丙肝病毒核心抗原检测在丙肝患者诊断中的应用

古国宁 蒋小艺 张宏佳

丙型肝炎是一种临床常见病, 其临床特征接近于乙型肝炎, 但症状相对较轻, 与乙型肝炎相比, 丙型肝炎更容易出现肝硬化, 发展成为肝癌的几率更大, 因此丙肝病毒的变异性较高, 所以丙肝疫苗在短期内无法取得突破性的进展, 患者预后普遍较差, 及早的对患者病情做出诊断, 对于改善患者预后, 降低死亡率具有重大影响［1,2］。现临床上多用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对HCV-Ab进行检测, 由于抗体出现的较晚, 存在窗口期, 在一定程度上会影响早期丙肝患者的诊断, 从而失去早期治疗的时机, HCV-cAg检测丙肝的病原体, 与HCV-Ab检测比较, 能更早的检测出丙型肝炎。鉴于上述研究背景, 本文选择2015年6月～2018年6月本院收治的HCV-Ab阳性感染患者55例以及同期门诊体检的HCV-Ab阴性高危者55例进行HCV-cAg检测研究, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 在医院伦理委员会批准下开展本研究, 选择2015年6月~2018年6月本院收治的HCV-Ab阳性感染的住院患者55例作为HCV-Ab(+)组, 同期门诊体检谷丙转氨酶>200 U/L的HCV-Ab阴性高危者55例作为HCV-Ab(-)组。HCV-Ab(+)组女23例, 男32例；年龄36~62岁, 平均年龄(49.26±6.23)岁；体质量指数18~26 kg/m2, 平均体质量指数(22.14±2.05)kg/m2。HCV-Ab(-)组女21例 , 男 34例；年龄38~60岁, 平均年龄(49.14±6.14)岁；体质量指数19~26 kg/m2,平均体质量指数(22.04±2.14)kg/m2。两组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。纳入标准：①自愿参加本次研究者；②年龄>18周岁者；③患者于研究前均知情, 并对知情同意书阅读签字者。排除标准：①合并其他器质性疾病者；②合并心力衰竭、恶性肿瘤者；③存在精神疾病、听语障碍者；④配合度、依从性较差者；⑤存在凝血功能障碍、血液疾病者。

1.2 方法

1.2.1 标本处理 抽取所有研究对象空腹静脉血5 ml, 离心处理, 速率是3000 r/min, 离心时间5 min, 分离血清, 保存在-20℃的冰箱中, 标本确保仅冻融1次。

1.2.2 HCV-cAg检测 采用ELISA法对HCV-cAg进行定性分析, 采用仪器为深圳雷杜生命科学股份有限公司的RT-6100型的酶标仪, HCV-cAg测定试剂盒由湖南景达生物工程有限公司提供。严格按照对应说明书进行操作, 最终在酶标仪上用单波长450 nm读取各孔的吸光度值(A值), 以检测样本的A值≥临界值(C.O.)为检测阳性, 检测样本的A值<临界值(C.O.)为检测阴性。

1.2.3 HCV-RNA检测 采用核酸扩增法对HCV-RNA进行测定, 仪器为美国Applied Biosystems公司的 7500型实时荧光聚合酶链式反应(PCR)分析仪, 试剂为上海科华生物工程股份有限公司的丙型肝炎病毒核酶测定试剂盒(PCR-荧光探针法), 严格按照对应说明书进行操作。对本研究中的两组标本均采用核酸扩增法检测HCV-RNA载量来进行确认试验。以1000 copies/ml为敏感线, >1000 copies/ml为阳性。

1.3 观察指标 比较两组HCV-cAg检测结果, 分析HCV-cAg与HCV-RNA检测结果符合情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS24.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差(±s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组HCV-cAg检测结果比较 HCV-Ab(+)组HCV-cAg检出阳性率为83.64%(46/55), 高于HCV-Ab(-)组的5.45%(3/55), 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组HCV-cAg检测结果比较(n)

2.2 HCV-cAg与HCV-RNA检测结果符合情况 HCV-Ab(+)组中HCV-cAg阳性患者46例, HCV-Ab(-)组中HCV-cAg阳性患者3例, 共49例。HCV-cAg与HCV-RNA的检测结果阳性符合率为94.00%(47/50), 阴性符合率为96.67%(58/60),总符合率为95.45%(105/110)。见表2。

表2 HCV-cAg与HCV-RNA检测结果符合情况(n)

3 讨论

当前, 临床普遍认为丙肝与肝癌、肝硬化的发生有着极为密切的联系, 丙肝患者机体中HCV复制活跃, 具有较强的传染性, HCV可以通过密切接触、静脉吸毒、输血等方式传播, 一般HCV感染是持续性的终生感染, 将近20%的HCV感染患者在10～20年后会发展成为肝硬化, 10年内的生存率较低, 因此HCV复制活跃的患者, 应及早的进行抗病毒治疗,最大限度延缓疾病发展［3,4］。HCV感染早期临床症状较轻,极易被患者忽视, 往往会导致疾病错过最佳的治疗时机。当前临床诊断肝炎病毒的常用方法有HCV-RNA、丙肝病毒重组免疫印迹法(HCV-RIBA), 但是上述检测方法对实验室要求严格, 且操作步骤复杂, 成本较高, 具有一定的局限性, 在基层医院根本无法开展。

人体感染了HCV要经历窗口期, 一般HCV-Ab在HCV感染后的2～6个月内才能检出, 而在感染HCV后的14～35 d,就可检出HCV-cAg［5,6］。HCV-cAg是HCV早期感染的重要标志, 一般是与HCV-RNA同时出现, 感染后的14～70 d是检测HCV-cAg的最佳时段［7］。HCV-cAg检测操作方便、价格低廉、对实验室要求较低, 明显缩短了检测的窗口期, 对于早期诊断患者疾病, 反映HCV复制情况具有一定的积极意义。本文研究示：HCV-Ab(+)组HCV-cAg检出阳性率为83.64%(46/55), 高于HCV-Ab(-)组的5.45%(3/55), 差异具有统计学意义(P＜0.05)。HCV-cAg试剂盒的检测结果与金标准HCV-RAN的检测结果的阳性符合率为94.0%(47/50), 阴性符合率为96.67%(58/60), 总符合率为95.45%(105/110)。证实了HCV-cAg检测在丙肝患者疾病诊断中的可行性、有效性、及可靠性性, 值得作为丙肝患者首选的病情检测方法, 在临床中借鉴、参考价值较高。但是本文仍旧存在一定的不足,例如样本研究容量较小, 研究时限过短等, 对结果一般性有所影响, 因此对于HCV-cAg检测在丙肝诊断中的应用价值,仍旧需要临床进一步扩大样本研究容量, 延长研究时段, 开展大量多中心、前瞻性、大规模的随机试验加以验证。

综上所述, 丙肝患者采纳HCV-cAg检测, 可为临床医师诊断丙肝患者提供一定的参考依据, 与HCV-RAN的总检出符合率高, 能尽早诊断丙型肝炎患者, 尽可能避免患者错过最佳的治疗时机, 临床应用价值较高, 值得信赖并进一步推广。