HPLC测定阿司匹林中醋酸残留量

白秀萍，董玉杰*

（1. 淄博市食品药品检验研究院，山东 淄博 255086；2. 山东金城生物药业有限公司，山东 淄博 255000）

阿司匹林（aspirin）作为一种解热镇痛药，历史悠久，应用广泛。阿司匹林大多通过水杨酸酰化反应获得，反应中使用原料醋酐[1-2]，醋酐与水反应可形成醋酸，可能作为副反应杂质存在于阿司匹林成品中。醋酸作为第三类溶剂限值为0.5%[3-4]，应对其进行定量分析。

1 仪器与试药

LC-2010A 高效液相色谱仪（日本岛津）；阿司匹林（山东新华制药，批号：0702238，0702250，0702251，0702256，0702258）；甲醇（分析纯，天津四友精细化学品公司）；乙醇（分析纯，国药集团）；磷酸（分析纯，国药集团）；冰醋酸（分析纯，莱阳经济技术开发区精细化工厂）。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取冰醋酸0.5 g（约0.5 ml）于100 ml量瓶中，用甲醇稀释到刻度，再取以上溶液1.00 ml，用甲醇稀释至50 ml，得100 µg/ml醋酸对照品溶液。

2.1.2 样品溶液的制备 精密称取阿司匹林样品约0.2 g，用甲醇溶解并稀释至10.0 ml。

2.2 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 µm）；梯度洗脱（方案见表1），流动相A：pH 3.0磷酸盐缓冲液:甲醇=950:50，流动相B：甲醇；检测波长：210 nm；流速：1.2 ml/min；灵敏度：1.0吸收单位；进样量：10 µl。

表1 梯度洗脱方案

2.3 计算方法

取5份对照品溶液，连续进样，记录色谱图，主峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。分别取空白溶剂（甲醇）和样品溶液，各进样10µl，记录色谱图。外标法计算醋酸的残留量。计算公式如下。

式中At为样品峰面积，Wt为样品称样量，Ar为对照品峰面积，Wr为对照品称样量。

2.4 专属性试验

用甲醇为空白溶剂，进样，没有干扰峰出现，表明空白溶剂不干扰样品测定；取对照品溶液，进样，测得主峰保留时间为3.631 min；再取阿司匹林样品溶液进样，无干扰峰出现，证明阿司匹林样品不影响醋酸含量的检测。取0.2 g阿司匹林样品，用醋酸对照品溶液稀释至10 ml，进样，醋酸与阿司匹林峰主峰分辨率为21.6，表明二者不存在相互干扰，专属性测试图谱见图1。

图1 专属性测试图谱

2.5 系统适用性试验

取6份100 µg/ml醋酸对照品溶液，每份0.5 ml，连续进样，记录色谱图，系统适用性试验结果见表2。主峰面积的RSD小于2.0%，表明系统适用性试验符合要求。

表2 系统适用性试验结果

2.6 检测限和定量限

取适量100 µg/ml醋酸对照品溶液，用甲醇稀释成含醋酸5 µg/ml的测试液，取两份，分别进样，记录色谱图，主峰高是基线噪声峰高的10倍，确定定量限为5 µg/ml（0.025%）。同法制备含醋酸2 µg/ml的测试液，取两份进分别样，得到的主峰高是基线噪声峰高的3倍，确定检测限为2 µg/ml（0.01%）。

2.7 线性范围

精密称定冰醋酸0.5 ml（0.5005 g），加入100 ml量瓶，用甲醇稀释至刻度，再分别用甲醇稀得到含醋酸浓度分别为5，10，50，80，100，120 µg/ml的测试液。每个浓度各取两份，分别进样检测。结果表明醋酸在5～120 µg/ml浓度范围内线性关系良好。回归方程为：Y=279X-108，r=0.999 99。

2.8 准确度

分别制备浓度为80，100，120 µg/ml的酸酸对照品溶液。取6份100 µg/ml醋酸对照品溶液，每份0.5 ml，连续进样，进行系统适用性测试，符合规定后，再分别取80，100，120 µg/ml的酸酸对照品溶液各3份，分别进样，计算醋酸含量和回收率，结果见表3。结果表明回收率符合要求。

表3 回收率结果

2.9 中间精密度

精密称定冰醋酸约0.5 ml（0.5012 g），不同操作者（操作者A和操作者B）分别按2.1.1项方法制备对照品溶液、配制流动相，使用不同高效液相色谱仪（LC-2010A，LC-2010A HT）和不同色谱柱，在不同时间进样。计算所得主峰峰面积的RSD值。测定结果见表4。结果显示，中间精密度符合要求。

表4 中间精密度测试结果

2.10 样品测定

用验证的方法检测5批阿司匹林品，结果见表5。

表5 样品检测结果

3 讨论

原料药中的残留溶剂是杂质的主要来源之一，是影响药品安全性的关键项目之一，必须确保溶剂残留量在可接受标准范围内。但中国药典各品种项下均未作出具体要求，因产品中残留溶剂需根据生产工艺中使用、产生或污染的溶剂类别进行评估，再确定是否列入产品质量标准，中国药典在附录中给出了常用溶剂的残留限度要求，残留溶剂的测定大多采用顶空气相色谱分析[4]。本文探索使用HPLC检测残留溶剂，并通过方法学验证，用该方法对5批阿司匹林样品进行测定，结果表明该法灵敏度高、精密度好，可用于阿司匹林中醋酸残留的测定。