40%阿维菌素干悬浮剂的HPLC分析

李 飞，韩冲冲，李保同

（江西农业大学农学院，南昌 330045）

阿维菌素（abamectin）是由日本北里大学和美国Merck公司开发的一类具有杀虫、杀螨和杀线虫活性的十六元大环内酯类化合物[1]，已广泛用于水稻、烟草、果树和蔬菜等作物上害虫和螨类的防治[2-4]。目前国内已有阿维菌素水乳剂、微乳剂的HPLC分析方法报道[5-6]，但多采用甲醇＋水体系为流动相，分析时间往往较长。本文采用乙腈＋水为流动相，对绿色环保新制剂40%阿维菌素干悬浮剂中的有效成分进行HPLC分析，方法操作简便，可以快速准确地对阿维菌素进行定量分析。

1 试验部分

1.1 试剂

乙腈（色谱纯）；96.0%阿维菌素标准品（农业农村部农药检定所提供）；40%阿维菌素干悬浮剂（江西纳农新田科技有限公司）。

1.2 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪，带DAD检测器（美国Agilent科技有限公司）；色谱柱：Zorbax E-clipse XDB-C1（8150 mm×4.6 mm，5 μm）不锈钢柱；0.22 μm有机滤膜；超声波清洗器；紫外可见分光光度计。

1.3 色谱条件

流动相：V（乙腈）∶V（水）=80∶20；流速为1 mL/min；检测波长为245 nm；柱温为30℃；进样量为20 μL。在此条件下，阿维菌素B1a保留时间为7.137 min，阿维菌素B1b保留时间为4.056 min。阿维菌素B1a和B1b标样溶液液相色谱图见图1。

图1阿维菌素标样溶液液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

准确称取0.010 8 g阿维菌素标准品（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，适量乙腈溶解，超声波水浴助溶15 min，冷却至室温，然后用乙腈定容，配制成200 mg/L母液，备用。

1.4.2 试样溶液的配制

称取0.025 0 g试样（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入乙腈，超声波水浴助溶，冷却至室温，然后用乙腈定容，过0.22 μm有机滤膜，备用。

1.4.3 测定

在上述液相色谱条件下，待仪器泵的压力和基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻2针峰面积变化小于1.5%时，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样。

1.4.4 计算

根据标样溶液和试样溶液中阿维菌素（B1a＋B1b）的峰面积，按外标法定量计算试样溶液中阿维菌素（B1a＋B1b）的质量分数w（%），计算公式如下。

式中：A1为标样溶液中阿维菌素（B1a＋B1b）峰面积的平均值；A2为试样溶液中阿维菌素（B1a＋B1b）峰面积的平均值；m1为阿维菌素（B1a＋B1b）标准品的质量（g）；m2为试样的质量（g）；P为阿维菌素（B1a＋B1b）标准品的质量分数（%）。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

通过DAD二极管阵列检测器进行全波长扫描，获得阿维菌素紫外吸收谱图（图2）。从图中看出，阿维菌素在245 nm附近响应值最大。因此选择245 nm为检测波长。

阿维菌素可以使用甲醇＋水体系和乙腈＋水体系为流动相。试验发现，以乙腈＋水体系为流动相，峰形尖锐，保留时间更短，且与杂质峰分离效果好，吸收峰在7.13min和4.06min附近。故选择乙腈＋水体系为流动相，两者体积比为80∶20，流速为1mL/min。

图2 阿维菌素紫外吸收谱图

2.2 方法线性关系测定

用流动相将200 mg/L标样溶液母液逐级稀释为质量浓度0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、20 mg/L的标样溶液，在上述色谱检测条件下，用外标法（峰面积）进行定量分析。以待测阿维菌素的质量浓度为x轴，以色谱峰的峰面积为y轴，作标准曲线图。方法的线性回归方程y=34.942 0 x-0.021 2，R2=0.999 9（图3）。结果表明：在质量浓度0.01～20 mg/L时，阿维菌素峰面积与质量浓度线性关系良好。该方法可用于阿维菌素的分析和检测。

图3 方法的线性关系图

2.3 方法精密度测定

从同一阿维菌素制剂产品中称取5份试样，在上述色谱条件下测定阿维菌素的质量分数，得到标准偏差和变异系数，结果见表1。方法的标准偏差为0.43，变异系数为1.06%，变异系数满足国际农药分析协作委员会（CIPAC）的要求（＜1.71%）。

表1 40%阿维菌素干悬浮剂精密度测定结果

2.4 方法准确度测定

准确称取5份已知含量的40%阿维菌素干悬浮剂试样，分别置于50 mL容量瓶中，每份试样中加入一定量的阿维菌素标准品，在上述色谱条件下测定。阿维菌素的回收率为99.39%～102.11%，平均回收率为100.37%（见表2）。

表2 40%阿维菌素干悬浮剂回收率测定结果

3 结论

本方法以C18反相色谱柱为分离柱，乙腈＋水（体积为80∶20）为流动相，245 nm为检测波长，测定40%阿维菌素干悬浮剂中有效成分的质量分数。方法具有操作简便，分离效果好，线性关系良好，准确度和精密度高等优点，适用于制剂中阿维菌素的定量分析。