几种新型杀菌剂对菜豆炭疽病菌的室内毒力测定

戴启星 祝忠有 张树武 徐秉良

（甘肃农业大学植物保护学院，甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室，甘肃兰州 730070）

菜豆炭疽病是发生在菜豆豆荚和植株上的一种较为普遍的病害，在世界各地菜豆种植区内均有发生，不仅为害菜豆，还为害豇豆等，造成不同程度的减产和经济损失（Shao & Teri，1985）。菜豆炭疽病菌侵染豆荚后，豆荚表面产生大量红褐色凹陷病斑，从而导致籽粒干瘪产生畸形，严重影响菜豆的产量、商品价值以及食用价值，一般可减产20%～30%，重者绝产（许志刚，2000；董伟和张立平，2013）。目前防治菜豆炭疽病的方法主要为药剂防治，包括种子处理和田间喷施农药。种子处理是通过药剂拌种进行防治，拌种前先通过人工选种淘汰和剔除染病种子，以提高药剂拌种的防治效果；田间喷施化学农药更倾向于对病情的缓解，从而对症下药。Issa等（1983）、Gillard等（2012）使用福美双、多菌灵、甲基硫菌灵和嘧菌酯对菜豆炭疽病进行田间防治，效果显著；李永镐等（1995，1996）在原有的单剂防治病害的基础上，将多菌灵、百菌清、甲基硫菌灵、福美双按照不同的浓度比例制成10种混合制剂，也取得了很好的防治效果。我国的菜豆品种资源缺乏对炭疽病的抗性，且在许多菜豆种植区都不同程度地出现病原菌对杀菌剂产生抗药性的现象，在生产上急需高效低毒的新型药剂防治措施（刘晓云 等，1995）。本试验以咪鲜胺锰盐、福·福锌、苯醚·溴菌腈、二氢蒽醌、苯醚甲环唑、多福·溴菌腈为供试药剂，对菜豆炭疽病防治药剂进行了室内药效筛选，为有效防治菜豆炭疽病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验于2017年在甘肃农业大学植物病原学实验室进行。

供试菌种：菜豆炭疽病菌由甘肃农业大学植物病原学实验室分离保存。将4 ℃低温保存于斜面的菜豆炭疽病菌接种于 PDA培养基进行活化，并置于25 ℃恒温培养箱中培养。培养6 d后选择生长较好的1皿利用灭菌打孔器制取菌饼，接种于PDA培养基。

供试药剂：50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂（德国拜耳）、80%福·福锌可湿性粉剂（天津施普乐农药技术发展有限公司）、25%苯醚·溴菌腈水分散粒剂（江苏托球农化有限公司）、66%二氢蒽醌水分散粒剂（江西禾益化工有限公司）、10%苯醚甲环唑水分散粒剂（天津施普乐农药技术发展有限公司）、20%多福·溴菌腈可湿性粉剂（中国农业科学院植物保护研究所廊坊农药中试厂）。

1.2 试验方法

1.2.1 供试药剂配制 将不同质量的6种药剂加入60 mL PDA培养基中充分摇匀，分别配制成50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂、25%苯醚·溴菌腈水分散粒剂浓度为 250、500、1 000、2 000、3 000 mg·L-1；80%福·福锌可湿性粉剂、66%二氢蒽醌水分散粒剂、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、20%多福·溴菌腈可湿性粉剂浓度为250、500、1 000、1 500、2 000 mg·L-1。

1.2.2 室内毒力测定 采用生长速率法进行室内毒力测定。将不同质量浓度药剂分别制成含药培养基平板，在无菌条件下从菜豆炭疽病菌菌落边缘打取菌饼（Ф=0.5 cm），接种于含药PDA培养基上。以含有无菌水的PDA培养基作为对照，接菌后置于25 ℃和16 h光照的人工气候箱中，培养3 d后测量每个菌落的直径，并计算菌落生长抑制率。每个处理和对照均设3次重复。

菌落生长抑制率= 〔（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.5）〕× 100%

将药剂对菌落的抑制率转换成机率值（y），药剂各浓度（mg·L-1）转换成数值（x），然后求得毒力回归方程（y=a+bx）和相关系数r，最后计算出供试药剂抑制中浓度（EC50），比较各药剂的相对抑制效果。

1.3 数据统计与分析

采用Excel 2003和DPS软件进行数据处理、图表绘制和方差分析，采用Duncan氏新复极差法进行数据差异显著性检验（P＜0.05）。

2 结果与分析

2.1 3种可湿性粉剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

从图1～3可以看出，3种可湿性粉剂对菜豆炭疽病菌菌落生长均有一定的抑制作用，福·福锌的抑菌效果最好，浓度为1 000 mg·L-1时抑菌率就达到了77.68%，平均菌落直径1.02 cm；多福·溴菌腈次之，浓度为1 000 mg·L-1时抑菌率为59.65%，平均菌落直径1.44 cm；而1 000 mg·L-1咪鲜胺锰盐的抑菌率为57.94%，平均菌落直径1.48 cm。3种可湿性粉剂的浓度与抑菌率呈正相关关系，浓度越大，抑菌效果也随之增强，菜豆炭疽病菌的生长量逐渐变小。从表1中毒力回归方程和EC50也可以看出，3种杀菌剂对菜豆炭疽病菌的毒力大小为：福·福锌＞多福·溴菌腈＞咪鲜胺锰盐。

图1 50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

图2 80%福·福锌可湿性粉剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

图3 20%多福·溴菌腈可湿性粉剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

表1 不同浓度可湿性粉剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

2.2 3种水分散粒剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

从图4～6和表2可以看出，3种水分散粒剂对菜豆炭疽病菌菌落生长均有一定的抑制作用，苯醚甲环唑的抑菌效果最好，在浓度为1 000 mg·L-1时，抑菌率就达到了72.96%，平均菌落直径1.13 cm；苯醚·溴菌腈次之，在浓度为1 000 mg·L-1时，抑菌率为63.52%，平均菌落直径1.35 cm；而1 000 mg·L-1二氢蒽醌的抑菌率为57.94%，平均菌落直径为1.48 cm。3种水分散粒剂的浓度也与抑菌率呈正相关关系；浓度增大时，抑菌效果也随之增强，菜豆炭疽病菌的生长量逐渐变小。从表2中毒力回归方程和EC50可以看出，以上3种杀菌剂对菜豆炭疽病菌的毒力大小次序为：苯醚甲环唑＞苯醚·溴菌腈＞二氢蒽醌。

图4 66%二氢蒽醌水分散粒剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

图5 10%苯醚甲环唑水分散粒剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

图6 25%苯醚·溴菌腈水分散粒剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

表2 不同浓度水分散粒剂对菜豆炭疽病菌菌落生长的影响

3 结论与讨论

目前，使用化学药剂防治菜豆炭疽病已有一些报道，Tu（1996）使用二嗦农、克菌丹、甲基硫菌灵对菜豆进行种子处理，以达到防治炭疽病的目的；李永镐等（1995，1996）将多菌灵、百菌清、甲基硫菌灵、福美双按照不同比例制成10种混合制剂也取得了很好的防治效果。由于近年来菜豆种植区不同程度地出现病原菌对传统杀菌剂产生抗药性的现象，本试验选用6种新型化学农药对菜豆炭疽病的防治进行了研究，在提高作物产量、解决生产过程中存在的抗药性问题等方面具有一定的实践意义。

前人对苯醚甲环唑、苯醚·溴菌腈、咪鲜胺锰盐等农药的研究主要集中在苹果、芒果、柑橘等果树炭疽病的防治上（许文耀和林成辉，2002；蔡美兰，2008；彭埃天 等，2008；宋晓兵 等，2009；许克权 等，2013；胡晓涵，2017），在菜豆炭疽病防治方面未见相关报道。本试验选用6种新型化学农药对菜豆炭疽病进行室内药效筛选和毒力测定，试验结果表明，6种供试杀菌剂对菜豆炭疽菌均有一定的抑制效果，并且随着药剂浓度的增加，对菜豆炭疽病菌菌落生长的抑制作用也逐渐增强。其中防效较好的两种药剂为80%福·福锌可湿性粉剂、10%苯醚甲环唑水分散粒剂，浓度为1 000 mg·L-1时的抑菌率分别达到了77.68%、72.96%。采用生长速率法进行杀菌剂室内药效筛选，仅代表药剂直接接触病原菌菌丝时的抑制作用，而药剂的田间防治效果不仅与药剂对病原菌菌丝的抑制有关，还与病原菌孢子产生、孢子萌发、施药技术、施药时间等因素有关。在后续研究中，还需与田间药效试验相结合，为有效防治菜豆炭疽病提供科学依据。