高效液相色谱串联质谱法检测儿童血清25-（OH）D2+D3结果分析

吴碧涛，蒋文强，向礼芳（.绵阳市中心医院检验科，四川6000；.重庆市公共卫生医疗救治中心急诊科 400036）

众所周知，脂溶性维生素D可通过调节钙磷代谢影响肌肉骨骼系统的发育，其缺乏可导致儿童佝偻病及成人软骨症、骨质疏松等[1]。随着研究的深入，发现维生素D还具有广泛的骨骼外效应，其缺乏与免疫性疾病、感染性疾病、代谢性疾病、心血管疾病、皮肤病、神经精神疾病、生殖系统疾病、肿瘤等密切相关[2-3]。因此，越来越多的学科开始关注维生素D的营养状况。25-羟基维生素D[25-（OH）D]被认为是评价维生素D营养状况的最佳指标[4-5]。因而准确检测25-（OH）D水平的需求也就越来越大。不同地区因地域、环境、饮食结构等因素不同维生素D水平差异也较大[6]。基于以上因素，本研究旨在分析绵阳地区0～6岁儿童血清25-（OH）D2+D3水平，为维生素D缺乏性佝偻病及维生素D缺乏性相关疾病的研究和治疗提供实验室依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年5—8月来绵阳市中心医院儿童保健科体检的1 002例0～6岁儿童为研究对象。排除可能引起维生素D缺乏病史的患儿。根据性别不同分为男性儿童组和女性儿童组，根据年龄不同分为0～1、＞1～3、＞3～6 岁组。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有儿童均于清晨采集空腹静脉血，待血液凝固后离心分离800 μL血清于eppendorf管，并立即加入5 μL保护剂，4℃保存，3 d内完成检测。

1.2.2 检测方法 采用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法检测血清 25-（OH）D2及 25-（OH）D3。API3200 串联质谱仪购自美国AB SCIEX公司，Shimadzu系列液相色谱仪购自日本岛津公司，检测试剂购自济南英盛生物技术有限公司。严格按仪器操作指南及试剂说明书操作。

1.2.3 判断标准 参照国内外多数文献采用的通用判断标准[7]：血清25-（OH）D＜20 ng/mL为缺乏，20～30 ng/mL为不足，＞30～100 ng/mL 为适宜，＞100～150 ng/mL 为过量，＞150 ng/mL为维生素D中毒。

1.3 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计量资料以表示，经方差齐性检验后，2组资料间比较采用独立样本t检验，3组资料间比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 绵阳市1 002例 0～6岁儿童血清25-（OH）D2+D3水平总体分布 血清 25-（OH）D2+D3水平为（25.71±11.85）ng/mL，水平最低为2.58ng/mL，最高为90.84ng/mL，未发现维生素D过量及中毒者。缺乏者共370例，占比36.93%；不足者 346例，占比 34.53%；适宜者仅占28.54%。见表1。

表1 绵阳市1 002例0～6岁儿童血清25-（OH）D2+D3水平总体分布

2.2 不同性别儿童血清25-（OH）D2+D3水平比较1 002例 0～6岁儿童中，男性儿童 557例，血清 25-（OH）D2+D3水平为（25.58±11.61）ng/mL；女性儿童 445 例，血清25-（OH）D2+D3水平为（25.86±12.16）ng/mL。2 组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 不同性别儿童血清25-（OH）D2+D3水平分布

2.3 不同年龄组儿童血清25-（OH）D2+D3水平比较0～1组儿童血清25-（OH）D2+D3水平为（26.57±12.09）ng/mL，＞1～3 组儿童血清 25-（OH）D2+D3水平为（25.29±11.61）ng/mL，＞3～6 组儿童血清 25-（OH）D2+D3水平为（23.16±10.89）ng/mL，其中仅大于3～6岁组与0～1岁组血清25-（OH）D2+D3水平比较，差异有统计学意义（P=0.01）。见表3。

表3 不同年龄段儿童血清25-（OH）D2+D3水平分布

3 讨 论

作为人体必需的营养元素之一，维生素D具有广泛的骨骼系统和非骨骼系统效应。其适宜的浓度对维持机体多个系统的正常发育非常重要，尤其是对于儿童的健康及体格发育。研究发现，维生素D缺乏已成为全球性的营养问题。据估计，全世界约有10亿人处于维生素D缺乏或不足水平[7]。人体内维生素D主要以25-（OH）D2（麦角钙化醇）与25-（OH）D3（胆钙化醇）2种形式存在，前者来自于植物性食物及外来补充剂，后者主要来自于动物性膳食及紫外线照射皮肤合成。血清25-（OH）D因其性质稳定、半衰期长、血清浓度高，被用作评价维生素D营养状况的客观指标[4]。有研究表明，不同的检测方法可能导致维生素D检测结果之间存在较大的差异[8]。因其准确度高，特异性强，可以有效区分25-（OH）D2与25-（OH）D3，甚至能区分3-epi 25羟基维生素D3[3-epi 25（OH）D3]，液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）法被认为是检测 25（OH）D 的“金标准”[9-11]。

本研究发现，绵阳地区0～6岁儿童血清维生素D缺乏仍非常普遍，其血清25-（OH）D2+D3水平为（25.71±11.85）ng/mL，人群中适宜率仅占28.54%。男性与女性儿童血清25-（OH）D2+D3水平比较差异并无统计学意义（P＞0.05），这与郝新忠等[12]的报道结果一致，而与陈珊珊等[13]的报道结果不一致。这可能与样本数多少、检测方法不一致等因素有关。随年龄增长，儿童血清维生素D水平逐渐降低的趋势与很多研究一致[14-15]，其中大于3～6岁组与0～1岁组比较，其血清维生素D水平降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。导致这一现象的原因可能与下列因素有关：0～1岁组婴幼儿以母乳或配方奶为主，乳、奶制品含维生素D相对高，且根据喂养指南，3岁以下婴幼儿均常规补充鱼肝油等维生素D制剂，再者1岁以下婴幼儿做儿童保健频率高，能经常从医生处获取关于维生素D补充重要性的相关知识，故而家长重视度高；而处于3～6岁组的儿童，随年龄增长，机体对维生素D的需求增加，而儿童每天奶制品的获取情况良莠不齐，加之偏食、家长重视不够等原因，很容易导致血清维生素D缺乏或不足，后一点从大于3～6岁组来院常规体检人数与0～1岁组比明显下降也可以佐证。

综上所述，绵阳地区0～6岁儿童血清维生素D营养状况较差，应加强血清25-（OH）D2+D3水平的检测，尤其是对3～6岁儿童应及时补充，为临床维生素D缺乏性佝偻病及维生素D缺乏性相关疾病的研究和治疗提供实验室依据。当然，因样本数相对较少，结果可能存在一定偏倚。今后尚需进一步大样本研究观察，同时会考虑季节等因素对血清维生素D水平的影响。