HPLC法同时测定药品塑料包装材料中五种抗氧剂的含量

靳贵英 王彩媚 莫湫萍 李宝生

1.广东省药品检验所，广东广州 510180，2.广东药科大学，广东广州 510180

塑料因阻隔性好、强度高、透明、质轻等优点成为主要的包装材料[1]。在生产中会加入抗氧剂和稳定剂以阻缓其老化[2]。一些常用抗氧化剂的信息见表1。抗氧剂虽可阻缓材料老化，但过量加入会对人体产生危害。世界各国相继颁布了针对直接接触食品包装材料的法律法规[3-9]。抗氧剂含量的研究一直是科学家们研究的焦点之一[10-13]。本文通过HPLC法对塑料药品包装材料中常用的BHA、BHT、Irganox1076、Irganox1010和 Irgafos168等 抗氧剂同时进行分析，以期为药品包装材料标准的建立和质量监督管理提供技术支持。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦Agilent 1260 Infinity/G1311C型高效液相色谱仪，带有自动进样系统（美国安捷伦公司），色谱柱为phenomenex EVO C18柱子（250mm×4.6mm，5μm）；Branson 8800超声波仪器；Millipore纯水仪；Sartorius十万分之一电子天平。

1.2 试药

BHA、BHT和Irgafos168均购自Dr.Ehrenstorfer.GmbH公司，批号分别为109231、126182和21105，含量分别为98.8%、99.5%和98.0%；Irganox1076和Irganox1010均购自AccuStandard公司，批号分别为5691-01和5692-01，含量均按100%计。

7批药品包装材料：其中3批为滴眼液，2批为口服液体制剂，2批为口服片剂的包装材料，材质包括：聚氯乙烯（PVC），聚丙烯（PP），聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET），聚乙烯（PE）及高/低密度聚乙烯（LDPE/HDPE）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为phenomenex EVO C18柱子（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水为流动相，按照表2进行梯度洗脱，检测波长为200nm，柱温60℃，进样量10μL。

表1 部分常用抗氧剂结构一览表

表2 梯度洗脱表

2.2 溶液制备

对照品溶液：分别称取BHA、BHT、Irganox1076、Irganox1010和Irgafos168五种抗氧剂各10mg，精密称定，置于50mL量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，制备浓度为200 μg/mL的混合对照品贮备溶液。取该混合对照贮备溶液适量，加乙腈适量分别制得浓度为 1、2、4、5、6、8、10 μg/mL 的系列对照品溶液。

供试品溶液：取7批塑料包装材料，粉碎呈约0.2cm×0.2cm大小，取1.0g，精密称定，置于50mL锥形瓶中，精密加异丙醇10mL，密塞，称重，超声2h，放置过夜，用异丙醇补充减失的重量，摇匀，经0.45μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

空白溶液：除不加样品外，其余按照上述“供试品溶液”制备方法进行操作，得空白溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 分别精密吸取2.3项下溶液各10μL，注入液相色谱仪，按2.2项下色谱条件进行测定，记录色谱图。在上述色谱条件下，空白溶液无干扰。空白及对照品溶液色谱图见图1 ～ 2。对照品溶液中五种抗氧剂的理论塔板数均不低于35000，分离度均大于1.5。图1中除各对照峰外，还存在多处杂质峰，其中5.3min处为BHA的共存杂质峰，9.0min和19.021.4min处为Irgafos168的共存杂质峰。

图1 空白溶液的高效液相色谱图

图2 10µg/mL混合对照品溶液的高效液相色谱图

2.3.2 线性关系试验 取2.3项下浓度分别为1、2、4、5、6、8、10μg/mL 的系列对照品溶液，按上述色谱条件进样10μL，记录峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，质量浓度（C）为横坐标进行线性回归，得到各抗氧剂线性回归方程如下：BHA：Y=97.1473x-4.2546，r=0.9998；BHT：Y=123.4671x-0.6027，r=0.9999；Irgafos 168：Y=119.9199x-168.6832，r=0.9966；Irganox 1010：Y=91.6412x-9.4185，r=0.9997；Irganox 1076：Y=36.9012x+48.6384，r=0.9999。结果表明，各抗氧剂浓度在1～10μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3.3 稳定性试验 将10μg/mL混合对照品溶液放置1个月后，精密注入10μL，记录液相色谱图。结果对照品各峰强度明显减弱，表明各抗氧剂组分稳定性较差，试验溶液应临用新配。

2.3.4 精密度试验 精密吸取浓度为10μg/mL的对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果BHA、BHT、Irgafos 168、Irganox 1010和Irganox 1076各抗氧剂峰面积的RSD分别为0.3%、0.08%、0.2%、0.2%、0.5%和0.6%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.5 重复性试验 取同一批样品（为滴眼液PVC包材），共6份，依法制备供试品溶液，精密注入10μL，记录液相色谱图。结果Irganox 1076峰面积的RSD为1.2%，表明方法重复性良好。

2.3.6 加样回收试验 精密称取已知抗氧剂含量的同批样品（口服液体PET包材）1.0g，分别置于50mL锥形瓶中，按高、中、低三个水平分别精密加入100μg/mL抗氧剂Irgafox 168标准溶液0.6、0.5、0.4mL，按2.3项下供试品溶液配制方法处理，得到加样回收试液。按上述色谱条件分别进样10μL，记录峰面积，计算回收率，结果见表3。

2.4 样品含量测定

取药品包装材料7批，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2项下色谱条件测定7批样品中5种抗氧剂的含量，按标准曲线法进行计算，结果显示仅口服液体PP包材含有Irganox 1010，含量为4.9μg/g，所有样品均检出Irganox1076，含量分别为8.0 μg/g（滴眼剂PVC包材，批号17061303）；5.2μg/g（滴眼剂PP包材，批号17010402）；5.0μg/g（滴眼剂LDPE包材，批号16102501）5.2 μg/g（口服片剂HDPE包材，批号 21605023）；1.6μg/g（口服液体PET包材，批号 170622）；4.0μg/g（口服液体 PP包材，批号170602）；2.1μg/g（口服胶囊PET外包材，批号17030701）。样品典型图谱见图3。

3 讨论

抗氧剂种类繁多，查阅中国期刊网，发现现有文献多数以分析BHA和BHT，或者单独分析Irga类物质为主，而将它们同时分析还尚未见报道。本文选择了上述5种较为常见的抗氧剂进行同时分析研究，为多组分抗氧剂的分析提供了思路。

表3 塑料包材抗氧剂加样回收试验结果（n=3）

图3 代表样品色谱图（口服片剂HDPE包材，批号21605023）

试验比较了不同提取溶剂对抗氧剂的提取能力。参考国家行业标准比较了异丙醇、环己烷、二氯甲烷-环己烷混合液等多种不同提取溶剂，在相同条件下对抗氧剂的提取情况[14-16]，结果发现异丙醇的提取效果较好，可有效分离BHA、BHT、Irgafos 168、Irganox 1010和 Irganox 1076。

试验同时比较了不同比例的乙腈-水、甲醇-水等流动相系统的变化对抗氧剂测定的影响，结果采用乙腈-水梯度洗脱程序，可有效去除干扰，改善各成分间的分离度。此外还考察了提取方式及提取时间的影响，因抗氧剂稳定性较差，所以加热回流等较为激烈的方式会对其产生影响，试验最终采用超声2h加浸泡过夜的提取方式。另外需要注意的是，因抗氧剂的不稳定性，所有测试溶液应在配制完成后尽快测试。

对于抗氧剂的限度，各国法规针对具体对象规定不同。世界卫生组织WHO公布了 BHA、BHT每日摄入量上限分别为500μg/kg和125μg/kg。FDA规定了植物油中抗氧剂总量，并且规定食品辅料量不得超过食品中脂肪或油或芳香（挥发）油的200μg/kg。美国农业部要求任一抗氧剂含量不得超过100μg/kg，或在动物性脂肪中抗氧剂联用总量不得超过200μg/kg。《欧洲药典》中规定输液管中抗氧剂总量≤0.3%。本文实验结果表明，样品中各抗氧剂的含量均低于10μg/g。

本文方法学考察结果表明，试验所采用的方法操作简便、快速、重复性高，可同时测定上述5种抗氧剂，可作为塑料包装材料中抗氧剂的定量检测方法。由于塑料包装材料中抗氧剂种类多样，可作为其他类抗氧剂检测的参考，为药品包装材料质量标准的拟定提供支持。