自拟益肾生精方治疗少弱精不育症的研究

高章圈,王淑红,韩瑞钰,陈拽生,马 静,徐 坤,周 策

(河北省计划生育科学技术研究院(国家卫生计生委计划生育与优生重点实验室),河北 石家庄 050071)

近年来，随着社会和环境的变化，男性生育力呈逐步下降的趋势，各种原因引起的不育症逐年上升，已经成为严重的社会问题。在不育症患者中，少弱精及高畸形率是常见的致病因素，由于发病机制复杂，临床上仍缺乏有效的治疗方法。中医认为少弱精不育属于精少、精弱、精薄而致无子的范畴，可分为肾阳虚、肾阴虚、肝郁脾虚、肝经湿热、气血两亏等证型，其中以肾阳虚型最多，治疗上以补益肝肾为主，兼以补脾理气、祛湿养血等。既往研究发现，益肾生精方可改善弱精子症不育患者的精子活力[1]。本研究进一步观察比较了自拟益肾生精方与左卡尼丁口服液治疗少弱精不育症对精液质量和精子DNA损伤的影响，现将结果报道如下。

1 临床资料

1.1一般资料 选择2012年1月—2016年1月在本院不育门诊就诊的少弱精不育症患者180例,年龄22～39岁,中位数为28岁。均符合弱精子症不育诊断标准，婚后1年以上夫妻同居、无避孕、有规律的性生活且排除女方因素而未获得妊娠；性功能正常，精液量偏少，精液检查精子计数<15×106mL-1、前向运动精子(PR)<32% 或前向运动+非前向运动精子(PR+NP)<40%。中医辨证为肾阳虚型，表现为精液量、精子数量偏少，形寒肢冷、腰膝酸软、头晕耳鸣、小便清长、舌苔薄、脉细。患者夫妇均未参加其他相关临床观察3个月以上。排除伴严重心脑血管、肝、肾、造血系统、呼吸系统器质性病变者，有明确的染色体异常或精神性疾病者，双侧睾丸体积均<10 mL者，伴急性前列腺炎、附睾炎、重度精索静脉曲张、附睾结核等泌尿生殖系统感染性疾病者。随机将入选患者分为2组：治疗组90例，平均年龄28.5岁，病程2～13年，平均6.6年；对照组90例，平均年龄28.6岁，病程2～14年，平均6.7年。2组患者年龄、病程比较差异无统计学意义(P均>0.05)。

1.2治疗方法 对照组患者给予左卡尼丁口服液(中国东北制药总厂，国药准字H19990372，规格：10 mL/支，6支/盒)口服，1支/次，2次/d。治疗组患者给予益肾生精方治疗，方药组成：菟丝子20 g、覆盆子15 g、枸杞子20 g、车前子15 g、五味子15 g、黑蚂蚁5 g、黄精15 g、党参20 g、甘草9 g、炙黄芪20 g、炒白术12 g、当归15 g、蒲公英20 g、熟地15 g、三七粉3 g(冲)，1剂/d，水煎分早晚2次服。2组患者每服用3个月为1个疗程，停药1周再开始下个疗程。

1.3观察指标

1.3.1精液常规检查指标 分别于治疗前及治疗1个疗程后(治疗后)对2组患者进行精液常规检查(患者禁欲3～5 d，均按要求手淫取精)。按照WHO《世界卫生组织人类精液分析实验室技术手册》[2]标准进行精液常规分析和形态分析。常规分析采用CFT-9201型精子质量检测系统(江苏瑞祺生命科学仪器有限公司生产)进行。精液液化后，将精子浓度调整为50×106mL-1左右，取样10 μL，采用拉薄技术涂片，空气干燥固定后，Diff-Quick染色(南京建成生物工程有限公司生产)，10×100油镜下采用CFT-9201型精子形态检测系统(江苏瑞祺生命科学仪器有限公司生产)结合人工修正方法进行精子形态分析，每张玻片连续计数200个精子2次，并按质控要求统计正常形态精子和各类畸形精子百分率，计算畸形精子指数(TZI)。

1.3.2精子DNA损伤情况 用彗星细胞率进行评定。以精子头部中心处的荧光强度与沿迁移方向的荧光强度来表示细胞的总长和尾长，以尾长代表损伤程度。精子DNA损伤分级标准：根据细胞荧光图像是否像彗星一样头尾分明，分为彗星细胞和非彗星细胞，然后根据彗星尾部DNA含量所占百分比和彗尾长度，将细胞核DNA损伤程度分为5级。0级：正常的非彗星样细胞，彗星细胞率≤5%，无损伤，精子核完整；Ⅰ级：彗星尾部DNA含量5%～20%，轻度损伤，可见彗尾，精子核缩小；Ⅱ级：彗星尾部DNA含量≥20%～40%，中度损伤，可见明显的彗尾；Ⅲ级：彗星尾部DNA含量≥40%～95%，重度损伤，彗尾荧光信号强，并有明显缩小的精子核；Ⅳ级：彗星尾部DNA含量≥95%，完全损伤，仅见荧光强而密的彗尾，精子核基本消失。

1.3.3临床疗效 根据《世界卫生组织男性不育标准化检查与诊疗手册》[3]，并参考《中药新药临床研究指导》[4]进行疗效评定。治愈：配偶妊娠；改善：精子计数>15×106mL-1、PR>32%或PR+NP≥40%但配偶未妊娠；无效：未达以上标准。

2 结 果

2.12组患者治疗前后精液检查主要指标比较 2组治疗后的精子活率、精子前向运动率、精子前向运动+非前向运动率(PR+NP)、精子计数、精子整体正常形态率均显著提高(P均<0.05)，畸形精子指数、白细胞数及未成熟生精细胞数均显著下降(P均<0.05)，正常形态精子<4%的例数显著减少(P均<0.05),且治疗组上述指标改善情况均显著优于对照组(P均<0.05)。见表1。

表1 2组患者治疗前后精液检查主要指标比较

组别n时间整体正常形态率/%TZI白细胞数(高倍视野)/个未成熟生精细胞数/(高倍视野)/个正常形态精子<4%的例数/例治疗组90治疗前治疗后2.21±0.777.86±2.12①②1.34±0.291.18±0.37①②4.8±1.31.7±0.7①②6.4±2.51.6±0.8①②5717①②对照组90治疗前治疗后2.16±0.874.06±2.54①1.34±0.281.28±0.37①4.5±1.63.5±0.8①6.3±2.64.6±1.0①6132①

注：①与治疗前比较，P<0.05；②与对照组比较，P<0.05。

2.22组患者治疗前后精子DNA损伤情况比较 2组治疗后的精子总彗星细胞率和Ⅰ级彗星细胞率均显著低于治疗前(P均<0.05)，且治疗组均显著低于对照组(P均<0.05)。见表2。

表2 2组患者治疗前后精子DNA损伤情况比较%)

注：①与治疗前比较，P<0.05；②与对照组比较，P<0.05。

2.32组患者临床疗效比较 治疗组的治愈率和总有效率均显著高于对照组(P均<0.05)。见表3。

表3 2组患者临床疗效比较 例(%)

注：①与对照组比较,P<0.05。

3 讨 论

世界卫生组织统计，不育夫妇占已婚育龄夫妇的7%～15%，在中国每6对夫妇中即有1对发生不育，而不孕不育的原因是多方面的,其中属于女方因素的占40%～55%，单属于男方因素的占25%～40%，属于男女双方共同因素的约占20%[5]。临床上评价男性生殖能力主要依靠精液常规和形态分析，按照《世界卫生组织人类精液分析实验室技术手册》[2]第5版的要求，精子形态异常>96%为畸形精子过多，是男性不育的常见原因之一。正常形态的精子率与受精率呈显著正相关,畸形精子一般都会导致较低的受精潜能，也是导致孕妇自然流产的相关因素之一[6-7]。现代医学认为导致精子畸形的原因主要包括药物因素、内分泌紊乱、泌尿生殖系统感染、遗传、日常烟酒习惯等，这些都会使精子在发育过程中形态异常而成为畸形精子[8]。其中生殖道感染可引起炎症，被炎症激活的白细胞产生的大量氧自由基可损伤DNA的完整性, 导致精子形态异常[9]。目前研究认为精子DNA损伤与精子畸形率呈正相关关系，与精子活力呈负相关关系[10-12]。刘继龙等[13]分析不育患者的精子形态和性激素的关系，发现精子形态与FSH、T 呈显著负相关关系，与E2呈显著正相关关系。杨雪等[14]发现染色体异常也是一些少弱精子症、畸形精子症及无精子症的重要原因。

左卡尼丁口服液是治疗少弱精子症的常用药物[15]，但疗效有待提高。中医认为,少弱畸形精子引起的男性不育主要与肝、肾、脾多脏器功能失常有关,但并非现代医学的器质性及病理性改变，畸形精子率高者常伴少、弱精症，病机主要是肾精亏损,气血两虚,湿热下注,气滞血瘀等,尤其是肾虚为主，肾虚和湿热下注导致畸形精子过多[16]。近年来，传统中药在治疗不育症方面取得了较好的效果。宾彬等[17]发现参杞强精胶囊可以显著改善畸形精子症患者精子形态、精子数量和活力，提高男性生育力。张慧珍等[18]证实补肾活血法治疗男性少弱精子不育症效果优于单纯西药治疗。于雪松等[19]研究显示五子衍宗加味方药能明显增加少弱精子不育症患者精子密度，提高精子活力。孙振高等[20]用六味地黄软胶囊治疗肾阴虚型男性不育症患者，结果显示能有效改善精子畸形率和活力及精子DNA碎片化指数。上述研究提示传统医学在不育症治疗上采取补肾为主，兼顾肝、脾之策略有较明显的效果。本研究以自拟的益肾生精方治疗少弱精不育症,方中菟丝子可补阳益阴，改善精子的运动能力和精子膜的功能，提高精子质量，能促进性腺及附属性腺发育；覆盆子益肾固精；五味子益肾生津涩精；车前子清热利湿，泻下焦湿热；枸杞子入肝肾二经，有滋补肝肾之功；黑蚂蚁具有扶正固本、补肾壮阳、养血荣筋之功，可促进睾丸曲细精管发育和激素分泌；党参、黄芪补中益气；当归补血活血；熟地补精益髓；炒白术健脾益气；三七活血化瘀；蒲公英清热利湿；甘草调和诸药；诸药配伍具有生津益精、补肾益髓、填精助育的效果。

本研究结果显示，治疗后治疗组患者精子活力、正常形态精子百分率和精子计数均显著高于对照组，精子总彗星细胞率和Ⅰ级彗星细胞率均显著低于对照组，配偶妊娠率显著高于对照组。提示益肾生精方治疗少弱精不育症可提高精子活力和质量，降低精子畸形率尤其是精子头部畸形率，减轻精子DNA损伤程度，可明显提高配偶妊娠率，但该方的作用机制和进一步的临床疗效有待继续研究。