性，主要是为了探讨如何预测个体的药物反应及如何降低研发成本、提高药物研发的特异性[13]。因此，药物基因组是以药物安全性和药物效应为目标，来研究个体间药物效应的差异，在分子水平上对药物作用靶位、药物疗效、毒副作用、作用模式进一步证明和阐述。

综上所述，氯沙坦对hURAT1（T6092C）基因突变的高血压性心脏病、心功能不全合并高尿酸血症患者疗效降低，应该注意联合用药提高疗效。

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（收稿日期：2019-08-15）