枳椇子水提液对急性酒精中毒小鼠的影响

右江民族医学院，广西 百色 533000

急性酒精中毒，是指在短时间内大量饮酒后，乙醇的吸收大于代谢，吸收的乙醇通过血脑屏障致使中枢神经系统产生先兴奋随后抑制，甚至危及生命的状态[1-2]。急性酒精中毒的发生率在大幅增加，不但严重损坏大众健康，亦非常容易产生许多社会问题[3]。因此，寻找安全、有效的中药解酒制品已日益受到关注。枳椇子，又可称为鸡距子、万寿果、酸枣、结肉籽，是鼠李科植物枳椇的成熟种子。其主要成分为黄酮类、蒽醌类、三萜皂苷类、苯丙素类、二蒽酮类、萘酚类、生物碱类等成分。有抗菌、保肝、解酒、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、泻下之功效。其中黄酮类化合物，主要是黄酮类碳苷化合物可能是枳椇子的重要药效物质[4-5]。 其解酒功能在我国古代就已发现，药王孙思邈曾高度评价枳椇子的解酒功能为“园中生枳椇，家中无醉人”。

现代研究表明，枳椇子可能是因为能清除氧自由基和抗脂质过氧化，具备护肝、解酒之功效[6]。但对探究枳椇子水提液对胃肠运动的影响来促进解酒的研究较少。因此，本实验通过探究枳椇子水提液对急性酒精中毒小鼠胃肠运动的影响及枳椇子的解酒原理以期能对其临床应用有一定指导意义。

1 仪器与材料

1.1 实验动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体质量范围20～28 g，右江民族医学院动物实验中心供应，许可证号：SCXK桂2017-0003，小鼠质量合格证号：0007556。

1.2 试剂 一氧化氮(NO)试剂盒(批号：A012)、 乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒(批号： A083-1)、乙醇试剂盒(批号：E036)均为南京建成生物工程研究所，解酒灵(批号：20170101，江西光达可信医药生物公司)、无水乙醇(批号：20170918，天津市大茂化学试剂厂)、羟甲基纤维素钠(批号：20110219，成都市科龙化工试剂厂)

1.3 仪器 日立7600-020E型全自动生化分析仪、722N型分光光度计，低速台式离心机(上海精密科学仪器有限公司)。

2 方法

2.1 枳椇子水提液的制备 选枳椇子干品50 g置于500 mL蒸馏水中达8 h，小火煎煮至沸腾后再煎煮1.5 h，第2次添300 mL蒸馏水，小火煎煮至沸腾后再煎煮1 h，聚集两次煎液于同一器皿，然后过滤，浓缩至2 g/mL，置于冰箱冷藏封口备用，等待用时加蒸馏水配置为浓度2000 g/L、1000 g/L、500 g/L，小鼠给药体积为0.1 mL/10 g[7]。

2.2 碳末悬液的制备 称5 g活性碳末与1 g羟甲基纤维素钠，置其于100 mL水中，转动玻璃棒使它们均匀混合后配成碳末悬液后放置于冰箱冷藏，等待需要用时将温度恢复至室内温度[8]。

2.3 动物分组和给药方法 取小鼠60只，将其自由组合成6组，即正常对照组、模型组、解酒灵组、枳椇子水提液高、中、低剂量组。正常对照组与模型组每天灌与其他组等量体积的蒸馏水，解酒灵组每日依据1 g/ kg的药量喂养，枳椇子水提液高剂量组、枳椇子水提液中剂量组、枳椇子水提液低剂量组每天分别按照2000 g/ L、1000 g/ L、500 g/ L的给药量灌喂，所有小鼠皆按照0.1 mL/10 g的药量给药，其给药方法为灌胃给药，频次为1天1次，持续7 d。

2.4 小鼠急性酒精中毒模型的建立 最后一次灌药前12 h小鼠停止进食但不停止进水，除了正常对照组的小鼠外，其它组的小鼠在灌喂相应药液完毕之后均灌胃50%酒精，30 min后再以5%碳末悬液0.25 mL/10 g灌胃[8]。

2.5 血生化指标测定 上述操作完成时间达15 min时，摘小鼠眼球采血并离心获得其上层血清，并根据说明书上方法来测定其血清NO、血乙醇、乙醇脱氢酶浓度。

2.6 小鼠胃内容物残留率和炭末推进比的测量与计算 采血完毕立即剖腹将胃及小肠取出，先称胃称质量(胃总质量)，用手术剪沿胃大弯部将胃剪开并排出胃内容物，然后冲洗胃中的残留物将残留物洗净并用滤纸吸干多余水分，称量并记录胃净质量。计算胃内容物残留率(%)= (胃总质量—胃净质量)/半固体米糊质量×100% 。根据胃内容物残留率的数值大小指标评判胃排空的速度。用直尺量取胃的幽门部到回盲部的长度当做“小肠总长”，将取出的小鼠小肠自然摆成直线平铺于桌面上并进行测量，用直尺量取胃幽门到炭末前沿的长度当做“炭末推进长度”，并根据以下式子求炭末推进比：炭末推进比(%)=炭末推进长度(cm)/小肠总长(cm)×100% 。 根据炭末推进比的数值大小作为标准评判小肠的推进速度[8]。

2.7 统计学处理方法 数据采用SPSS 13.0处理，以(x±s)形式表示，计量资料组间比较利用 One-Way ANOVA，P<0.05为差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 枳椇子水提液对急性酒精中毒小鼠血清血乙醇、乙醇脱氢酶的影响 由表1可知，与正常对照组相比，模型组的血乙醇值明显上升(P<0.01)，乙醇脱氢酶值明显下降(P<0.01)说明了急性酒精中毒小鼠模型创造成功；跟模型组比较，枳椇子水提液高剂量组的血乙醇较低(P<0.05)，乙醇脱氢酶较高(P<0.05)，枳椇子水提液中剂量组、枳椇子水提液低剂量组、解酒灵组的血乙醇浓度呈现下降趋势，乙醇脱氢酶水平呈现上升趋势，但无统计学意义(P>0.05)，证明枳椇子水提液能抑制乙醇吸收，降低血液中乙醇的水平，增加血液中乙醇脱氢酶水平，且枳椇子水提液高剂量组效果优于枳椇子水提液低剂量组、中剂量及解酒灵组。

3.2 枳椇子水提液对急性酒精中毒小鼠血清 NO浓度的影响 由表1可知，与正常对照组相比，模型组的 NO值稍高但无统计学意义(P>0.05)；与模型组相比，低剂量、中剂量、高剂量、解酒灵组的 NO值均升高(P<0.05)，说明枳椇子水提液、解酒灵跟 NO相关。

表1 枳椇子水提液对急性酒精中毒小鼠血乙醇、乙醇脱氢酶、一氧化氮的影响

3.3 枳椇子水提液对急性酒精中毒小鼠胃内容物残留率及炭墨推进比的影响 由表2可知，与正常对照组相比，模型组的胃内容物残留率上升(P<0.01)，炭墨推进比下降(P<0.05)，表明了急性酒精中毒后小鼠胃排空速度、小肠推进均有减慢；与模型组相比，中剂量组、高剂量组的胃内容物残留率均下降(P<0.01)，碳末推进比均上升(P<0.01，P<0.05)，解酒灵组的胃内容物残留率呈下降趋势，碳末推进比呈升高趋势，但无统计学意义(P>0.05)，说明中、高剂量组具备加快急性酒精中毒小鼠胃排空及加快小肠推进的功用。

表2 枳椇子水提液对急性酒精中毒小鼠胃内容物残留率、碳末推进比的影响

4 讨论

醉酒的发展主要取决于胃肠吸收和肝脏代谢速度，当胃肠吸收大于肝脏代谢能力时，体内乙醇会随着血液循环进入大脑，影响大脑皮质，让神经存在短暂的兴奋而后受到抑制[9]。酒精在胃肠道吸收后，在乙醇脱氢酶催化下转化成乙醛，乙醛被乙醛脱氢酶氧化为乙酸后以乙酰辅酶 A的存在形式进入到三羧酸循环，形成二氧化碳和水[10]，若乙醛不能快速形成二氧化碳和水排出体外，则会在体内组织和脏器聚积。乙醇的首过代谢(FPM)，指个体饮酒后，一部分乙醇在尚未进入肝脏前在消化道内产生被氧化分解的作用[11]，当乙醇经口进入人体后，首先经胃组织吸收，胃黏膜上含有乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶主要氧化分解乙醇的酶类，可在乙醇进入血液和肝脏前优先将其进行代谢分解，从而减少乙醇进入血液的含量，避免大量乙醇涌入肝脏超过肝脏代谢能力引起乙醛等有害物质蓄积，减轻肝脏负担[9]。ADH是人体内重要的代谢酶，有多数学者以为胃ADH在FPM中起重要作用。FPM可以通过降低机体对乙醇的生物利用度，从而减缓其在体内代谢过程中给肝脏、脑等器官造成的损伤。

通过枳椇子水提液治疗后高剂量组的血乙醇水平较低(P<0.05)，乙醇脱氢酶水平较高(P<0.05)，枳椇子水提液中剂量组、枳椇子水提液低剂量组、解酒灵组的血乙醇浓度呈现下降趋势，乙醇脱氢酶水平呈现上升趋势，但无统计学意义(P>0.05)，高剂量组效果优于低、中剂量及解酒灵组。提示枳椇子可能通过提高血液中乙醇脱氢酶水平，此实验结果与宋莎莎等报道的结果一致[6]。增强乙醇在胃肠道的 FPM，抑制乙醇吸收，达到降低血中乙醇的浓度的目的，实验结果与王洁等报道的结果一致[1]。而解酒灵的解酒原理是使乙醇的吸收过程被消化道所阻断，增强它的 FPM作用，同时降低它在血液中的含量，以减弱它对机体的神经、消化等系统的损伤[12]。

NO能促进小肠血管平滑肌舒张，生理状况下，70%～80%小肠黏膜血流量由小肠供血，小肠黏膜血流量能增强小肠运动， NO值增加使血流量增加从而提高小肠的新陈代谢和物质交换，及时为小肠提供收缩运动中所需要的营养物质和能量物质，并且还能为小肠清除代谢产物，进而增强小肠运动功能[13]。通过治疗后低剂量组、高剂量组、解酒灵组的 NO水平都上升(P<0.05)， 提示枳椇子、解酒灵可通过提高 NO水平来舒张小肠血管平滑肌，增加小肠黏膜血流量，提高小肠的新陈代谢和物质交换，从而增强小肠运动功能，使进入血液循环的乙醇减少。

胃排空速度快慢与胃运动的强弱有关，而又可通过计算胃内容物残留率来评判胃运动的强弱，胃内容物残留率可以作为评价胃排空速度快慢的指标，其数值小则表明胃排空速度快。食物在小肠推进的快慢与小肠运动的强弱有关，可以通过测量炭墨推进比间接反映小肠运动的速度，炭墨推进比越高，小肠运动越强。与正常对照组相比，模型组的胃内容物残留率上升(P<0.01)，炭墨推进比下降(P<0.05)，说明急性酒精中毒后小鼠胃排空速度、小肠推进均减慢，通过枳椇子水提液治疗后中剂量组、高剂量组的胃内容物残留率皆降低(P<0.01)，碳末推进比均升高(P<0.01，P<0.05)，提示枳椇子有拮抗乙醇抑制胃肠运动的作用，又可加快肠运动和胃运动来促进乙醇的胃肠排空，使进入血液循环的乙醇减少致使起到解酒的功效。有研究报道[4，14]，枳椇皂苷能促进肠管蠕动、有利尿作用，蒽醌类衍生物中的大黄素有泻下作用，是否与此有关需进一步探究。

综上所述，枳椇子水提液有促进胃肠运动及解酒作用，其解酒机制可能与乙醇在胃肠道的首过代谢、促进肠胃运动及NO水平有关。