一例猪瘟病毒感染的诊断

何春

摘要：猪瘟是危害养猪业的一种重要病毒性传染病，给养猪业造成了巨大的经济损失。现对一起疑似猪瘟病毒感染病例从发病猪的临床症状、病理剖检及实验室分子生物学PCR诊断，最终确定该猪场发生了猪瘟病毒感染，并且讨论分析了猪瘟诊断与综合防控方面的体会，以期为广大养殖户提供参考。

关键词：猪瘟病毒；感染；诊断

中图分类号：S858. 28

文献标识码：B

文章编号：2095-9737（2018）06-0013-02

猪瘟（CSF）俗称“烂肠瘟”，是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性、热性、接触性传染病，世界动物卫生组织（ OIE）将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，该病具有高度传染性和致死性，给全球养猪业造成了巨大的经济损失，是威胁我国养猪业的最重要的传染病之-[1]。猪瘟是一种高度接触性传染病，急性型猪瘟以败血性变化为主，实质器官出血，慢性型猪瘟主要是纤维素性坏死性肠炎变化。猪瘟可以引起免疫抑制，导致猪群继发或混合感染其他疾病，给猪场带来严重经济损失。猪瘟的防治以疫苗免疫为主，我国自主研制的猪瘟兔化弱毒疫苗（C株）是一种安全和有效的弱毒疫苗，对猪瘟的防控起到了关键的作用，有效控制了我国猪瘟的暴发与流行，但猪场由于免疫不及时或者疫苗质量不佳，日常养殖饲养管理方式不当，药物使用不当等原因导致疫苗免疫失败，猪瘟病毒的感染仍时有发生[2]。现通过对一起猪瘟病毒感染的诊断，借以提高广大养殖户对猪瘟疾病的认识和重视，现将整个诊断过程介绍如下。

1 材料和方法

1.1 试剂、载体及试剂盒

一步法RT- PCR扩增试剂盒、克隆载体pMD18 - T为TaKaRa公司产品；基因组RNA提取试剂盒、胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒均购自天根生化科技（北京）有限公司。

1.2 临床症状观察

观察发病仔猪的临床症状。

1.3 病料剖检观察

对病死仔猪剖检，根据临床症状及病料剖检结果，对病例进行初步诊断。

1.4 实验室PCR检测

取淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏等病变组织捣碎、研磨，研磨后反复冻融3次，离心取上清，利用病毒基因组RNA提取试剂盒提取病毒基因组。根据参考文献[3]合成1对猪瘟病毒特异性检测引物（Pl： 5'- TACACGATTGGACAAAT-CAAA-3；P2：5'- AACTC CATGTGCCATGTACAG-3'）。PCR扩增程序为：50℃60 min；94℃5 min； 94℃45 s，56℃45 s，72℃1 min，30个循环；72℃10 min，4℃终止反应。取PCR扩增产物10 μL进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。

1.5 测序鉴定

PCR扩增产物利用胶回收试剂盒回收后连接至pMD18T载体，利用质粒提取试剂盒提取质粒，将阳性质粒送上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序，将测序结果与猪瘟病毒特异性序列进行比对。

2 结果与分析

2.1 临床症状

发病仔猪15日龄，发病初期排黄绿色稀便，体温升高，在39.5℃左右，厌食，逐渐消瘦，最后衰竭至死亡，曾经使用青霉素类、磺胺类药物治疗，均无效。

2.2 病料剖检

剖检可见全身出血严重，胸腔、腹腔、内脏都出血，喉头和扁桃体出血，肾脏呈土黄色，表面有大量出血点，肠道、膀胱出血，淋巴结出血，有“大理石样”病变。

2.3

PCR检测结果

如图1所示，临床病料RT- PCR扩增产物在355 bp处有特异性扩增条带，与试验预期设计的大小相符。

2.4 测序鉴定

经过序列比对，扩增的序列为猪瘟病毒的特异性序列，说明该猪场发生了猪瘟病毒感染，应该加强免疫防控。

3 讨论

近几年来，随着猪瘟兔化弱毒疫苗在我国的广泛接种，该病在我国已经得到有效的控制，但是散发病例仍有发生，我国猪瘟的持续性感染、隐性感染依然存在，给猪瘟的综合防治带来了一定的困难，也造成了巨大的经济损失，严重阻碍了养猪业的健康发展[4]。猪瘟是传染性极强的疾病，一旦发生就会传染整个猪场的猪，给养殖户带来灾难。引起猪瘟发病的主要原因是免疫程序不合理，免疫效果不确实。猪瘟的防控应坚持以预防为主，采取综合防控措施，确保疫苗的质量合格，在疫苗的使用过程中，严格按照免疫规程，制定免疫程序的关键是排除母源抗体干扰，确定合适的首免日龄，适当加大疫苗注射剂量。定期对猪场进行免疫检测，这样不仅能了解猪群的免疫水平，指导猪场合理科学免疫，而且还能检查免疫的效果，通过监测母源抗体以及猪群残留抗体水平，适时开展补充免疫接种[5]。猪场引种时要选择没有猪瘟流行地区的种猪场，引种后要隔离饲养一段时间，经过常规免疫后再转入本场区饲养，最好是自繁自养，建立无特定病原体猪群。同时，对于猪瘟的防控还应将猪场患病猪、隐性感染猪、阳性猪坚决淘汰，病死猪要进行无害化处理，搞好猪舍环境卫生，定期消毒，做好猪舍的驱虫、灭鼠工作，进出的人员、车辆、物品要彻底消毒，加强饲料质量管理，加强疫苗监管，提高防疫人员素质，做好每个环节的工作，确保防疫工作的有效性。目前，有条件的猪场可以实行猪瘟净化措施，通过引进无特定疫病的种群，培育健康动物，加强检疫等方式可以实现猪场的猪瘟病毒净化[6]。通过建立健康猪群，制定合理的免疫程序，加强生物安全等措施，尽快实现猪瘟的净化。

参考文献：

[1]高顺，浅谈猪瘟病毒[J].畜牧兽医科技信息，2015（10）：89.

[2]卢开森，猪瘟免疫失败原因分析及对策[J].农技服务，2017，34（6）：129.

[3]李晶梅，劉丹，薛霜，等，猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT- PCR鉴别检测方法的建立及应用[J].动物医学进展，2014，35（4）：66-71.

[4]杨光，于江，鹿胡刚，等，我国猪瘟的流行现状及防控策略[J].中国畜牧兽医文摘，2017，33（5）：153-154.

[5]贺俊畅，张建远，谢有福，等，规模化猪场猪瘟免疫程序制定的探索[J].中国兽医杂志，2017，53（1）：43-44.

[6]李沛丽，董保豫，犹银俊，等，猪瘟净化的基本要求和方法探讨[J].贵州畜牧兽医，2017，41（1）：22- 23.