巢式聚合酶链反应检测血清中HBV-DNA对治疗乙肝的临床意义

向芳菲

（广州市第八人民医院，广东广州 510060）

HBV（乙型肝炎病毒）感染是一种社会常见的健康问题。有调查显示：全球HBV感染的人群已经高达20亿人，每年死亡者将近100万人，多是由于肝癌、肝硬化或者肝功能衰竭死亡[1,2]。HBV病毒具有较强的感染性，极易转化为慢性肝炎，肝硬化以及肝癌是疾病发展的终末期。随着临床对HBV病毒的不断渗入研究，发现HBV-DNA检测可对HBV病毒感染情况做出反映，是一种高敏感性、高特异度的指标[3]。本文选定2017年10月-2018年10月本院收治的50例HBV患者研究，旨在提供一种准确、有效的诊断方法。

1 资料与方法

1.1 基线资料 选取2017年10月-2018年10月本院收治的50例HBV患者，女性22例，男性28例，年龄25岁-75岁，平均年龄为（50.06±6.14）岁。

1.2 方法 nPCR检测：采用PCR扩增仪（型号：GA5700；生产企业：美国PE公司），取DNA提取液20 µL，置入离心管中（0.5 mL），加入动物血清30 µL，摇匀，在100oC下煮沸。时间15 min，离心5 min，速率14,000 r/min，提取上清液5 µL，使基因作为PCR模板链。取模板液5 µL，置入PCR反应管中，离心处理，在PCR扩增仪中进行扩增。扩增之后基因溶液中取10 µL进行电泳实验，指示剂显示1 cm时，可将紫外灯光放入，观察荧光区带。ELISA检测：采用ELISA法检测HBVM，试剂由上海新波生物技术有限公司提供，获取的基因溶液置入ELISA试剂中展开检测。

1.3 观察指标 统计HBV-DNA进行nPCR检测的阳性结果、HBV-DNA进行FQ-PCR检测的阳性结果，同时对比ELISA检测法、FQ-PCR检测法、nPCR检测法的阳性结果。

1.4 统计学方法 用SPSS 25.0软件展开数据处理，计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示，采用t检验。计数资料采用率（%）表示，采用卡方检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 分析HBV-DNA进行nPCR检测的阳性结果 HBV-DNA进行nPCR检测，1模板与4模板的阳性率相对较高，1模板中HBV-DNA进行nPCR检测的阳性率与HBVM进行ELISA法检测的阳性率相比，具有统计学差异（P＜0.05），2模板中HBVDNA进行nPCR检测的阳性率与HBVM进行ELISA法检测的阳性率相比，无统计学差异（P＞0.05），见表1。

2.2 分析HBV-DNA进行FQ-PCR检测的阳性结果 HBVDNA进行FQ-PCR检测，1模板与4模板的阳性率相对较高，1模板中HBV-DNA进行nPCR检测的阳性率与HBVM进行ELISA法检测的阳性率相比，具有统计学差异（P＜0.05），2模板中HBV-DNA进行nPCR检测的阳性率与HBVM进行ELISA法检测的阳性率相比，无统计学差异（P＞0.05），见表2。

2.3 分析HBV-DNA进行不同PCR检测的阳性结果 nPCR检测HBV-DNA的阳性率相对较ELISA、FQ-PCR检测的高，具有统计学差异（P＜0.05），见表3。

表1 分析HBV-DNA进行nPCR检测的阳性结果

表2 分析HBV-DNA进行FQ-PCR检测的阳性结果

表3 分析HBV-DNA进行不同PCR检测的阳性结果

3 讨论

HBV感染的基因型不同，生成的疾病谱也有差异，但存在一定规律，一般肝炎、肝硬化、肝癌的顺序，检出率最高的是C型，检出率最低的是B型。检测HBV病毒分型的方法不同，对临床治疗的指导意义也不同，但是由于分型检测方法不完善，价格昂贵，反复性的测试患者不易接受。nPCR是一种改良的PCR检测法，在106个基因组中可检测、拷贝出一个病毒基因，有效弥补了单引物分辨率较低的不足，是一种质量较高的PCR片段，具有较高的敏感性。本研究显示：nPCR检测HBV-DNA的阳性率相对较ELISA、FQ-PCR检测高（P＜0.05）。说明nPCR检测技术显著优于其他检测技术，具有高敏感度、高特异性、高检出率的特点，在HBV疾病的诊断、治疗、预后中发挥了重要的指导意义，应当作为HBV疾病理想的诊断方法。

综上所述：HBV疾病患者采纳nPCR检测，可有效提高诊断准确率，为疾病的治疗提供科学的诊断依据，值得临床信赖并进一步推广。