33%苯醚甲环唑·萎锈灵悬浮种衣剂高效液相色谱分析

陈文杰，车春花，李 军，沈东华，徐新晔

（溧阳中南化工有限公司，江苏溧阳 213300）

萎锈灵是一种具有内吸作用的杂环类杀菌剂，主要用于防治高粱丝黑穗病等禾谷类黑穗病，也可防治小麦穗病、棉草病害、粟白发病等[1]；苯醚甲环唑是三唑类杀菌剂，是甾醇脱甲基化抑制剂，具有广谱内吸性，广泛应用于果树、蔬菜等作物，有效防治黑星病、黑痘病、白腐病、斑点落叶病、白粉病、褐斑病、锈病、条锈病、赤霉病等[2-3]。

目前，国内有关萎锈灵和苯醚甲环唑有效成分分析方法报道有许多[4-6]。但目前同时检测苯醚甲环唑·萎锈灵复配制剂的分析方法尚未见公开报道。本研究采用反向液相色谱法对2种有效成分同时进行测定，具有快速、准确、灵敏度高、重复性好的特点，适用于苯醚甲环唑和萎锈灵产品质量的检测分析。

1 材料与方法

1.1 仪器设备

LC-20A高效液相色谱仪配有紫外检测器，日本岛津公司；XB-C18色谱柱［250 mm×4.6 mm（i.d），5 μm］，月旭科技（上海）股份有限公司；LabSolutions色谱工作站，日本岛津公司；电子天平AL204，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；超声波清洗器KH2200，昆山禾创超声仪器有限公司；有机针式过滤器0.45 μm，上海安普实验科技股份有限公司。

1.2 试剂

苯醚甲环唑标准品（纯度98.9%）、萎锈灵标准品（纯度98.0%），沈阳化工研究院；乙腈（色谱纯），永华化学科技（江苏）有限公司；纯净水，娃哈哈集团；冰醋酸（分析纯），国药集团化学试剂有限公司。

1.3 溶液配制

1.3.1 标样溶液的配制

苯醚甲环唑标准品母液配制：称取0.04 g（精确至0.000 2 g）苯醚甲环唑标准品于50 mL容量瓶中，加20 mL乙腈超声溶解，冷却到室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀待用。

混合标准溶液的配制：称取0.04 g（精确至0.000 2 g）萎锈灵标准品于100 mL容量瓶中，用移液管移取5.0 mL苯醚甲环唑标准品母液于容量瓶中，加20 mL乙腈超声溶解，冷却到室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀待用。

1.3.2 试样溶液的配制

称取含萎锈灵0.04 g（精确至0.000 2 g）的样品于100 mL容量瓶中，加20 mL乙腈超声溶解，冷却到室温后用乙腈稀释至刻度，摇匀过膜待用。

1.4 色谱分析条件

流动相：乙腈-水-冰醋酸（80∶19.5∶0.5，V/V/V），经滤膜过滤，并进行脱气；柱温：（30±2）℃；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；进样体积：5 L。在上述色谱条件下，萎锈灵和苯醚甲环唑保留时间分别约为4.4和5.3 min（见图1、图2）。

图1 萎锈灵和苯醚甲环唑混合标样高效液相色谱图

图2 33%苯醚甲环唑·萎锈灵悬浮种衣剂试样高效液相色谱图

1.5 测定

在1.4所述的色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直到相邻2针的相对响应值变化小于1.5%，按下列顺序进行测定：混合标准溶液，试样溶液，试样溶液，混合标准溶液。

1.6 计算

取2针平行试样溶液和试样峰面积的平均值，按式（1）计算试样中2种有效成分的质量分数w。

式中：A1、A2分别表示标样、试样峰面积平均值，mAU·min；m1表示萎锈灵（苯醚甲环唑）标准品质量，g；m2为萎锈灵（苯醚甲环唑）试样质量，g；P为萎锈灵（苯醚甲环唑）标准品的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

综合考虑萎锈灵和苯醚甲环唑紫外光谱吸收值大小，及萎锈灵与苯醚甲环唑含量比值（10/1），选取检测波长230 nm。该波长下灵敏度较高，杂质干扰少，能满足分析要求。

方法选择C18这类常用色谱柱，使用不同比例的乙腈-水，并用醋酸调节流动相的pH，最后确定三者比例乙腈-水-醋酸为80∶19.5∶0.5（V/V/V）最合适，该条件下分析时间短和分离效果好。

2.2 方法线性相关性分析

配制5个不同浓度梯度的萎锈灵、苯醚甲环唑标准溶液，按1.4所述的色谱条件进样分析，每个浓度分析2次，求其平均值。以萎锈灵（苯醚甲环唑）峰面积（y）为纵坐标，以萎锈灵（苯醚甲环唑）的质量浓度（x）为横坐标作图，得到萎锈灵（苯醚甲环唑）的线性方程，数据结果见表1和表2。萎锈灵线性回归方程：y=14 184x＋40 650，R2=0.999 7；苯醚甲环唑线性回归方程：y=37 909x-949.1，R2=0.999 7。二者的R2值均大于0.999，可见本文方法在萎锈灵和苯醚甲环唑的所测浓度范围内，线性关系良好。

表1 萎锈灵线性关系

表2 苯醚甲环唑线性关系

2.3 方法的精密度分析

任取一批33%苯醚甲环唑·萎锈悬浮种衣剂试样，按本研究中的方法连续测定萎锈灵和苯醚甲环唑含量，分别计算平均值、标准偏差、变异系数、精密度，结果见表3。萎锈灵和苯醚甲环唑的标准偏差分别为0.101 1%和0.024 1%，变异系数分别为0.334%和0.758%。则该方法的重现性好，精密度高。

表3 方法的精密度试验

2.4 方法的准确度试验

在空白试样中添加不等量的苯醚甲环唑、萎锈灵标样，配成不同含量的试样，测定回收率，见表4。苯醚甲环唑和萎锈灵回收率分别在99.6%～101.1%和99.3%～101.7%之内，满足NY/T 2887—2016《农药产品质量分析方法确认指南》[7]对定量分析中回收率的要求。

表4 方法准确度试验结果

3 结 论

本研究建立了高效液相色谱快速测定33%苯醚甲环唑·萎锈灵悬浮种衣剂的分析方法。试验结果表明，该方法操作简便、快速，线性关系良好、准确度和精密度高，是工业化大生产对萎锈灵和苯醚甲唑产品质量控制的实用方法。