复方芪苓配方颗粒对大鼠高尿酸血症的调控作用

张媛 徐红

[摘要] 目的 探讨复方芪苓配方颗粒治疗高尿酸血症大鼠的作用机制。 方法 通过腺嘌呤灌胃及氧嗪酸钾皮下注射建立高尿酸血症模型，连续给药14 d。分别测定血清尿酸（UA）、肌酐（Scr）、尿素（Urea）及胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-c）和低密度脂蛋白（LDL-c）水平;采用RT-PCR方法分别测定大鼠肾脏中相关转运体的表达水平。 结果 与模型对照组比较，复方芪苓配方颗粒能显著降低高尿酸血症大鼠血清UA、Scr、Urea、TC、LDL-c水平，同时可以显著下调肾脏尿酸盐转运体（URAT1）mRNA的表达，上调有机阴离子转运体1（OAT1）、有机阳离子转运体2（OCT2）mRNA的表达。 结论 复方芪苓配方颗粒能改善高尿酸血症大鼠的肾功能、血脂代谢，其作用机制可能是下调大鼠肾脏中URAT1 mRNA的水平，上调OAT1和OCT2 mRNA的水平，从而降低肾脏尿酸盐重吸收能力及增加尿酸盐的分泌。

[关键词] 复方芪苓配方颗粒;高尿酸血症;肾脏转运体;大鼠

[中图分类号] R285.5          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）33-0008-04

[Abstract] Objective To explore the mechanism of action of compound Qiling formula granules in treating rats with hyperuricemia. Methods The hyperuricemia model was established in rats by adenine gavage and hypodermic injection of oxonic acid potassium salt. The drug was administered continuously for 14 days. The levels of serum uric acid（UA）， creatinine（Scr）， Urea， total cholesterol（TC）， triglyceride（TG）， high-density lipoprotein-cholesterol（HDL-c）， and low-density lipoprotein-cholesterol（LDL-c） were tested respectively.  RT-PCR was used to measure the expression levels of related renal transporters of the subjects. Results Compared with the model control group， the levels of serum UA， Scr， Urea， TC， LDL-c of rats with hyperuricemia were significantly lowered by applying compound Qiling formula granules. The expression level of the mRNA of the urate reabsorption transporter-1（URAT1） was down-regulated significantly， and the expression levels of the mRNA of organic anion transporter-1（OAT1） and organic cation transporter-2（OCT2） were up-regulated significantly. Conclusion Compound Qiling formula granule can improve the renal function and lipid metabolism of rats with hyperuricemia. Its mechanism may be related to the down-regulation of the level of URAT1 mRNA， and the up-regulation of the levels of OAT1 and OCT2 mRNA in the kidney of the rats， both of which can reduce the reabsorption capacity of urate in the kidney and increase the secretion of urate.

[Key words] Compound Qiling formula granules; Hyperuricemia; Renal transporter; Rats

隨着社会经济发展及人们饮食结构的改变，高尿酸血症的发病率呈明显上升趋势，且发病年龄逐渐年轻化[1-3]。高尿酸血症可诱导痛风、肾结石及加速肾脏和心血管疾病的进程[4-5]，因此对于高尿酸血症早发现、早治疗就尤为重要。西药在治疗高尿酸血症上虽有确切的降尿酸作用，但停药后复发率较高，且不良反应较多，部分药物在一定程度上有加重肾损害的风险[6]。随着中医药对高尿酸血症研究的不断深入，多个研究证明许多中药具有降低血尿酸的功效[7-8]，且中药复方制剂具有增效减毒的优势，因此，开发研究降低尿酸的中药复方制剂具有重大意义和广阔前景。

复方芪苓配方颗粒（原名：尿酸利仙配方颗粒）为徐红教授临床验方，已有多年临床应用经验，由山慈菇、土茯苓、桑寄生、丹参、黄芪、秦艽、薏苡仁等组方而成，具有健脾益气、化瘀泄浊、清热利湿的功能。本课题组前期临床研究证实本方能有效降低患者血尿酸水平，且无明显不良反应[9]。本研究拟通过复方芪苓配方颗粒对高尿酸血症大鼠的实验研究，观察其对调节肾功能、血脂代谢、肾脏转运体方面的影响，进而为临床治疗提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 主要试剂与仪器  氧嗪酸钾（日本TCI公司，批号：2207-75-2）;腺嘌呤（美国Sigma公司，批号：73-24-5）;戊巴比妥（美国Sigma公司，批号：57-33-0）;中药复方芪苓配方颗粒（杭州市中医院制剂室提供）;别嘌呤醇片（上海信谊万象药业股份有限公司，国药准字：H31020334，规格：100 mg/片）;尿酸、肌酐、血脂测定试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号：160551）;引物合成（由杭州嘉朗生物技术有限公司提供）。日立7180型全自动生化分析仪、OLYMPUS CH30显微镜。

1.1.2 动物  清洁级SD雄性健康大鼠60只，10周龄，体质量（150±20）g左右，由浙江中医药大学实验动物中心提供，饲养于浙江中医药大学动物实验中心全屏障清洁级动物房内，动物许可证号：SYXK（浙）2013-0184。

1.2 方法

1.2.1 实验分组与造模  大鼠适应性饲养7 d后，称重并随机分成正常对照组、模型对照组、治疗组（高、中、低剂量复方芪苓配方颗粒）及阳性对照组（别嘌呤醇）等六组，每组10只。除正常对照组实验过程中普通饲料饲养外，其余5组以10%的酵母粉饲料饲喂，并上午给予100 mg/kg腺嘌呤灌胃，并以100 mg/（kg·d）氧嗪酸钾分2次腹部皮下注射，连续造模14 d。各治疗组大鼠在造模后同时分别每天下午灌胃给予复方芪苓配方颗粒，其中高剂量组为9.6 g/kg;中剂量组为4.8 g/kg;低剂量组为2.4 g/kg;阳性对照组给予别嘌呤醇10 mg/kg，正常对照组及模型对照组给予蒸馏水灌胃，连续给药14 d。所有动物给药体积均为20 mL/kg。

1.2.2 取材  末次给药后，次日称重后腹腔注射戊二醛麻醉，从大鼠腹主动脉采血（取血前12 h断粮），离心机10000 r/min离心5 min分离血清，将血清置于4℃保存，用于生化指标测定。然后在冰台上快速分取肾脏组织，去除膜和髓质，置于-80℃条件冰箱保存，用于RT-PCR分析。

1.2.3 大鼠肾功能及血脂代谢检测  分别取各组血清采用全自动生化分析仪检测血清尿酸（UA）、肌酐（Scr）、尿素（Urea）及胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-c）及低密度脂蛋白（LDL-c）。

1.3 统计学方法

数据处理及统计采用SPSS20.0统计软件，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐者组间比较用LSD检验，方差不齐者用Games-Howell检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 复方芪苓配方颗粒对高尿酸血症大鼠血清尿酸、肌酐、尿素的影响

与正常对照组相比，模型对照组血清尿酸、肌酐、尿素水平明显升高（P<0.01）。与模型对照组相比，别嘌呤醇组血清尿酸明显降低（P<0.01），肌酐有一定程度降低（P<0.05）。复方芪苓配方颗粒各剂量组均可有效降低模型组动物的血清尿酸（P<0.01），且中药剂量越大，降低越明显。复方芪苓配方颗粒高、中剂量组血清肌酐和尿素均有显著降低（P<0.01），低剂量组血清肌酐有一定程度降低（P<0.05），见表1。

2.2 复方芪苓配方颗粒对高尿酸血症大鼠血脂代谢的影响

与正常对照组比较，模型对照组血清胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平明显升高（P<0.01），高密度脂蛋白水平明显降低（P<0.01）。与模型对照组相比，别嘌呤醇组未见明显改变（P>0.05）。复方芪苓配方颗粒各剂量组均可有效降低模型组动物的血清胆固醇、低密度脂蛋白水平（P<0.05，P<0.01）。与别嘌呤醇组比较，复方芪苓配方颗粒高、中剂量组血清胆固醇、低密度脂蛋白均有明显降低（P<0.05），见表2。

3讨论

高尿酸血症是嘌呤代谢紊乱所致细胞外液的尿酸盐呈超饱和的状态，而正常人体内尿酸盐的2/3由肾脏排泄[10]。一旦肾功能受损，则尿酸盐排泄出现异常，故而造成尿酸盐在体内蓄积的同时又可导致或者加重肾脏疾病的发生、发展。慢性尿酸性肾病是高尿酸血症肾脏损害的最常见类型，临床中常伴有肾功能改变及血脂代谢紊乱，具有明显的肾间质损害[11]。

由于肾脏在尿酸的排泄过程中对维持血尿酸水平起着主导作用，深入研究肾脏排泄尿酸的机制越来越重要。近年来，研究发现肾脏排泄尿酸的过程与肾脏中的多种尿酸转运相关的转运蛋白密切相关，血液尿酸经过肾小球滤过进入肾小管，主要经过重吸收蛋白URAT1重吸收入血[12]，由分泌蛋白OAT1重新分泌入尿，最終排出体外。Hosoyamada等[13]通过敲除小鼠URAT1基因的研究结果发现其尿中尿酸盐高于正常小鼠，证明URAT1能够减弱尿酸盐的重吸收作用，从而促进尿酸排泄增多。OAT1在肾脏中表达下调可减少肾脏有机阴离子的分泌，而尿酸是主要在肾小管中通过OAT1转运的一种内源性有机阴离子[14-15]。OCT2在肾脏中介导多种有机阳离子的吸收与重吸收[16-17]。

高尿酸血症在中医学无相应的病证名，大多学者认为属湿浊、瘀血范畴，其病因病机在于先天不足或后天失养，复加过食肥甘厚腻而致脾失健运、痰湿内生，湿邪弥散于营血、气失宣畅，血行瘀滞，郁久则湿瘀蕴阻[18-20]，故本病属本虚标实之证，治宜标本兼顾。复方芪苓配方颗粒方中土茯苓解毒除湿、通利关节，山慈菇清热解毒、消痈散结，薏苡仁淡渗利湿，秦艽清热利湿，配以丹参活血化瘀通络，桑寄生除湿通络、补肾固本，黄芪益气利尿，防上述祛湿化瘀药攻伐太过，诸药合用，共奏健脾益气、化瘀泄浊、清热利湿之效。

本研究通过对大鼠用腺嘌呤联合氧嗪酸钾诱导，加上酵母粉高嘌呤饮食，共同作用造成稳定的与人高尿酸血症相似机制的模型。这一模型的建立，为研究中药复方制剂治疗高尿酸血症提供了很好的实验基础。本研究结果显示，与模型对照组比较，复方芪苓配方颗粒各剂量组均可有效降低模型组动物的血清尿酸，且中药剂量越大，降低越明显。复方芪苓配方颗粒高、中剂量组血清肌酐、尿素、胆固醇、低密度脂蛋白均有显著降低，证明复方芪苓配方颗粒能显著改善高尿酸血症大鼠的肾功能、降低尿酸，改善脂质代谢紊乱。同时，与模型对照组比较复方芪苓配方颗粒高、中剂量组URAT1 mRNA表达显著下降、OCT2 mRNA表达显著升高，复方芪苓配方颗粒高剂量组OAT1 mRNA表达显著上升，表明复方芪苓配方颗粒有抑制高尿酸血症大鼠肾脏对尿酸的重吸收并具有促进尿酸分泌的作用。

综上所述，复方芪苓配方颗粒能显著改善高尿酸血症大鼠的肾功能、降低血尿酸，改善血脂代谢，下调高尿酸血症大鼠肾脏URAT1水平及上调OAT1、OCT2水平的表达，提示其具有明显的降尿酸作用，同时血尿酸降低到正常和接近正常水平能缓解高尿酸血症引起的脂质代谢紊乱，具有较好的肾脏保护作用。其降尿酸的作用机制可能与通过对肾脏尿酸相关转运体的调节作用、降低肾脏尿酸盐重吸收能力及增加尿酸盐的分泌有关。这为复方芪苓配方颗粒作用于高尿酸血症的研究提供了一定的理论基础。

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（收稿日期：2019-08-02）