miR-506在结肠癌中的表达以及与临床病理特征相关性研究

张易 刘馨

（徐州医科大学附属医院 徐州 江苏 221000）

结肠癌（colon cancer）是常见的胃肠道恶性肿瘤之一，微小RNA（microRNA，miRNA）是一类非编码单链小分子RNA，miR-506是miRNA家族一员。目前多数研究表明miR-506在多种肿瘤中等恶性肿瘤中低表达[1-4]，过表达miR-506能够抑制肿瘤恶性表型。miR-506在结肠癌中的作用报道较少，其在结肠癌组织中的表达水平及其临床意义尚不十分清楚，本研究拟深入探究。

1.材料与方法

1.1 标本收集

主要收集徐州医科大学医院附属医院2017年1月至2018年6月间手术切除的结肠癌组织标本及癌旁正常组织，另有一例标本收集于中南大学湘雅医院。标本共计40例其中男27例，女13例。

1.2 原位杂交（ISH）检测miR-506的表达

切取4μm厚的组织切片，经过烘烤、脱蜡、脱水、去除内源性过氧化物酶的活性，修复抗原后，滴加地高辛标记的miR-506杂交探针37℃孵育60min或室温120min，DAB显色，显微镜下记录结果，详细步骤参考[5]。

1.3 荧光定量qRT-PCR法检测miR-506表达水平

详细步骤根据试剂盒说明书进行，具体步骤参考[4]。miR-506的引物序列正义：5’-TAAGGCACCCTTCTGAGTAGA-3’，反义5’-GCGAGCACAGAATTAATACGAC-3’。

1.4 统计学分析

用独立样本t检验分析不同结肠组织中miR-506的表达差异变化。应用卡方检验法分析miR-506在不同临床病理指标中的表达差异。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2.结果

2.1 miR-506在结肠癌和癌旁组织中的表达水平

qRT-PCR检测miR-506在40例结肠癌和癌旁组织中的表达，结果显示miR-506在结肠癌中的表达显著低于癌旁组织（图1A，P＜0.01）。我们进一步采用ISH（原位杂交）检测miR-506表达水平，同样验证了上述结论，并发现miR-506主要表达于细胞质中（图1B）。

2.2 miR-506水平与临床病理特征的关系

我们选取miR-506表达水平的中位数作为标准，将miR-506表达水平分为高、低表达。分析miR-506高低表达与临床病理特征之间的相关性。如表1所示，miR-506表达与TNM分期以及淋巴结转移有关（P＜0.05），而与其他指标均无相关性（均P＞0.05）。

图1 A.qRT-PCR检测miR-506在40例结肠癌和癌旁组织中的表达；B.ISH检测miR-506表达水平。

表1 miR-506与临床病理特征相关性分析

3.讨论

miR-506编码基因位于X染色体上，为miR-506-514群的一员。既往研究发现miR-506在人类多种肿瘤中低表达。本研究首先采用qRT-PCR和原位杂交检测miR-506表达，发现miR-506表达于细胞质中，且表达水平较癌旁组织明显降低。然后我们采用卡方检验检测miR-506和肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移等因素相关性，发现miR-506低表达和较差的分期、较多的淋巴结转移相关。上述研究说明miR-506可能成为结肠癌治疗，预后判断的潜在生物学指标。同时本研究发现miR-506和分化程度等临床病理指标无统计学相关性，这可能是研究样本量较少造成的，今后将进一步扩大样本量，以期能够得到更为精确的结果。