桉薄溶液的靶动物(鸡)安全性试验研究

张 帆，李 晶，刘哲林，吕淑荣

(1.上海中医药大学中药研究所，上海 浦东 201203；2.烟台绿叶动物保健品有限公司，山东 烟台 264003)

桉薄溶液是烟台绿叶动物保健品有限公司自主研发的3类新兽药，用于禽用呼吸道疾病的治疗[1]，主要成分为桉油和薄荷脑，其中含桉油以桉油精(C10H18O)计不得少于84.0 mg/mL，含薄荷脑(C10H20O)不得少于88.0 mg/mL。为验证其安全性，采用不同剂量桉薄溶液作用于靶动物(鸡)，观察药物对靶动物(鸡)的影响情况，考察桉薄溶液用于靶动物(鸡)的安全性及安全剂量范围。

1 试验材料

1.1 试验仪器 Eppendorf(德国)Centrifuge 5417R 高速冷冻离心机；ACS-电子计重秤，上海三积分电子有限公司生产；东芝TBA-40FR生化分析仪，株式会社三广医疗生产等。

1.2 试验药物 桉薄溶液，规格：100 mL，批号：110705，烟台绿叶动物保健品有限公司。

1.3 试验试剂 丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒(速率法)，规格：液体双剂型R1：40 mL×3，R2：30 mL×1，批号：120431，中生北控生物科技股份有限公司；尿素测定试剂盒(酶偶联速率法)，规格：液体双剂型R1：50 mL×4，R2：20 mL×2，校准品：2 mL×1，批号：120501，中生北控生物科技股份有限公司；总胆红素测定试剂盒(钒酸盐法)，规格：液体双剂型 R1：48 mL×4，R2：36 mL×1，校准品：0.5 mL×1，批号：110471，中生北控生物科技股份有限公司生产；肌酐测定试剂盒(苦味酸法)，规格：液体双剂型 R1：50 mL×4，R2：20 mL×1，校准品：2 mL×1，批号：120371，中生北控生物科技股份有限公司。

1.4 实验动物 AA肉仔鸡，7日龄，体重170 g～180 g左右；动物来自济南兴平养殖合作社；自由采食，饲料购自山东省农业科学院家禽研究所饲料厂，饲料中不含任何药物；试验在山东省农业科学院家禽研究所动物房。

2 试验方法

2.1 剂量设计 以桉薄溶液对靶动物(鸡)的有效剂量作为本试验的低剂量，即鸡自由饮水的给药比例为桉薄溶液∶水=1∶2 500，7日龄的鸡按每日50 mL/只平均饮水量计算，则桉薄溶液应灌服0.5 mL/只。以此设计3个剂量组，中剂量和高剂量分别为低剂量的3倍和5倍，见表1。

2.2 动物分组及处理 随机挑选60只健康的7日龄AA肉鸡，按表1进行分组处理，所有动物处理后均自由饮水和采食。

2.3 观察指标 给药后，每天观察各组鸡的外观表现，行为活动，精神状况，粪便，发病和死亡情况等；每天记录各组的饮水量和采食量；在试验鸡的12日龄和17日龄称量并记录各组鸡的体重。在12日龄和17日龄的试验鸡中，每组随机取10只，翅静脉采血，制备血清样品，测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(T-Bili)、肌酐(CREA)和尿素氮(BUN)指标。

3 试验结果

3.1 临床表现 给药后，每天观察各组鸡的临床症状，结果表明，各组鸡均精神正常，外观健康，粪便无异常，未出现病鸡和死亡鸡。

3.2 生长水平

3.2.1 饮水量和采食量 连续给药5 d内，各组日平均饮水量和5 d的总采食量、总增重量及料肉比见表2。

表1 动物的分组及处理

注：(1)各组鸡随机分配，体重差异不显著(P>0.05)；(2)高浓度的桉薄溶液适口性较差，为保证试验的准确性，采用口腔灌服给药的方式

表2 各组鸡12日龄的日平均饮水量、总采食量、总增重量和料肉比

注：料肉比=总采食量(kg)/总增重量(kg)。与空白对照组比较，各组的每日平均饮水量、5 d的料肉比均无显著差异(P>0.05)

3.2.2 体重 各组鸡在12日龄、17日龄的体重见表3。

表3 各组鸡12日龄和17日龄的体重结果

注：与空白对照组比较，各组鸡在12日龄和17日龄的平均体重均无显著差异(P>0.05)

3.3 血生化指标 各组鸡在12日龄和17日龄血生化指标的检测结果见表4和表5。

4 讨论

4.1 给药方式的选择 预试验中，各组鸡的饮水中分别按比例添加一定的桉薄溶液，鸡采取自由饮水的方式给药，结果发现：(1)低剂量组(药物∶水=1∶2 500)，鸡的饮水量与空白对照组的差异不显著(P>0.05)，且临床表现正常；中剂量组(药物:水=1∶833)的鸡饮水量较空白对照组的少，但差异不显著(P>0.05)；(2)高剂量组(药物∶水=1∶500)的鸡饮水量较空白对照组的少，且差异显著(P<0.05)，且大量鸡饮水时出现甩鼻现象。结果表明，添加有效剂量3倍以上的桉薄溶液，在一定程度上影响了饮水的适口性。因此，为了保证试验的准确性，本试验采用口腔灌服的方式给药。

组别ALT(IU/L)T-Bili(μmol/L)CREA(μmol/L)BUN(mmol/L)空白对照组4.20±0.7910.31±0.6537.20±1.480.69±0.04桉薄溶液低剂量组4.70±0.6410.74±0.5538.30±1.490.68±0.06桉薄溶液中剂量组4.90±0.8610.59±0.3838.40±1.580.65±0.05桉薄溶液高剂量组8.70±1.25a20.37±1.51a44.00±1.49a0.46±0.10a

注：a表示与空白对照组比较，高剂量组4项指标差异性极显著(P<0.01)

组别ALT(IU/L)T-Bili(μmol/L)CREA(μmol/L)BUN(mmol/L)空白对照组4.50±0.7110.33±0.7137.40±0.970.70±0.04桉薄溶液低剂量组4.60±0.7010.60±0.2638.00±1.050.69±0.04桉薄溶液中剂量组4.50±0.5310.43±0.5437.80±1.320.69±0.02桉薄溶液高剂量组5.00±0.6710.75±0.4938.30±1.160.72±0.03

注：与空白对照组比较，各组鸡的4项指标均无显著差异(P>0.05)

4.2 临床表现 鸡连续5 d灌服有效剂量1倍、3倍和5倍的桉薄溶液，各组鸡的临床表现均未出现任何异常，表明桉薄溶液分别按高、中、低3个浓度给药，对试验鸡的临床表现无明显影响。

4.3 生长水平

4.3.1 饮水量 从日平均饮水量中看出，给药5 d内，各组鸡每日的平均饮水量均无显著差异(P>0.05)，结果表明，桉薄溶液分别按高、中、低3个浓度给药，对试验鸡的饮水无明显影响。

4.3.2 体重与料肉比 由体重结果可以看出，与空白组对比，给药各组鸡在12日龄和17日龄的体重均无显著差异(P>0.05)，12日龄料肉比无显著差异(P>0.05)，结果表明，桉薄溶液分别按高、中、低3个浓度给药，对靶动物(鸡)的体重和料肉比均无显著影响。

4.4 生化指标

4.4.1 生化指标的选择 本试验未对靶动物(鸡)进行血液学检测，原因是由于禽用血常规测定仪不普遍，且全血保存时间较短，该项检测存在一定难度。因此，本试验未对靶动物(鸡)进行血液学检测，直接选择检测靶动物(鸡)的血生化指标。

本试验主要通过测定鸡血清中的谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(T-Bili)、肌酐(CREA)和尿素氮(BUN)四项指标来反映药物对靶动物(鸡)的主要脏器(包括肝脏和肾脏等)有无损害。

4.4.2 生化指标分析 通过对各组鸡进行血生化指标检测结果分析发现(见表4和表5)：(1)12日龄时，中、低剂量组的4个血生化指标(ALT、T-Bili、CREA、BUN)与空白对照组相比均无显著差异(P>0.05)；而高剂量组ALT、T-Bili和CREA指标均高于空白对照组，BUN指标低于空白对照组，且差异极显著(P<0.01)。医学临床中[2-4]，谷丙转氨酶活性增高常见于肝胆疾病，如药物引起的中毒性肝炎等；总胆红素指标也是重要的常规肝功能指标，其活性增高亦代表肝脏出现一定的损害；肌酐检测是临床反应肾小球滤过率的较好指标，其活性增高常见于急性肾小球肾炎和肾功能不全等；尿素氮是蛋白质分解代谢的终产物，在肝中合成，由血液运输到肾随尿排泄，血尿素浓度增高常见于肾功能不全等，但血尿素氮浓度降低无临床病理性表达的意义[5]。由检测结果可以看出，桉薄溶液连续给药5 d，高剂量组试验鸡的谷丙转氨酶指标显著高于空白对照组，表明高剂量组鸡的肝脏可能受到了一定程度的损害，但由于临床症状表现不明显，因此给药后继续观察。(2)17日龄，再次检测各组的血生化指标发现，高、中、低剂量组的四个血生化指标(ALT、T-Bili、CREA、BUN)与空白对照组相比均无显著差异(P>0.05)。结果表明，高剂量组连续给药5 d可能引起鸡的肝脏出现一定损害，导致血生化指标异常，但停止给药后各项指标均可恢复正常。

综上所述，给鸡连续5 d灌服有效剂量1倍和3倍的桉薄溶液，对鸡的临床症状、生长水平和血生化指标均无明显影响；而有效剂量5倍的桉薄溶液对鸡的血生化指标有一定影响，但停止给药后可自行恢复。