高同型半胱氨酸血症对心肌梗死后大鼠心肌组织中SCF表达的影响研究

李国栋，张诗吟

(湖州市第一人民医院， 浙江 湖州 313000)

为了对心肌梗死后肝细胞归巢及对梗死心肌进行修复过程中高同型半胱氨酸的作用进行探讨，为临床对心肌梗死的治疗工作提供有效依据，从而为患者提供更有针对性的治疗，促进患者早日康复。因此，本研究观察了高同型半胱氨酸血症对心肌梗死后大鼠心肌组织中SCF表达的影响，现报道如下。

一、研究对象与方法

(一)研究对象。

采用华中科技大学同济医学院实验动物学部2016.10-2017.04提供的寿命3-4年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只，抗鼠SCF抗体,Trizol reagent，半胱氨酸(L-cysteine)、蛋氨酸(L-methionine)，叶酸(Folic Acid)和逆转录聚合酶链反应试剂。

(二)方法。

1.饮食诱导的高同型半胱氨酸血症的建立。随机分为高半胱氨酸组与对照组两组，每组15只，高半胱氨酸组大鼠食用正常鼠类饲料(0.49% g/g蛋氨酸+0.34% g/g半胱氨酸+0.0006% g/g叶酸)+1.2% g/g半胱氨酸，对照组大鼠食用正常鼠类饲料。建模4周，观察8周后开始做心肌梗死模型。

2.建立心肌梗死模型。麻醉消毒SD大鼠后将其胸腔打开，结扎其左冠状动脉前降支，使其MI面积比左室面积的30%大，之后将胸腔闭合，将创口缝合起来。

3.心肌组织总RNA提取与SCF mRNA水平检测。将SD大鼠心肌梗死模型建立起来后第5d将其颈外静脉血抽取出来，对两组大鼠血清同型半胱氨酸浓度进行测定。完成取血后，将两组大鼠心脏分离出来，在梗死心肌处将心脏横向切开，将10%福尔马林液中投入近心尖部固定，将左心室前壁梗死组织、梗死周围组织分别从余下部分取出来，在Trizol试剂制备中RNA中应用。将2μl总RNA取出来，向cDNA逆转录，将模板设定为2μl cDNA进行PCR反应。依据文献[1]设计PCR引物，合成主体具体如下(见表1)。循环参数中94℃、56℃、72℃温度下分别1min、2min、1min，共32个循环。采用凝胶成像系统对Β-actin、SCF吸光度比值进行扫描分析。

表1 PCR引物

4.心肌组织中SCF蛋白水平检测。将心肌组织在10%福尔马林液中固定，然后脱水、浸蜡、包埋、切片后分别进行免疫组织化学染色及HE染色。

(三)统计学分析。

采用Graph Pad Prism 3.0软件ANOVA程度对两组数据进行统计分析，检验水准α=0.05。

二、结 果

(一)饮食诱导的高同型半胱氨酸血症。

高半胱氨酸组与对照组的大鼠的血清同型半胱氨酸浓度之间的差异不显著(P>0.05)(见表2)。

表2 两组大鼠的血清同型半胱氨酸浓度比较

(二)RT-PCR分析心肌组织SCF mRNA水平表达变化。

高半胱氨酸组与对照组大鼠心肌组织中SGF mRNA表达之间的差异不显著(P>0.05)。

(三)免疫组化显示心肌组织SCF蛋白水平表达。

高半胱氨酸组与对照组大鼠心肌组织SCF蛋白水平之间的差异不显著(P>0.05)。

三、讨 论

心肌梗死将心肌梗死灶周围心肌组织中干细胞因子(SCF)表达上调，为干细胞归巢及对梗死心肌的修复提供了良好的前提条件[2-3]。高同型半胱氨酸对心肌梗死灶周围心肌组织中SCF表达进行了抑制，从而促进从SCF诱导的干细胞向心肌梗死区域归巢的减少，从而对梗死后心肌修复进行抑制。本研究结果表明，高半胱氨酸组与对照组大鼠的血清同型半胱氨酸浓度之间的差异不显著(P>0.05)。高半胱氨酸组与对照组大鼠心肌组织中SGF mRNA表达之间的差异不显著(P>0.05)。高半胱氨酸组与对照组大鼠心肌组织SCF蛋白水平之间的差异不显著(P>0.05)，说明高同型半胱氨酸血症抑制了心肌梗死后大鼠心肌组织中SCF表达，值得临床充分重视。