复方降糖三号方对糖尿病小鼠降血糖作用的研究

杨晓迷， 卢 军， 孟 瑶， 阿依提拉·麦麦提江， 姜 林

(新疆医科大学第四临床医学院药研室， 乌鲁木齐 830000)

2型糖尿病是一种慢性疾病，是胰岛β细胞功能受损不能分泌足够的胰岛素和(或)胰岛素抵抗的结果，胰岛β细胞功能进行性衰退及胰岛素抵抗是导致糖尿病发生、发展的主要原因[1]。早期表现主要为尿糖升高，并伴随脂质紊乱以及氧化应激等代谢异常[2-4]。目前治疗糖尿病的药物主要有增强胰岛素敏感药物如二甲双胍、阿卡波糖等[5]。在糖尿病治疗过程中，很多合成药物会引起水肿，心力衰竭等不良反应[6-7]。传统中药对糖尿病的治疗具有疗效稳定、不良反应少、多靶点效应等特点[8-9]。复方降糖三号方为新疆医科大学第四临床医学院常用方，主要有太子参、茯苓、白术、泽泻等11味药组成，方中太子参健脾益气、润肺生津。茯苓利水渗湿，白术健脾益气。泽泻利水渗湿，诸药合用，除湿化痰之力更强。配伍山药、葛根助君药以健脾益气，陈皮、半夏助君药以健脾化痰。赤芍、丹参凉血活血化淤；郁金疏肝理气，综观全方，补中气，渗湿浊，行气滞，使脾气健运，湿邪得去，则诸症自除。本方具有健脾益气、化痰通络的功效，临床上主要用于脾虚痰於所致的高血糖，治疗咽干口渴、乏力自汗、腰腿重困、肢体麻木伴针刺样疼痛等症状的治疗。采用链脲佐菌素溶液对小鼠进行糖尿病造模实验成功率基本可达80%[4]。本研究采用糖尿病小鼠模型，探究复方降糖三号方对糖尿病小鼠的治疗作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1仪器SN1455-7153729型血糖仪(拜耳医药保健有限公司)，MULTI-SKAN型酶标仪(美国Thermo Scientific公司)，TDZ5WS型低速离心机(盐城市凯特实验仪器有限公司)，HC-3518型高速离心机(长沙高新技术产业开发区湘仪离心机仪器有限公司)，WELLWASH型洗板机(北京伯迈科技有限公司)。

1.2试药链脲佐菌素(STZ,北京中生瑞泰科技有限公司，批号614J033)，参芪降糖颗粒(甘肃佛仁制药科技有限公司，批号00117048)，血糖试纸(长沙益群医疗器械有限公司，批号1A6875AA)，糖化血红蛋白(HbAlc)试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号A056-1 )，小鼠血清胰岛素(INS)检测试剂盒(ELISA法)(上海柯雷生物科技有限公司，批号AK0017DEC14015)，小鼠血清NF-KB检测试剂盒(ELISA法)(上海柯雷生物科技有限公司，批号AK0018FEB07003)，小鼠血清TNF-α检测试剂盒(ELISA法)(上海柯雷生物科技有限公司，批号AK0018FEB07002)，复方降糖三号方为新疆医科大学第四临床医学院院内制剂。

1.3动物昆明种雌性小鼠60只，体质量(20±2)g，由新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(新)[2003-0002]；饲养温度：(23±2)℃、相对湿度：40%～70%、通风情况：10～20次/h、光照条件：12 h/12 h明暗交替。 饲养饲料及垫料均购自新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心，小鼠自购入当日开始常规适应性饲养1 w。

1.4实验方法

1.4.1 糖尿病小鼠模型的建立及给药方法 取昆明种雌性小鼠60只，适应性饲养1 w后，随机抽取10只为正常对照组，其余50只小鼠腹腔注射STZ 12 mg/10 g体质量(称取STZ粉末100 mg，溶于16.66 mL的pH4.5枸橼酸缓冲溶液中)，3 d后腹腔注射STZ 18 mg/10 g体质量，1 w后尾静脉采血测定血糖，血糖值≥11.1 mmol/L即为建模成功，空白组(蒸馏水，0.1 mL/10 g体质量)10只外，将50只糖尿病模型小鼠随机分为模型组，阳性组(参芪颗粒0.1 mL/10 g体质量)，复方降糖三号低(0.2 mL/10 g体质量)、中( 0.4 mL/10 g体质量)、高(0.8 mL/10 g体质量)剂量组，每组10只，连续给药4 w。

1.4.2 小鼠空腹血糖(FBG)、HbAlc的测定及血清 INS、HOMA-IR、TNF-α、NF-kB测定方法 小鼠末次给药24 h后测定FBG，将小鼠麻醉后颈动脉取血，测定HbAlc，将剩余血液3 000 r/min离心5 min，分离血清，采用ELISA法测定血清中INS、HOMA-IR、TNF-α、NF-kB，测定方法按照试剂盒说明。

2 结果

2.1小鼠FBG的测定与模型组比，复方降糖三号方各剂量组小鼠FBG均降低，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 各组小鼠给药后FBG的比较

注：与模型组比较，**P<0.01。

2.2小鼠血清INS含量、HOMA-IR的测定与模型组比，复方降糖三号方高剂量组小鼠血清INS含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)；复方降糖三号方各剂量组小鼠血清HOMA-IR均降低，差异有统计学意义(P<0.01)，见表2。

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.3小鼠血清HbAlc的测定与模型组相比，复方降糖三号方高剂量组小鼠血清HbAlc水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

2.4小鼠血清TNF-αNF-kB的测定与模型组比，复方降糖三号方中、高剂量组小鼠血清TNF-α降低，差异有统计学意义(P<0.01)；复方降糖三号方低、中、高各剂量组小鼠血清NF-kB均降低，差异有统计学意义(P<0.01)，见表4。

表4 各组小鼠给药后血清TNF-α、NF-kB的比较

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3 讨论

糖尿病发病原因大多是由于胰岛B细胞功能受损不能够分泌足够的胰岛素和胰岛素抵抗的结果[10]。本研究观察了复方降糖三号方对小鼠的血清胰岛素及胰岛素抵抗指数的影响，研究结果表明：复方降糖三号方中，低剂量组均对糖尿病小鼠的血清胰岛素有升高作用，且各剂量组均能降低胰岛素抵抗指数，提示复方降糖三号方对糖尿病小鼠有一定的治疗作用。

2型糖尿病主要病理变化为糖代谢出现异常，患者体内糖、脂肪过剩导致机体细胞产生了一种慢性的炎症反应，胰岛 β细胞在氧化应激下分泌TNF-α等炎症因子，引起炎症反应加重胰岛细胞损伤，使胰岛素分泌减少[11-12]。产生的炎症因子会与胰岛素受体竞争性结合，导致胰岛素作用生理作用消失，胰岛素下游信号传导通路被阻断。本实验结果初步显示复方降糖三号方中，高剂量组可降低血清TNF-α水平，且有显著性差异(P<0.01)，提示复方降糖三号方治疗糖尿病可能与降低血清中的TNF-α的水平有关。在诸多的炎性因子中，NF-kB是糖尿病病理生理机制中最重要的转录因子之一，且NF-kB是系膜细胞表达多种免疫炎症相关基因的调控枢纽，通过激活的NF-kB通路可诱导靶基因炎症分子在机体的高表达，炎症反应增强，而抑制NF-kB通路是糖尿病炎症反应的关键通路之一[13-14]。

该实验结果表明复方降糖三号方各剂量组均能降低血清中的NF-kB水平，提示该方在治疗糖尿病的过程中可能与下调NF-kB水平有关。

综上所述，复方降糖三号方对糖尿病小鼠FBG、HbAlc有降低作用，可以升高INS水平及降低HOMA-IR，同时还可降低糖尿病小鼠血清TNF-α及NF-kB水平，对糖尿病小鼠有一定的治疗改善作用，其作用机理可能与下调NF-kB水平及降低TNF-α有关。动物实验的结果为复方降糖三号方的新药申报奠定了一定的基础。