小麦植株中叶菌唑残留测定方法

李如美，戴 争，李瑞娟，李丹丹，高宗军

（山东省农业科学院植物保护研究所，山东省植物病毒学重点实验室，济南 250100）

叶菌唑（metconazole）是一种对非靶标生物毒性低，挥发性小，用量少，杀菌活性高的新型、广谱、内吸性三唑类杀菌剂，可有效防治小麦赤霉病、白粉病以及锈病等禾谷类作物病害。叶菌唑是生产上控制小麦病害的重要杀菌剂品种[1-2]。小麦作为重要的粮食作物，在中国人餐桌上的呈现形式多种多样。因此，优质小麦种植的意义深远，小麦的安全生产备受关注。实现优质小麦的无公害生产，提高国际市场的竞争力，增加农民收入，是我国现代农业发展的必然趋势。目前，国内外针对叶菌唑的残留分析报道多关于肉类、水果及谷物，检测方法主要包括气相色谱-氮磷检测器法、气相色谱-质谱法、气相色谱-串联质谱法以及高效液相色谱-串联质谱法等[3-6]。本研究以小麦为试验对象，建立乙腈超声离心法、二氯甲烷萃取法2种提取方法，通过高效液相色谱探索方法的可行性，为小麦植株中叶菌唑的测定提供更多的方法选择。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260高效液相色谱仪，安捷伦科技有限公司；BHWY-2102C变频摇床，宁波赛福实验仪器有限公司；Z326K高速冷冻离心机，德国HERMLE公司；SQP百分之一电子天平、BSA224S-CW万分之一电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司。

叶菌唑标准品（99.5%），Dr.Ehrenstorfer公司；叶菌唑原药（95%），江苏耕耘化学有限公司提供；丙酮（色谱纯），美国TEDIA公司；乙腈（色谱纯），禹王试剂，山东禹王和天下新材料有限公司；二氯甲烷（分析纯），天津市富宇精细化工有限公司；纯水。

1.2 标样溶液的配制

准确称取0.010 1 g叶菌唑标准品于100 mL棕色容量瓶中，色谱纯甲醇溶解定容，配制成100 mg/L叶菌唑标样储备液，再用色谱纯甲醇梯度稀释配制质量浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 mg/L的标样工作溶液。

1.3 小麦样品的前处理

1.3.1 乙腈超声离心法

用百分之一电子天平称取10.00 g经匀浆处理的小麦植株浆液，置于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈，经超声提取，高速冷冻离心机以4 000 r/min离心处理5 min。取上清液至100 mL具塞量筒，重复3次，过滤合并3次离心所得上清液。向具塞量筒中加入7 g无水氯化钠，振荡2 min，静置1 min，再振荡1 min，静置40 min。取30 mL提取液于50 mL鸡心瓶中，经旋转蒸发仪50℃旋转浓缩近干，用正己烷＋丙酮（体积比95∶5）定容至5 mL，待净化。

1.3.2 二氯甲烷萃取法

称取10.00 g经匀浆处理的小麦植株浆液至100 mL分液漏斗中，向分液漏斗中加入20 mL二氯甲烷作为提取溶剂，机械振荡5 min，静置5 min，分出有机层。重复3次，合并3次提取液于100 mL鸡心瓶中。经旋转蒸发仪40℃旋转浓缩近干，用正己烷＋丙酮（体积比95∶5）定容至5 mL，待净化。

1.4 样品的净化

用5 mL正己烷＋丙酮（体积比95∶5）对Bond Elut Carbon固相萃取柱进行2次活化处理，再将固相萃取柱置于鸡心瓶上，待净化样品经涡旋振荡器涡旋，转移至固相萃取柱，静置5 min，再用5 mL上述正己烷＋丙酮溶液洗脱2次。经旋转蒸发仪40℃旋转浓缩近干，用甲醇定容至5 mL，过0.22 μm滤膜，待测。

1.5 仪器条件

Agilent 1260高效液相色谱仪，带紫外检测器；检测波长：220 nm；流动相：甲醇＋水（体积比75∶25）；流速：1 mL/min；进样体积：20 μL；柱温：30℃；色谱柱：SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

2 结果与分析

2.1 仪器条件优化

对叶菌唑进行紫外全波长扫描，并对仪器出峰的灵敏度进行对比，选择220 nm作为叶菌唑的检测波长。流速相同，流动相中甲醇体积分数越小，保留时间越长，出峰越慢，且峰宽增加，峰高降低。试验证明：甲醇＋水在体积比79∶21时，峰高适中；甲醇＋水在体积比为75∶25时，峰面积最大。综合考虑出峰时间、峰形以及杂质的影响，确定叶菌唑高效液相色谱最优检测条件为色谱柱SB-C1（8250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相甲醇＋水（体积比75∶25），流速1 mL/min，检测波长220 nm。

2.2 叶菌唑的标准曲线

制备0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L叶菌唑标样溶液，经高效液相色谱仪检测分析，并以叶菌唑质量浓度为横坐标，对应色谱峰峰面积为纵坐标，绘制标准曲线（见图1）。方法线性回归方程为y=44.903 x＋1.448 8（R2=0.999 9）。结果表明，叶菌唑质量浓度为0.1～10.0 mg/L时，叶菌唑的质量浓度与对应峰面积存在显著线性关系，相关系数为0.999 9。

图1 叶菌唑标准曲线

2.3 2种提取方式添加回收率测定

2.3.1 乙腈超声提取法回收率测定结果

称取小麦植株10.00 g，添加叶菌唑标样溶液，使叶菌唑添加质量分数分别为0.05、0.50、5.00 mg/kg，

每个处理设5次重复。按照1.3.1方法提取，并净化，测定样品中叶菌唑的质量分数，计算添加回收率（见表1）。由表1可知，采用乙腈超声离心法对小麦植株中叶菌唑进行提取，方法的平均回收率为90.40%～98.39%，相对标准偏差（RSD）为1.62%～5.10%。结果表明，本分析方法可满足农药残留分析要求。在此条件下，叶菌唑在小麦植株中的最低检测质量分数为0.05 mg/kg。

表1 乙腈超声离心法对小麦中叶菌唑添加回收结果

2.3.2 二氯甲烷萃取法回收率测定结果

称取小麦植株样品10.00 g，添加叶菌唑标样溶液，使叶菌唑添加质量分数分别0.10、0.50、5.00 mg/kg，每个处理设5次重复。按照1.3.2方法提取，并净化，测定样品中叶菌唑的质量分数，计算添加回收率（见表2）。由表2可知，采用二氯甲烷对小麦植株中叶菌唑进行萃取，方法的平均回收率为91.34%～95.00%，相对标准偏差为0.86%～3.89%。结果表明，该分析方法可满足农药残留分析要求。在此条件下，叶菌唑在小麦植株中的最低检测质量分数为0.10 mg/kg。

表2 二氯甲烷萃取法对小麦中叶菌唑添加回收结果

3 结论

本研究采用高效液相色谱，以乙腈超声离心法和二氯甲烷萃取法对样品中叶菌唑进行提取，固相萃取柱净化，SB-C18色谱柱分离测定叶菌唑在小麦植株中的残留。该方法灵敏度高，重现性好，能排除杂质干扰。