VITEK-2 Compact AST-GN16检测鲍曼不动杆菌对阿米卡星和哌拉西林-他唑巴坦药敏结果的准确性评价*

武爱荣，安 良，黄 波，马霄婷

(西安高新医院检验科，西安 710075)

鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumamii’sAb)属于革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界，是医院环境中常见的条件致病菌，常分离自定植患者附近设备、环境表面和物品上。近年来，随着广谱抗生素的大量使用，使鲍曼不动杆菌的耐药率不断升高，继而成为多重耐药菌，给临床治疗带来挑战。所以，在治疗因该菌引起的感染时，必须依据微生物实验室的药敏结果做到合理用药，而药敏检测结果的准确性是关键。目前，临床微生物实验室常采用VITEK-2 Compact进行细菌鉴定和药物敏感性试验，该方法不仅可以给出抗生素的最小抑菌浓度(MIC)，还缩短了检测时间，使患者及时得到有效治疗。但是，仪器孵育时间的缩短，会使一些药敏结果不准确性的风险增加[1]。杨银梅等[2]报道VITEK 2 Compact在检测耐亚胺培南(IPM)鲍曼不动杆菌对阿米卡星(AK)的敏感性时会出现不准确的结果。本次研究是根据VITEK-2 Compact AST-GN16说明书提示，在检测鲍曼不动杆菌对AK和哌拉西林/他唑巴坦(TZP)两种药敏结果时，通过与K-B法和E-test法比对，验证VITEK法的准确性。

1 材料与方法

1.1 菌株 收集2017年5月～2018年5月西安高新医院临床分离的100株鲍曼不动杆菌，剔除同一患者相同部位的重复菌株，所有菌株均经VITEK-2 Compact全自动微生物细菌鉴定仪鉴定。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853购自卫生部临床检验中心。

1.2 仪器和试剂

1.2.1 仪器：VITEK2 Compact全自动微生物细菌鉴定仪、微生物浊度比浊仪由法国梅里埃公司生产。

l.2.2 试剂：阿米卡星(30 μg/片)、哌拉西林/他唑巴坦(分别为100，10 μg/片)两种药敏纸片和两种药物的E-test条，均由英国OXOID公司生产；GN鉴定卡和GN16药敏卡，水解酪蛋白琼脂(MH)，哥伦比亚血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基均由法国梅里埃公司生产，试验期间均在有效期内。

1.3 方法

l.3.l 体外药敏试验及结果判读：K-B法、质量控制和结果判读：敏感(S)、中介(I)、耐药(R)均参照美国CLSI M100S(2016版)进行操作[3]；VITEK2 Compact鉴定及配套AST-GN16药敏卡测定和质量控制，严格按照仪器操作规程进行；E-test法：试验操作、结果判读和质量控制，严格按照试剂说明书进行操作。

l.3.2 药敏数据分析标准：参照美国CLSI M23-A2文件[4]，标准一致性(categorical agreement，CA)指实验方法与参考方法的符合率；一般错误率(minor errors，MIE)指参考方法的结果为R或S，实验方法为I，或者参考方法的结果是I，实验方法为S或R；严重错误率(major errors，ME)指参考方法的结果为S，实验方法为R；极严重错误率(very major errors，VME)指参考方法的结果是R，实验方法为S；它们可接受的误差范围分别为CA≥90%，MIE≤10%，ME≤3%，VME≤1.5%。

l.4 统计学分析 采用SPSS19.0统计学软件，进行数据分析，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 菌株分布 临床分离的100株鲍曼不动杆菌，分别来自痰76株、尿8株、血5株、导管4株、分泌物3株、引流液2株、组织1株、胸腔积液1株；科室分布为呼吸监护室30株、ICU 33株、神内监护室22株、神外监护室10株、泌尿科2株、血液科、肾内科及胸外科各1株。

2.2 三种方法药敏结果比较 见表1。对收集的100株鲍曼不动杆菌，应用E-test法、K-B法和VITEK仪器法对IPM，AK和TZP进行药敏试验，对IPM敏感的有20株，3种方法对AK和TZP的药敏结果也均敏感，结果差异无统计学意义(P>0.05)；对IPM耐药的有80株，用E-test法和K-B法两种方法检测AK，TZP的药敏结果差异无统计学意义(P>0.05)；而用VITEK仪器法检测的AK，TZP药敏结果与其它两种方法比较，差异有统计学意义(χ2=63.79，6.5，均P<0.05)。

2.3 三种方法结果比较 见表2。以E-test法为参考方法，K-B法和VITEK仪器法的CA，MIE，ME和VME结果分析，K-B法与E-test法的药敏结果一致；VITEK仪器法与E-test法的TZP药敏结果一致，而AK药敏结果，VME为50.00%，按照判断标准为不可接受的结果，与E-test法比较存在显著性差异。

表2 E-test法与K-B法和VITEK仪器法结果比较[n(%)]

3 讨论

由于鲍曼不动杆菌具有强大的获得性耐药和克隆传播能力，使得各种耐药表型的鲍曼不动杆菌呈现世界性流行趋势[5]，在我国该菌也是医院感染的重要致病菌之一，尤其在重症监护室(ICU)分离率最高，且多分离自痰标本[6，7]，2016年中国14家教学医院革兰阴性杆菌耐药监测数据显示，鲍曼不动杆菌对碳青霉烯的耐药率高达80%以上[8]。本次收集的100株鲍曼不动杆菌，主要来自ICU，呼吸科和神外监护室，痰标本分离率最高，其次是尿、血和导管等，耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌占分离菌株的80%(80/100)，与国内报道一致。

近年来，在国家对抗生素合理应用的专项整治活动推进下，临床医生用药越来越规范，微生物实验室检测抗生素的方法也越来越先进，自动化鉴定和药敏仪成为实验室的有力工具。目前，VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定加药敏仪器在临床实验室已得到广泛应用和肯定[9]。该药敏系统使用微量肉汤稀释法检测MIC值，随着细菌生长，菌液浊度增大，仪器每隔一段时间通过读取每个小孔光线的量获取的该药物孔透光度值与生长对照孔比较，通过公式计算出MIC值[10]。VITEK-2 Compact AST-GN16药敏卡的使用说明书虽然给出了AK和TZP的MIC测定范围，但需要用替代方法进行验证。本次研究的100株鲍曼不动杆菌，以E-test法为参考方法，与K-B法的比较结果显示，对IPM敏感的菌株，3种方法测得的AK，TZP药敏结果无差别，均敏感。对IPM耐药菌株，AK用VITEK法检测的耐药率仅为11.25%，虽与国内有关报道[11，12]一致，但正是由于部分使用VITEK仪器的用户，没有认真阅读产品说明书所致，给出错误的药敏结果，误导临床选择用药。而用其它两种方法检测AK的耐药率均在60%以上，与闻海丰等[13]报道一致。VITEK法检测AK的敏感率远高于其它两种方法，这是由于AK对鲍曼不动杆菌的抗菌作用中，介于细菌明显生长与完全不生长之间存在缓慢生长区有关[14]，导致仪器读取假敏感结果。与E-test法比对，K-B法将2株敏感菌株检测为耐药，是由于结果判读误差导致，应进一步加强实验室工作人员标准化操作培训，避免因人员操作因素引起的实验误差。VITEK仪器在检测TZP结果时，有5株耐药菌株读取为中介，是否与细菌存在缓慢生长区有关，还需进一步验证。

进行细菌耐药监测，可以了解细菌耐药性的变化趋势和耐药菌株流行情况，指导临床合理使用抗生素。但由于不同医院使用的药敏方法、人员操作和仪器解读等原因，使上报数据存在较大差异[15]。本次研究是以E-test法为参考方法，成本高；而VITEK仪器法在检测AK和TZP时会出现不同程度的不可接受结果。通过3种方法比对发现，K-B法的CA，MIE，ME和VME均在可接受范围，而且该法具有操作简便、选药灵活和成本低的优势。所以，临床微生物实验室在用VITEK仪器法做鲍曼不动杆菌的药敏试验时，应认真阅读药敏卡说明书，采用K-B法针对需要验证的药敏结果进行确认，获取准确的抗生素敏感性，指导临床合理使用抗生素，保证细菌耐药监测数据的质量。