B7—H4蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤患者淋巴组织中表达情况及其与临床特征和预后的相关性研究

朱颖　蔡岗丽　何绿苑

[摘要] 目的 分析彌漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者淋巴组织中B7-H4蛋白表达情况及其与临床特征和预后的相关性研究。 方法 选取2010年3月～2016年3月本院确诊为弥漫大B细胞淋巴瘤患者123例作为实验组，另外选取同期87例正常淋巴结患者为对照组，62例炎性淋巴结患者为炎症组。所有患者采用免疫组织化学法检测B7-H4蛋白表达情况，分析三组患者的B7-H4蛋白表达水平，分析B7-H4蛋白表达的高低与临床特征和预后的相关性。 结果 实验组患者B7-H4阳性表达96例，对照组无，炎症组19例，实验组B7-H4阳性率明显高于炎症组，差异有统计学意义（χ2=5.34，P=0.02）；B7-H4的表达对DLBCL患者临床特征无明显影响，差异无统计学意义（P>0.05）；随访82例患者B7-H4表达呈阳性者57例，平均生存时间（52.1±4.2）个月；B7-H4表达呈阴性者25例，平均生存时间（63.2±3.7）个月，差异有统计学意义（χ2=4.17，P=0.02）。 结论 B7-H4蛋白在DLBCL患者淋巴组织中呈高表达，提示B7-H4蛋白与弥漫大B细胞淋巴瘤的发生、发展和预后密切相关。

[关键词] B7-H4蛋白；弥漫大B细胞淋巴瘤；表达情况；临床特征

[中图分类号] R733.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）19-0009-04

Expression of B7-H4 protein in lymphoid tissue of patients with diffuse large B-cell lymphoma and its correlation with clinical features and prognosis

ZHU Ying CAI Gangli HE Lvyuan

Department of Hematology， Jinhua Hospital of Traditional Chinese Medicine in Zhejiang Province， Jinhua 321017， China

[Abstract] Objective To analyze the expression of B7-H4 in lymphoid tissues of patients with diffuse large B-cell lymphoma（DLBCL） and its correlation with clinical features and prognosis. Methods 123 cases diagnosed as diffuse large B cell lymphoma in our hospital from March 2010 to March 2016 were selected as the experimental group. Another 87 patients with normal lymph node were selected as the control group and 62 cases of inflammatory lymph nodes were selected as the inflammatory group. All patients were examined for the expression of B7-H4 protein by immunohistochemistry. The expression of B7-H4 protein in three groups was analyzed. The correlation between the expression of B7-H4 protein and clinical features and prognosis was analyzed. Results There were 96 cases of B7-H4 positive in the experimental group， 19 in the control group and no in the control group. The positive rate of B7-H4 in experimental group was significantly higher than that in inflammation group（χ2=5.34， P=0.02）. The expression of B7-H4 had no significant effect on the clinical features of patients with DLBCL， the difference was not statistically significant（P>0.05）； after follow-up of 82 patients with positive expression of B7-H4 in 57 cases， the average survival time was （52.1±4.2）months； There were 25 cases with negative expression of B7-H4， the average survival time was （63.2±3.7）months， the difference was statistically significant （χ2=4.17， P=0.02）. Conclusion B7-H4 protein is highly expressed in lymphoid tissues of patients with DLBCL，suggesting that B7-H4 protein is closely related to the occurrence， development and prognosis of diffuse large B cell lymphoma.

[Key words] B7-H4 protein； Diffuse large B cell lymphoma； Expression； Clinical features

弥漫大B细胞淋巴瘤是一种大B淋巴细胞弥漫性恶性增生性疾病，其瘤细胞核的大小至少2倍于正常小淋巴细胞核甚至大于巨噬细胞核，是非霍奇金淋巴瘤中最常见的类型。其发病见于各年龄段，高峰在50～70岁之间，男性多于女性，发病部位可在结内和结外，原发结外的高达40%[1-3]。该病属于侵袭性淋巴瘤，病情初期不易确诊，发展迅速，经确诊即是晚期，故死亡率较高。目前化疗是临床常用的治疗方式，但效果并不理想，因此如何根据其发病机制选择有效的治疗方案是亟待解决的问题[4-7]。B7-H4是2003年在淋巴组织和非淋巴组织中检测到的B7家族的一个新成员，它具有限制、终止和削弱T细胞的免疫应答的功能，在正常组织中有较低表达甚至无表达，有研究发现，B7-H4在一些恶性肿瘤组织中有较高表达，如肺癌、卵巢癌、乳腺癌等，研究还显示其表达与肿瘤的性质和预后相关，因此较多学者认为B7-H4是诊断肿瘤的早期指标，也是选择预后的重要指标[8-11]。本研究检测弥漫大B细胞淋巴瘤患者淋巴组织中B7-H4蛋白的表达水平，探讨其与临床特征的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年3月～2016年3月来本院就诊的确诊为弥漫大B细胞淋巴瘤患者123例（实验组），男73例，女50例，年龄18～80岁，平均（50.32±3.57）岁；另外选取同期来本院就诊的87例正常淋巴结患者作为对照组，选取62例炎性淋巴结患者为炎症组；三组患者一般资料差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有入组患者均检测B7-H4，接受治疗前进行血常规检查、表浅淋巴结B超、生化检验、颈胸腹盆部增强CT等。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：（1）淋巴结肿大；（2）反复发热：（3）初次确诊为弥漫大B细胞淋巴瘤；（4）入组前未接受治疗。排除标准：（1）有肿瘤病史；（2）长期激素药物治疗。

1.3 结果判定

实验组所有患者的病理标本经过免疫组织化学染色后在光学显微镜下进行分析，随机选择4个肿瘤区域做细胞计数。根据检测到的阳性染色细胞数量来判定B7-H4的表达情况。免疫组织化学结果采用半定量分级，阴性（-）为病灶表达<17%；弱阳性（+）为17%～55%；阳性（++）为56%～85%；>85%是强阳性（+++）。

1.4 分组方法

根据检测的B7-H4表达水平分组，B7-H4<15%为阴性组，≥15%为阳性组。根据B7-H4的阳性率，在实验组中，B7-H4细胞数≥50%为高表达组，B7-H4细胞数<50%为低表达组。

1.5 治疗方法

实验组118例患者接受了化疗，其中59例患者采取CHOP化療方案（CHOP化疗组），59例患者采取R-CHOP化疗方案（R-CHOP化疗组）。CHOP化疗方案：第1天静脉下滴注长春新碱3 mg、阿奇霉素55 mg/m2、环磷酰胺740 mg/m2，并连续5 d口服泼尼松100 mg。R-CHOP化疗方案：在CHOP化疗方案的基础上，第1天静脉下滴注增加利妥昔单抗375 mg/m2。两组患者治疗20 d为一个周期，共治疗4个周期。

1.6 疗效标准

治疗2个周期后根据《血液病诊断及疗效标准》来评价近期治疗效果，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、疾病稳定（SD）和疾病进展（DP）[12-14]。依据患者治疗后的生存时间评价长期疗效。

1.7 统计学方法

应用SPSS20.0统计软件分析数据结果。计数资料比较采用χ2检验，总生存时间的生存分析采用Kaplan-Meier生存函数Log-rank检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组患者的B7-H4表达情况比较

实验组患者B7-H4阳性表达96例，对照组无，炎症组19例，实验组B7-H4阳性率明显高于炎症组，差异有统计学意义（χ2=5.34，P=0.02）。见表1。

表1 三组患者的B7-H4表达情况比较

注：阳性率=阳性例数/总例数×100%

2.2 实验组患者临床特征与B7-H4细胞比例关系

实验组患者中低表达组69例（B7-H4细胞数比例<50%），高表达组54例（B7-H4细胞数比例≥50%）。两组在性别、年龄、结外侵润、临床分期等临床特征方面相比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表2 实验组患者临床特征与B7-H4细胞比例比较

2.3 实验组不同化疗方案临床疗效比较

实验组118例患者接受CHOP化疗59例，R-CHOP化疗59例，化疗后CHOP化疗组病情完全缓解（CR）、部分缓解（CR）的患者29例，有效率为49.15%；R-CHOP化疗组病情完全缓解、部分缓解的患者40例，有效率为67.80%，明显高于CHOP化疗组，差异有统计学意义（χ2=5.22，P=0.03）。两组的生存时间比较，差异有统计学意义（χ2=4.37，P=0.02）。见表3。

表3 实验组不同化疗方案临床疗效比较

注：有效率=（CR+CR）/总例数×100%

2.4 B7-H4表达高低与弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的关系

患者的生存时间从开始治疗的首日算起，通过电话随访和门诊复诊了解患者的预后情况。随访时间截止到2015年8月30日。共随访到82例患者，其中B7-H4表达呈阳性者57例，平均生存时间（52.1±4.2）个月；B7-H4表达呈阴性者25例，平均生存时间（63.2±3.7）个月，两者比较，差异有统计学意义（χ2=4.17，P=0.02）。82例弥漫大B细胞淋巴瘤患者的平均生存时间是（55.00±2.29）个月，Kaplan-Meier生存函数分析及Log-rank检验显示，不同的B7-H4表达组间平均生存时间有差异，具有统计学意义（χ2=3.26，P=0.01）。见图1。

图1 B7-H4的Kaplan-Meier生存函数

3 讨论

B7-H4是新发现的共刺激分子B7家族的成员，位于1号染色体，由六个外显子和五个内含子组成。它在T细胞介导的免疫抑制中发挥重要作用，可以抑制T细胞增殖和细胞因子分泌来负性调控T细胞的免疫应答，从而使肿瘤细胞逃避机体免疫系统的攻击[15-17]。

研究显示，B7-H4在弥漫大B细胞淋巴瘤患者的淋巴组织中表达明显，在正常淋巴结患者中无表达，在炎症淋巴结患者中有较低表达，与Kyung等[18]的研究结果基本一致，提示弥漫大B细胞淋巴瘤的发生、发展与B7-H4有关，对诊断肿瘤有重要意义，有研究表明B7-H4对T细胞介导免疫反应的抑制一般是通过三种途径：一是抑制T细胞增殖；二是抑制T细胞活性；三是抑制细胞因子分泌[19]。实验组中有118例患者接受了化疗，CHOP化疗组有效率48.39%，R-CHOP化疗组有效率75.41%，明显高于CHOP化疗组，表明临床疗效与B7-H4表达的高低有关。本研究中DLBCL的临床特征（年龄、性别、临床分期、结外侵润）对B7-H4的表达水平高低及总生存时间无明显影响，这一结果与在其他肿瘤中的情况有所不同。有报道在恶性肿瘤中B7-H4的表达与恶性程度及预后相关[20]。结果显示，B7-H4表达根据随访到的82例患者的资料显示，B7-H4表达呈阳性者57例，平均生存时间（52.1±4.2）个月；B7-H4表达呈阴性者25例，平均生存时间（63.2±3.7）个月。Kaplan-Meier生存函数分析及Log-rank检验显示，B7-H4表达的高低与预后有关，B7-H4表达较高的预后较差。可能是因为B7-H4表达较高降低了患者的特异免疫力，影响了预后。由此可知，B7-H4在肿瘤免疫中起到负性调节作用，因此根据B7-H4的表达情况可以了解患者的免疫状态和预后情况。

综上所述，B7-H4蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤患者的淋巴组织中呈高表达，提示B7-H4蛋白与弥漫大B细胞淋巴瘤的发生、发展和预后密切相关，为弥漫大B细胞淋巴瘤的诊断治疗提供了新指标。

[参考文献]

[1] 郭淑萍，童茵，倪萬茂，等.弥漫大B细胞淋巴瘤的B7-H4表达情况及临床特征相关性分析[J].中华危重症医学杂志：电子版，2015，1（2）：1-5.

[2] 王利飞，崔澂，刘翠莲，等.协同共刺激分子B7-H4参与肿瘤免疫逃逸的研究进展[J].中国免疫学杂志，2015， 8（1）：139-141.

[3] 刘建江，张娜，刘鲁迎，等.放疗对早期弥漫大B细胞淋巴瘤化疗后CR患者的价值研究[J].中华放射肿瘤学杂志，2015，24（2）：138-142.

[4] Geng Y，Wang H，Lu C，et al. Expression of costimulatory molecules B7-H1，B7-H4 and Foxp3+ Tregs in gastric cancer and its clinical significance[J]. International Journal of Clinical Oncology，2015，20（2）：273-281.

[5] 蔡明渊，蒋敬庭.协同刺激分子B7-H4在胃癌组织中的表达及定位[J].现代免疫学，2015，6（5）：378-383.

[6] 张巍，王晶，王艳芳，等.共刺激分子B7-H1、B7-H3和B7-H4在血液系统恶性肿瘤细胞株中的表达水平和分布特征[J].中国实验血液学杂志，2016，24（5）：1539-1546.

[7] 张燕，王婷婷，徐曼，等.B7-H4对宫颈癌患者外周血活化T细胞增殖、凋亡和分泌细胞因子的影响[J].重庆医学，2015，11（26）：3628-3630.

[8] 陈施婧，朱彦，雷芳，等.（R）-CHOP方案中阿霉素平均每周剂量强度影响初诊弥漫大B细胞淋巴瘤患者的治疗效果[J].南京医科大学学报（自然科学版），2015，6（4）：529-533.

[9] 胡蓉华，孙婉玲，赵弘，等.利妥昔单抗联合调整剂量EPOCH方案治疗胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤[J].南方医科大学学报，2016，36（9）：1291-1294.

[10] 范磊，徐卫，李建勇.弥漫大B细胞淋巴瘤预后新指标[J].中国实用内科杂志，2015，9（2）：81-84.

[11] 徐淑芬，白海，土存邦，等.利妥普单抗联合CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤临床疗效[J].现代肿瘤医学，2014，22（8）：1945-1947.

[12] Qian Y，Hong B，Tao Z，et al. 216P Expression and significance of B7-H4 and HBx in HBV related hepatocellular carcinoma[J].Annals of Oncology，2015，26（9）：65-67.

[13] Yi KH，Chen L.Fine tuning the immune response th-rough B7-H3 and B7-H4[J]. Immunol Rev，2013，229（1）：145-151.

[14] 谢敏瑚，土亚萍，卢志贤，等.血清可溶性B7-H4在淋巴瘤患者诊断中的临床意义[J].放射免疫学杂志，2016， 25（4）：442-443.

[15] Guttapalli A，Ma C，Thodima V，et al. Clinico-and path-ogenomic analyses of a single institution diffuse large B-cell lymphoma cohort[J]. Cancer Genetics，2015，208（6）：357-358.

[16] 朱俊锋，周黎黎，耿英华，等.淋巴瘤组织中B7-H4的表达及其临床意义[J].中国实用内科杂志，2014，38（10）：1284-1290.

[17] 张利娟，土凤玮.弥漫大B细胞淋巴瘤的治疗进展[J].中华临床医师杂志，2014，8（11）：2127-2132.

[18] 周扬，赵洪国，李广伦，等.生发中心与非生发中心弥漫大B细胞淋巴瘤化疗效果及影响因素分析[J].山东医药，2015，55（17）：75-77.

[19] 王辉，田波，鲁常青，等.B7家族PD-L1和B7-H4的研究进展[J].细胞与分子免疫学杂志，2015，29（2）：216-217.

[20] Mei XU，Zhang B，Zhang M，et al.Clinical relevance of expression of B7-H1 and B7-H4 in ovarian cancer[J].Oncology Letters，2015，11（4）：2815-2819.

（收稿日期：2018-01-04）