茜素络合物对鳙耳石的标志效果研究

阙江龙 陶志英 王生 张燕萍 贺刚

(江西省水产科学研究所，农业部湖泊渔业资源环境科学观测试验站，江西南昌 330039)

鳙(Aristichthysnobilis)又名花鲢、胖头鱼、大头鱼，也叫雄鱼。隶属于鲤形目(Cyprinomorpha)、鲤科(Cyprinidae)、鳙属(Aristichthys)，滤食性鱼类，主要以浮游动物为食，也摄食浮游植物，有“水中清道夫”的雅称，四大家鱼之一，多分布在水域的中上层，是中国特有鱼类，分布范围很广，经济价值较高[1]。

近年来，随着环境污染，栖息地破坏，酷渔滥捕等原因，内陆水域渔业资源严重衰退，经济鱼类尤其是四大家鱼呈低龄化小型化趋势，增殖放流已成为主要的资源养护手段[2]，但增殖放流有效的标记回捕方法仍是目前的一大难题。

目前的一些常规标志方法有切鳍法、挂牌法和卫星定位等[3，4]，但这些标记方法操作复杂、费用较高或对鱼体存在损伤，不适于大规模较小个体鱼苗的增殖放流标记。利用能与钙结合的化学染料浸泡鱼类幼体，标记量大，方便简单、成本低且标记稳定[5]，已被用于珊瑚鱼类[6]和香鱼(Plecoglossusaltivelis)[7]增殖放流的生态学研究，本文利用化学染料茜素络合物(Alizarin complexone，ALC)溶液浸泡增殖放流主要种类鳙，旨在研究其染色技术，寻找最佳的浸泡浓度，为大规模增殖放流标记提供技术支持，为放流种群的生态学研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

20日龄鳙鱼苗均来自江西省水产科学研究所黄马基地，实验采用化学染料茜素络合物指示剂(分子式：C19H15NO8，中文别名为茜素氨羧络合剂；3-茜素甲基胺-N，N-二乙酸；茜素络合剂，国药集团化学试剂有限公司)。

1.2 实验方法

染料的浸泡液浓度、浸泡时间及样本大小见表1，设定4个不同的茜素络合物浸泡标记浓度和1个空白平行样。茜素络合物浓度分别为50mg/L、75mg/L、100mg/L和150mg/L。实验桶盛装已制好的实验所需浓度液5L，实验开始时将鳙鱼幼鱼放入相应的浓度中，每个实验桶10尾，浸泡开始前24h不投饵，持续浸泡8h后统计死亡率，浸泡结束将存活个体放入等体积的清水中暂养。

1.3 耳石摘取及检测

在Mshot解剖镜(MD50)下用解剖针挑取鳙耳石，蒸馏水洗涤，95%乙醇脱水，光学显微镜观察标记效果，并拍照。按照无、可见、明显、鲜艳记录耳石荧光反应强度[8]。

2 结果与分析

2.1 浸泡死亡率

茜素络合物浸泡处理后，鳙鱼的死亡率如表1所示，在水温25～28℃、浓度为50～100mg/L的茜素络合物溶液中浸泡8h，鳙鱼幼鱼的存活率均为100%，当溶液浓度达到150mg/L时，对鳙鱼幼鱼具有较强的毒性，浸泡后幼鱼全部死亡。

表1 茜素络合物标记方案和标记效果

2.2 标记效果

解剖镜观察结果(图1、图2)显示，茜素络合物溶液浸泡标记的仔稚鱼耳石，50mg/L实验组标记不明显，75mg/L实验组耳石周围可见紫红色标记环，经浓度100mg/L茜素络合物浸泡处理，鳙耳石边缘具明显的标记环。

图1 未浸泡染料幼鱼耳石

图2 茜素络合物浸泡耳石标记效果a、b、c溶液浓度分别为50mg/L、75mg/L、100mg/L

3 讨论

3.1 安全浓度

荧光染料茜素络合物浸染于鱼苗中时，能附着沉积于标志目标身体的钙化组织如鳞片、耳石、鳍棘等硬骨组织上，以产生在显微镜下可识别的着色点标记[9]。不同鱼类在不同生长阶段对不同浓度的茜素络合物敏感性不一样[10，11]。从本实验的存活率可知，茜素络合物浓度在不高于100mg/L时，对20日龄的鳙存活没有显著影响，而当其浓度达到150mg/L时，所有的幼鱼死亡。因此，茜素络合物安全浓度为不高于100mg/L。

3.2 标记效果

从图2中可知，在安全浓度范围内，灰白色鳙耳石随着浸泡浓度的增加，标记环越明显，在8h的浸泡持续时间下，50mg/L浓度组的鳙耳石在右侧略见淡红色的标记，75mg/L浓度组在耳石四周能看见淡红色的标记环，100mg/L浓度组能看见明显标记环。100mg/L浓度的茜素络合物为最适标记浓度，此浓度在可见光下能达到清晰易于辨认的标记效果。

经过上述分析与讨论可知，茜素络合物适用于鳙幼鱼的耳石标记，由于操作简单，价格合理，能持续较长时间[12]，适用于在全国范围内内陆水域的增殖放流标记及后续的跟踪回捕，为追踪放流群体的生活史，研究鱼类种群动态提供了可能。