不同保存温度和时间对血细胞分析结果的影响*

夏炳妍，周玉明，燕丕宏，谭宏伟，高 军，王国艳,王美蓉，封建凯，宿振国，张玉强

(滨州医学院烟台附属医院检验科，山东烟台 264003)

临床上血细胞分析是最基础的血液检测方法，是很多临床疾病诊断的依据之一[1-2]。血细胞分析会受多种因素的干扰，包括采集血液的手法、被检测者的身体状况和采集血液时的体位、标本采集后的保存条件等[3-5]。如标本获得后不能即刻进行检测，往往需要将血标本进行保存，而标本的保存温度与保存时间对血常规检测结果有何影响，需系统研究分析。

1 资料与方法

1.1一般资料 共收集本院临床科室送检的120例患者标本，男、女各60例，年龄20～40岁。120份血液标本分为3组，每组各40份，第1组：置于-20 ℃冰柜冷冻，第2组：置于4 ℃冰箱保存，第3组：置于20 ℃室温保存，分别检测即刻、1 d、3 d和7 d的血细胞参数。

1.2仪器与试剂 采用Sysmex XN 1000全自动模块式血液分析仪进行血常规检测。仪器采用的所有试剂均为Sysmex设备专用试剂。

1.3检测方法 血常规检验是一种对血液中的红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(Hb)进行计数，以及对WBC进行分类的一种检验方法。采集健康体检人员2 mL静脉血，置于乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝真空采血管中，摇匀6～8次。按照Sysmex XN 1000全自动模块式血液分析仪使用说明书进行操作，在室内质量控制在控的情况下对血标本进行检测。采用液压聚焦法、SLS-血红蛋白法、WDF通道分别测定RBC、PLT、Hb及WBC分类。分别检测即刻、1 d、3 d、7 d的血细胞参数。

1.4检测指标 除检测WBC、RBC、Hb、PLT外，还对中性粒细胞(NEUT)、嗜酸性粒细胞(EO)、嗜碱性粒细胞(BASO)、淋巴细胞(LYMPH)及单核细胞(MONO)进行分类计数。

1.5统计学处理 采用SPSS18.0软件对数据进行分析处理，方差分析对数据进行分析处理，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1RBC在不同时间、不同温度下保存的变化情况 见图1。-20 ℃冷冻条件下，保存1、3、7 d时RBC数量逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)。4 ℃低温保存条件下，保存1、3、7 d时RBC数量无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。20 ℃室温保存条件下，保存1、3 d时RBC数量无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)，保存7 d时RBC数量开始有所升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室温

图1 RBC在不同时间、不同温度下保存的变化情况

2.2WBC在不同时间、不同温度下保存的变化情况 见图2。-20 ℃冷冻条件下，保存1 d时WBC数量逐渐降低，在1～7 d时WBC数量与即刻测定结果比较依然降低，但无持续降低趋势，差异均有统计学意义(P<0.05)。4 ℃低温保存条件下，保存1 d内WBC数量无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)，保存1～7 d时WBC数量稍微降低。20 ℃室温保存条件下，保存1、3、7 d时WBC数量持续升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室温

图2 WBC在不同时间、不同温度下保存的变化情况

2.3PLT在不同时间、不同温度下保存的变化情况 见图3。-20 ℃冷冻条件下，保存1、3 d时PLT数量无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)，保存7 d时PLT大幅度升高，差异有统计学意义(P<0.05)。4 ℃低温和20 ℃室温保存条件下，保存1、3、7 d时PLT数量无明显变化，差异均无统计学意义(P>0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室温

图3 PLT在不同时间、不同温度下保存的变化情况

2.4Hb在不同时间、不同温度下保存的变化情况 见图4。-20 ℃冷冻条件下，保存1、3、7 d时Hb水平无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。4 ℃低温保存条件下，保存1、3 d时Hb水平无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)，保存3～7 d时Hb水平逐渐升高，差异有统计学意义(P<0.05)。20 ℃室温保存条件下，保存1、3 d时Hb水平无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)，在3～7 d时Hb水平开始有所升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

注：a代表-20 ℃;b代表4 ℃;c代表20 ℃室温

图4 Hb在不同时间、不同温度下保存的变化情况

2.5-20 ℃冷冻条件下，不同保存时间WBC分类计数情况 见图5。NEUT：保存1 d后，细胞数量逐渐降低，在1～7 d时细胞数量与即刻测定结果比较依然降低，但无持续降低趋势，差异均有统计学意义(P<0.05)。LYMPH：保存1 d后，细胞数量逐渐升高，在1～7 d时细胞数量与即刻测定结果比较依然升高，但无持续升高趋势，差异均有统计学意义(P<0.05)。MONO:保存1 d后细胞数量逐渐降低，在1～7 d时细胞数量与即刻测定结果比较依然降低，但无持续降低趋势，差异均有统计学意义(P<0.05)。EO和BASO细胞数量均无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.64 ℃低温条件下，不同保存时间WBC分类计数情况 见图6。NEUT：保存1、3、7 d时细胞数量逐渐降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。LYMPH：保存1、3、7 d时细胞数量逐渐升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。MONO：保存1、3 d后，细胞数量逐渐升高，在3～7 d时细胞数量与即刻测定结果比较依然升高，但无持续升高趋势，差异均有统计学意义(P<0.05)。EO和BASO细胞数量无明显变化，差异均无统计学意义(P>0.05)。

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

图5 -20 ℃冷冻条件下，不同保存时间WBC分类计数情况

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

图6 4 ℃低温条件下，不同保存时间WBC分类计数情况

2.720 ℃室温条件下，不同保存时间WBC分类计数情况 见图7。NEUT：保存1、3、7 d时细胞数量逐渐降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。LYMPH：保存1、3、7 d时细胞数量逐渐升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。MONO：保存1 d后，细胞数量逐渐升高，在保存1～3 d时细胞数量与即刻测定结果比较依然升高，但无持续升高趋势，在保存3～7 d时细胞数量逐渐降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。EO和BASO细胞数量无明显变化，差异均无统计学意义(P>0.05)。

注：a代表NEUT;b代表LYMPH,c代表MONO;d代表EO;e代表BASO

图7 20 ℃室温条件下，不同保存时间WBC分类计数情况

2.8标本在不同时间、不同温度条件下外周血图片 见图8。-20 ℃冷冻条件下保存，1、3、7 d后RBC大部分溶解破裂，因此外周血图片基本看不到完整的RBC。4 ℃低温条件下保存，3 d后镜下可见分叶核，7 d内RBC数量基本无变化。20 ℃室温条件下保存，3 d后WBC多为单个核细胞。

图8 不同时间、不同温度下外周血涂片

3 讨 论

血常规检测是一种对全血标本进行检测的方法，主要包括血液中的RBC、WBC、PLT数量及Hb水平，以及对WBC进行分类计数。血常规检测在临床上是一种基本的辅助诊断手段，若要获得较为准确的血细胞分析结果，需要考虑多方面的因素，例如：静脉血的采集过程和采集方法、采血管抗凝剂、血液保存环境等[6]。在实际工作中，标本需要暂时保存的情况很多，例如：标本检测过程中，仪器出现故障；有时需要将标本转送到第三方实验室检验，运送的过程中需要对标本进行保存。

20 ℃室温条件下，在真空管内保存的标本随着保存时间延长，平均红细胞体积会逐渐升高，红细胞比容也会随之升高，但红细胞平均血红蛋白浓度会逐渐降低。随着标本保存时间延长，细胞有自身的代谢，而且保存环境也有所改变，细胞体积、细胞核与胞浆比例、细胞活性都会随之发生变化，此时WBC分类计数的准确性会大大降低，有可能机器根本无法正常分类[7]。PLT很容易集合在一起形成大颗粒，而用来检测的机器只能通过PLT大小来辨别出PLT，这样就可能导致机器将集合在一起的PLT当成小RBC来计数[8]。

可能导致标本干扰的因素很多，如WBC凝集、冷凝蛋白、冷球蛋白、纤维蛋白、巨大PLT会影响WBC测定；RBC凝集、小红细胞症、WBC增多、巨大PLT会影响RBC计数；高脂血症、异常蛋白会干扰Hb测定；RBC凝集、小RBC、WBC增多、严重糖尿病、尿毒症、球形RBC会影响红细胞比容测定；PLT凝集、假性PLT减少、巨型PLT、小红细胞症、分裂的RBC、WBC碎片、冷凝蛋白、冷球蛋白等会影响PLT测定。

在本试验中随机抽取了查体中心的120例健康体检者的EDTA-K2抗凝静脉血标本120份，将120份标本分为3组，每组各40份，第1组：置于-20 ℃冰柜冷冻，第2组：置于4 ℃冰箱保存，第3组：置于20 ℃室温保存，分别检测即刻、1 d、3 d和7 d时的血细胞参数。

本研究发现，血常规标本最适合在4 ℃低温条件下保存，标本保存1 d时RBC、WBC、PLT和Hb检测结果无明显变化，但对WBC分类有影响,在20 ℃室温条件下保存1 d时WBC数量逐渐升高，RBC基本无明显变化，由此可得出，在血细胞分析中，RBC比WBC保持结果无明显变化的时间长，WBC结果的稳定性受环境的影响很大[9]。三磷酸腺苷会促使PLT集合在一起，大量二磷酸腺苷来自于临床上三磷酸腺苷的分解，而二磷酸腺苷是一种PLT诱导剂，会促使PLT发生聚集，因此，PLT计数的准确性会受到影响[10]。

因此，在临床工作中采集标本后应该立即送检，检验科从采集标本到实验室检测标本的时间不应该超过1 d，如果要保存标本应该放在4 ℃条件下保存。血常规标本最适合在4 ℃低温条件下保存，标本保存1 d时对RBC、WBC、PLT和Hb结果无明显影响，但对WBC分类计数有影响。在-20 ℃和20 ℃室温下，NEUT逐渐减少，LYMPH逐渐增多；在4 ℃下1 d内NEUT、LYMPH无明显变化，1 d后NEUT逐渐减少，LYMPH逐渐增多。

本文探讨了血液标本在不同保存时间与保存温度条件下血细胞各项参数变化情况，研究结果提示，血常规标本最适合在4 ℃低温条件下保存，并且临床上采集标本后立即送检结果最好。但临床送检的标本不可能马上得到检测，即刻检测虽在理论上可行，但缺乏操作性。临床标本均是在20 ℃室温放置当天检测完毕，因此，研究20 ℃室温下24 h内不同时间点血细胞各项参数的变化更能贴近临床现状。下一步将对此进行详细研究，为更适合临床操作的保存条件提供理论基础。