3种培养基对动物饲料微生物检验的影响

邓艳芳 王伟 徐成体 魏希杰

（1，青海省草原总站 810008；2，青海省畜牧兽医科学院 810008）

饲料作为动物的主要食物，其质量直接关系着动物品质的高低。饲料中含有丰富的营养成分，因而饲料在加工、运输及储藏过程中极容易遭到微生物的感染，在降低饲料营养价值的同时也容易对动物健康造成威胁。微生物指标作为饲料标准中的一个重要内容，其实际测定过程中的培养基可以根据相关标准由实验室自制。或者通过购买市售的商品化培养基。本文分别采用自制及购买的不同培养基对3种饲料菌落及霉菌总数进行测定，从而验证自制及市购成品培养基对饲料微生物学检验结果的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验饲料分别从北京科奥协力饲料有限公司购入SPF 大小鼠生长繁殖饲料、兔维持饲料及犬维持饲料。

1.1.2 实验试剂

平板计数琼脂、营养琼芝、马铃薯-葡萄糖琼脂、孟加拉红培养基葡萄糖琼脂粉及酵母膏购于北京奥博星生物技术有限责任公司；胰蛋白胨、葡萄糖及琼脂粉购于国药集团化学试剂有限公司；氯霉素购于北京索莱宝科技有限公司。

1.1.3 实验仪器

LDZH-100KBS 不锈钢立式灭菌器（上海申安医疗器械厂）；TXB622L 电子天平（岛津企业管理有限公司）；LRH-450F 生化培养箱（上海捷呈实验仪器有限公司）；BMJ-250C霉菌培养箱（上海博讯实业有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 菌落总数检验培养基

（1） 自制平板计数琼脂培养基

分别称取5g 胰蛋白胨，2.5g 酵母浸膏，1.0g 葡萄糖以及15.0g 琼脂，加水至1L，在121℃下高压灭菌15min。

（2） 市购成品平板计数琼脂培养基

称取23.5g 的平板计数培养基，加水至1L，在121℃下高压灭菌15min。

（3） 市购成品营养琼脂

称取32g 营养琼脂，加水至1L，121℃下高压灭菌15min。

1.2.2 霉菌总数检验培养基

（1） 自制马铃薯—葡萄糖琼脂

将马铃薯去皮并切块后，加入1L 的纯水煮沸20min，并用纱布进行过滤。称取300g 的马铃薯、20g 的葡萄糖、20g 的琼脂及0.1g 的氯霉素，加水至1L 后高压灭菌20min。

（2） 市购成品马铃薯-葡萄糖琼脂

称取38g 马铃薯-葡萄糖琼脂，加水至1L 后在121℃下高压灭菌20min。

（3） 市购成品孟加拉红培养基

称取35g 孟加拉红培养基，加水至1L 后在121℃下高压灭菌20min。

1.2.3 菌落及样品总数检验

（1） 样品稀释

在无菌条件下称取25.0g 饲料，加到装有225ml 氯化钠注射液的锥形瓶中，充分振荡后制成1∶10 的样品匀液；取1ml 1∶10 的样品匀液加到装有9ml 氯化钠注射液的试管内，充分震荡制成1∶100 的样品匀液；取1ml 1∶100 的样品匀液，并加入含有9ml 的氯化钠注射液的试管内，充分震荡形成1∶1000 的样品匀液。分别取1ml 的氯化钠注射液及各个稀释样品匀液加入无菌培养皿中，做3 次重复。

（2） 培养

分别将冷却后的培养基倾注至平皿内，转动平皿使其充分混合。将菌落总数检验培养基置于生化培养箱内在36℃下培养48h，将霉菌总数检验培养基置于霉菌培养箱内在28℃下培养5d。

2 实验结果

通过对不同动物饲料菌落总数进行检测，结果表明，3种培养基大小鼠生长繁殖饲料各个稀释液均没有菌落生长；兔维持饲料1∶10 的稀释比例菌落总数均多不可数，1∶100 稀释比例下自制平板、市购成品平板以及市购成品营养琼脂的菌落总数分别为79.33±8.02、80.38±7.54、78.21±5.67，1∶1000 的稀释比例下3种培养基上的菌落总数分别为29.85±2.34、30.25±2.83、27.21±2.66，各培养基上细菌总数均无统计学差异（p＞0.05）；对于犬维持饲料，1∶10 的稀释比例下自制平板、市购成品平板及市购成品营养琼脂的菌落总数分别为49.78±7.88、51.05±9.04、48.23±8.93，1∶100 稀释比例下分别为15.23±4.03、16.02±2.78、14.17±3.05；1∶1000 的稀释比例下分别为2.01±0.89、1.73±1.02、1.17±0.98，各个稀释比例3种培养基上细菌总数均无统计学差异（p＞0.05）。

不同饲料霉菌总数检测结果表明，对SPF 大小鼠繁殖饲料，3种不同的饲料各稀释比例均没有霉菌生长；兔维持饲料1∶10 稀释比例下自制马铃薯-葡萄糖琼脂、市购成品马铃薯-葡萄糖琼脂及市购成品孟加拉红培养基上霉菌总数分别为3.88±1.53、3.56±1.78、3.56±0.69，1∶100 稀释比例下分别为0.29±0.47、0.58±0.45、0.58±0.45，3种培养基上霉菌总数均无统计学意义（p＞0.05），1∶1000 比例下3种培养基均没有霉菌生长；对于犬维持饲料，1∶1000 比例3种培养基均无霉菌生长，1∶10的稀释比例下3种培养基上霉菌总数分别为2.02±0.48、1.95±0.02、1.93±0.87，1∶100 稀释比例下依次为0.24±0.44、0.53±0.49、0.23±0.47，3种培养基霉菌总数均不无统计学意义（p＞0.05）。

3 结论与讨论

本实验结果表明，对于SPF 大小鼠繁殖饲料、兔维持饲料及犬维持饲料，其不同培养基之间1∶10，1∶100 及1∶1000 3 个稀释比例的菌落及霉菌总数均不存在统计学意义。营养琼脂培养基测得的菌落总数略低于平板计数培养基，可能是由于平板计数培养基的营养成分更为优异。