蒙药制剂棘豆止咳散中甘草的薄层色谱鉴别研究

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1.内蒙古蒙医药工程技术研究院，内蒙古 通辽 028000；2.内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000；3.内蒙古自治区库伦旗蒙医医院，内蒙古 通辽 028000

棘豆止咳散为内蒙古通辽市库伦旗蒙医医院的医院制剂，是由甘草、川贝母、多叶棘豆、石膏等4味药组成。用于调节三根平衡，清除希拉热邪，从而达到清热、化痰、润肺、止咳。棘豆止咳散对于多种咳嗽均具有明显疗效，且价格低廉，无毒副作用，老人和儿童均可使用[1-3]。目前，从甘草中已经分离出了黄酮类成分、三萜类成分以及多糖[4]。药理实验结果表明，甘草药材和甘草提取物不仅有抗菌、抗病毒、抗炎、抗癌和抗氧化等作用，还能够调节和保护人体各系统[5]。尤其在呼吸系统方面，具有止咳、化痰、定喘以及抗呼吸道感染等作用，甘草中的黄酮类成分以及甘草酸、甘草次酸在呼吸系统方面作用显著[6-12]。目前，该制剂薄层鉴别方面尚无研究。因此，本实验对制剂中甘草药材的薄层鉴别方法进行了研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器 电子分析天平(Mettler Toledo)；ZF-02S型紫外分析仪(北京君意东方电泳设备有限公司)；青岛海洋硅胶G板(青岛海洋化工厂)；醋酸乙酯、甲酸、冰醋酸、正丁醇、甲醇、三氯甲烷、丙酮均为分析纯。

1.2 材料 棘豆止咳散(内蒙古通辽市库伦旗蒙医医院自制)；甘草苷(CAS:551-15-5，上海佰世凯化学科技有限公司)；甘草对照药材(批号：120904，哈尔滨恒浩科技开发有限公司)。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱条件的考察

2.1.1 供试品溶液的制备 取处方量的棘豆止咳散1 g，加65%乙醇10 mL，加热回流提取2 h，滤过，滤液蒸干，残渣用1 mL甲醇溶解，备用。

2.1.2 对照药材和对照品溶液的制备 取甘草对照药材1 g，加65%乙醇10 mL，加热回流提取2 h，滤过，滤液蒸干，残渣用1 mL甲醇溶解，作为对照药材溶液，备用。称取甘草苷对照品0.5 mg，加1 mL甲醇溶解，作为对照品溶液，备用。

2.1.3 展开系统的考察 分别吸取对照品溶液、甘草对照药材溶液和供试品溶液各3 μL，点在同一张薄层板上，以展开系统(A)正丁醇-醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水(5∶10∶1∶1∶3.5)，展开系统(B)三氯甲烷-丙酮-甲醇-水-甲酸(11∶3.5∶3.7∶0.7∶0.1)，展开系统(C)醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)分别展开，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇显色，吹风机加热至斑点清晰，在可见光下检视，结果见图1。综合比较图中斑点数目、分离度等情况，可确定展开系统(C)醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为最佳展开系统。

2.1.4 检视方法的选择 分别吸取对照品溶液、甘草对照药材溶液和供试品溶液3 μL，点在同一张薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开系统进行展开，取出，晾干，通过10%硫酸-乙醇显色剂，吹风机加热至斑点清晰、三氯化铁显色剂及365 nm紫外灯下检视，三种方法进行比较，结果见图2。综合比可知(A)10%硫酸-乙醇显色为最优检视方法。

2.2 方法学考察

2.2.1 重复性考察 按2.1.1供试品溶液制备方法制备供试品溶液6份，分别吸取对照品溶液、甘草对照药材溶液和上述供试品溶液6份，各3μL，点在同一张薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开系统进行展开，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇显色，经吹风机加热至斑点清晰，在可见光下检视，结果见图3。结果表明，供试品溶液制备方法的重复性良好。

2.2.2 耐用性考察

2.2.2.1 不同厂家薄层板的考察 分别吸取对照品溶液、甘草对照药材溶液和供试品溶液3 μL，点在不同的薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开系统进行展开，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇显色，经吹风机加热至斑点清晰，在可见光下检视，结果见图4。结果表明，青岛海洋硅胶G板的分离效果优于自制硅胶G板。

2.2.2.2 不同展距的考察 分别吸取对照品溶液、甘草药材溶液和供试品溶液3 μL，点在不同的薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开系统进行展开，展距分别为6.5 cm、7.5 cm、8.5 cm，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇显色，经吹风机加热至斑点清晰，在可见光下检视，结果见图5。结果表明，展距为6.5 cm时，分离效果不佳；展距为7.5 cm时已能较好的分离，但展距为8.5时的效果更好，故选择展距为8.5 cm。

2.2.2.3 不同点样量的考察 分别吸取供试品溶液1 μL、3 μL、5 μL，甘草对照药材和甘草苷对照品溶液各3 μL，点在同一薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开系统进行展开，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇显色，经吹风机加热至斑点清晰，在可见光下检视，结果见图6。结果表明，点样量为3 μL，斑点清晰，因此供试品的最佳点样量为3 μL。

2.2.2.4 不同预饱和时间的考察 吸取对照品溶液、甘草对照药材溶液和供试品溶液各3 μL，分别点在三块不同薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开系统进行展开，预饱和时间分别为0 min、15 min和30 min，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇显色，经吹风机加热至斑点清晰，在日光下检视，结果见图7。结果表明，不同预饱和时间，对分离效果影响不大。

2.2.2.5 不同展开温度的考察 吸取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液3 μL，分别点在三块不同薄层板上，在4 ℃、21 ℃、30 ℃的条件下，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开系统进行展开，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇显色，经吹风机加热至斑点清晰，在可见光下检视，结果见图8。结果表明，21 ℃下展开效果较好，故选择在21 ℃下进行展开。

2.2.2.6 不同展开湿度的考察 吸取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液3 μL，分别点在二块不同薄层板上，在相对湿度15%、75%的条件下，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开系统进行展开，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇显色，经吹风机加热至斑点清晰，在可见光下检视，结果见图9。结果表明，相对湿度对分离效果及斑点的清晰程度影响不大。

3 讨论

蒙药棘豆止咳散是内蒙古通辽市库伦旗蒙医医院的院内制剂，对于多种咳嗽均具有明显疗效，甘草药材是该制剂重要组成药味之一。本文研究了棘豆止咳散中甘草药材的薄层鉴别方法，包括展开系统的考察、检识方法的选择以及耐用性的考察等，所建立的薄层鉴别方法可用于棘豆止咳散的质量控制，为进一步实现蒙药制剂棘豆止咳散质量均一、稳定奠定了方法基础。