皮肤基底细胞癌患者癌组织中生存素、P16和B淋巴细胞瘤-2基因表达水平及临床意义

范林明，邹 敏，肖祥明，吴彩霞

近年来，随着人们生活环境及生活习惯的不断改变，我国恶性肿瘤的种类及患者逐渐增多，而有相关数据表明，皮肤癌发病率在近年呈逐渐上升趋势[1]。目前，临床关于皮肤癌的致病原因及具体机制尚未完全阐述清楚，但根据其病理生理状况可有多种表现类型，其中皮肤基底细胞癌(BCC)和皮肤鳞状细胞癌(SCC)为皮肤恶性肿瘤中最常见的类型，均主要起源于表皮或其附属器角质形成细胞[2-3]。既往研究报道，BCC属于低度恶性肿瘤，但仍具有较强的侵袭性，故及时明确诊断是治疗BCC和改善其预后的关键[4-5]。近年来，有研究发现，在BCC患者中，其相关基因蛋白的表达与正常皮肤组织有着一定的差异，由此认为，相关基因蛋白的表达异常可能与BCC的发生和进展有着密不可分的关系，但关于具体基因蛋白目前临床还尚未明确[6-7]。本研究回顾性分析BCC患者的临床资料，旨在探讨BCC患者癌组织中生存素(Survivin)、P16和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达水平及临床意义。现报告如下。

1 对象及方法

1.1一般资料 选取2014年5月—2017年5月我院病理科收集的54例BCC癌组织(A组)，34例皮肤鳞状细胞癌(SCC)癌组织(B组)和20例正常皮肤组织(C组)，均符合临床BCC和SCC明确诊断标准[8-9]。排除标准：所有组织标本来源患者存在其他系统严重疾病者；存在恶性肿瘤者；临床资料不完整者。其中男66例，女42例，年龄32～85(62.06±9.84)岁，组织标本来源部位：头皮18例，耳部10例，颊部14例，胸部38例和腹部28例。3组标本来源患者性别、年龄、体质量指数、文化程度及标本来源部位比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 3组标本来源患者一般资料比较

注：A组为皮肤基底细胞癌组织，B组为皮肤鳞状细胞癌组织，C组为正常皮肤组织

1.2免疫组化试剂及检测方法

1.2.1试剂：Survivin兔抗人多克隆抗体浓缩液，兔抗人P16单克隆抗体、鼠抗人Bcl-2、单克隆抗体及链酶亲和素-生物素-过氧化酶复合物SP免疫组化试剂盒，DAB显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。

1.2.2检测方法：3组组织标本均经石蜡包埋,组织5 μm厚连续切片后裱于载玻片上，60℃烤箱烘烤30 min，常规脱蜡水化2次，每次10 min。试验开始前37℃烤箱过夜，后进行免疫组化染色，用已知阳性组织(试剂公司提供)作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3Survivin、P16和Bcl-2结果判定标准 采用Barnes半定量法，以细胞质或细胞核中出现淡黄至棕黄色细颗粒状着色为阳性[10]。参照文献[11]随机并计数10个高倍镜(×400)视野，计数1000个细胞，计数阳性细胞百分率：<10%为阴性，10%～50%为弱阳性，50%～75%为阳性，>75%为强阳性，以弱阳性、阳性和强阳性计算总阳性率。

2 结果

2.1Survivin在不同组织标本中表达情况 A、B组Survivin总阳性表达率高于C组(P<0.05)，但A、B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 3组标本中Survivin表达情况 [例(%)]

注：A组为皮肤基底细胞癌组织，B组为皮肤鳞状细胞癌组织，C组为正常皮肤组织；与C组比较，aP<0.05

2.2P16在不同组织标本中表达情况 A组和B组P16总阳性表达率低于C组(P<0.05)，但A、B组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 3组标本中P16的表达情况比较[例(%)]

注：A组为皮肤基底细胞癌组织，B组为皮肤鳞状细胞癌组织，C组为正常皮肤组织；与C组比较，aP<0.05

2.3Bcl-2在不同组织标本中表达情况 A组和B组Bcl-2总阳性表达率高于C组(P<0.05)，但A、B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 3组标本中Bcl-2表达情况比较[例(%)]

注：A组为皮肤基底细胞癌组织，B组为皮肤鳞状细胞癌组织，C组为正常皮肤组织；与对照组比较，aP<0.05

2.4BCC患者其组织中Survivin、P16和Bcl-2相关性分析 在BCC患者其癌组织中Survivin和Bcl-2的表达均与P16表达呈负相关，而Survivin与Bcl-2表达呈正相关(P<0.05)。见表5。

表5 皮肤基底细胞癌组织中Survivin、P16和Bcl-2相关性分析

3 讨论

根据以往临床研究可知，BCC在临床又被称为基底细胞上皮瘤，属于皮肤恶性上皮瘤的一种，可能起源于表皮及其附件的基底细胞[12]。目前，临床对于BCC的致病原因及具体发病机制尚未完全阐述清楚，但随着研究的不断深入，有学者发现，如Survivin、P16和Bcl-2等一些与细胞凋亡相关的基因蛋白在BCC患者其癌组织中的表达均存在着一定的异常，故认为Survivin、P16和Bcl-2的表达在BCC发生及其进展的过程中起着极为重要的临床作用，但关于其具体的表达情况及其之间的相关性尚未明确报道[13-14]。

本研究结果显示，在BCC和SCC患者其癌组织中Survivin和Bcl-2阳性表达率均高于正常皮肤组织，而P16总阳性表达率较正常皮肤组织降低，提示正常皮肤组织中若Survivin和Bcl-2的表达上升或P16的表达下降，其发生BCC的风险均显著增高。以往研究报道，Survivin是近年研究中发现的一种凋亡抑制因子[15]，其属于细胞凋亡抑制蛋白家族的成员，其生化学功能类似于Bcl-2[16]，且在近年研究中，该因子是目前临床抑制细胞凋亡作用最强的因子[17]。分析相关生理病理学研究可知，Survivin在机体细胞生长周期和凋亡中起着极为重要的作用[18-19]，其对正常细胞凋亡信号通路的传导具有一定的抑制作用，从而促使一些非正常细胞逃脱了机体的免疫清除，进而导致异常细胞的存活和聚集，随着时间的延长，逐渐导致肿瘤的发生和进展[20-21]。在既往研究中，Survivin被证实具有肿瘤组织表达特异性，故在近年研究中，该因子一直被致力于研究其与肿瘤基因之间的联系，而本研究结果也进一步证实了既往的研究结果。而P16是在近年科研中发现的一种新型抗癌基因[22-23]。曾有研究证实，P16可抑制相关蛋白的活性，从而抑制细胞周期的继续进行，对细胞分期进行了一定阻碍，进而起到抑制细胞增殖和生长的作用[24]。故当机体中P16的表达降低时，其对细胞分期的抑制作用减弱，从而加速了细胞的增殖和生长，而当机体中出现癌性细胞时，也可因P16的缺乏进一步加快癌细胞的增殖进度，从而导致疾病的阳性表现和进一步进展[25]。本研究结果也显示，BCC和SCC患者其癌组织中P16的表达较正常皮肤组织降低，进一步提示P16的缺乏与BCC的发生有着密切联系。除此之外，本研究中涉及的Bcl-2属于原癌基因的一种，多出现于近年研究报道中，该基因可调控细胞凋亡，对细胞的存活基因具有一定激活作用，从而起到抑制细胞凋亡的作用[26]。曾有研究显示在滤泡型B淋巴细胞性淋巴瘤中Bcl-2呈现出过度表达，且证实了其主要通过抑制细胞凋亡和延长细胞的生存期而导致肿瘤的发生[27]。本研究结果还显示，在BCC癌组织标本中，Survivin和Bcl-2的表达均与P16表达呈负相关，而Survivin与Bcl-2表达呈正相关。

综上所述，Survivin、Bcl-2和P16基因蛋白在BCC的发生和进展中均起着至为关键的作用，可作为临床研究BCC的关键切入点。但本研究所选样本含量过小及研究时间过短，对于Survivin、P16和Bcl-2在BCC是否受其他因素影响尚未明确，可加大样本含量和延长研究时间进一步深入研究。