MALDI-TOF MS在临床微生物检验中的应用

刘鸿丽

（泰兴市人民医院，江苏 泰兴 225400）

0 引言

微生物检验是临床用于诊断感染类疾病的主要手段，对疾病治疗有效率的提高，具有重要价值。临床微生物检验方法，包括API法、RapID法，以及MALDI-TOF MS等多种。有研究指出，MALDI-TOF MS用于进行临床微生物检验，速度快，且准确度高。本文选取感染类疾病住院患者的体液标本100例作为样本，阐述了MALDI-TOF MS的应用方法，并观察了应用效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院感染类疾病住院患者的体液标本100例作为样本，采用MALDI-TOF MS进行微生物检验。标本来源：男54例、女46例。标本类型：痰液36例（呼吸系统感染）、血液38例（脓毒血症）、尿液26例（泌尿系统感染）。

1.2 方法

①准备MALDI-TOF质谱仪及Vitek细菌鉴定仪。需应用的试剂，包括Taq酶及PCR反应试剂等。②取样本中的3-5 g细菌单个菌落+300 μL超纯水+900 μL无水乙醇，离心2 min。③弃上清液，加70%甲酸50 μL、乙腈50 μL，继续离心2 min。④取1 μL上清液，干燥后，加1 μL基质液，覆盖加样区域。⑤设置质谱仪参数：PIE为300 ns-500 ns，IS1为20 kV，频率为20-200 Hz，⑥观察并记录检验结果。

1.3 观察指标

观察100例样本的检验结果。

1.4 统计学分析

采用SPSS 24.0软件处理数据，计数采用χ2检验，以（%）表示。计量采用t检验，以（均数±标准差）表示。P＜0.05视为数据差异有统计学意义。

2 结果

100例患者中，呼吸系统感染检出率100%、脓毒血症检出率100%、泌尿系统感染检出率为96.15%，详见表1。

表1 100例样本的检验结果

3 讨论

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS），本质为软电离生物质谱，属于临床新型的微生物检验技术[1-5]。近些年来，由真菌所导致的感染类疾病的发病率明显提升。如患者免疫力低下，病死率将明显增高。真菌感染的常规检验方法，以生化法为主[6]。虽可在一定程度上检出病原菌，但效率较低。将MALDI-TOF MS法应用到真菌检验过程中，对不同的菌株进行鉴定，能够有效明确真菌种类，进而达到提高疾病诊断准确率的目的。单独采用MALDITOF MS法，对真菌进行检验，效率及准确率均值得肯定[7]。但如将其与Vitek MS System，以及DNA测序方法，与MALDI-TOF MS法联合对真菌进行检验，效果将进一步改善。临床选取1243株菌株作为样本，采用MALDI-TOF MS法+Vitek MS System+DNA测序法，对真菌进行了检验[8]。检验结果显示，96.7%的真菌，均可鉴定到种。真菌鉴定结果准确率，可达到99%。仅2.4%的菌株，无法被鉴别。通过重复性检验可以发现，采用MALDI-TOF MS对真菌感染进行检验，重复性为97.3%。上述研究结果表明，MALDI-TOF MS在临床真菌检验中，应用价值较高[9]。因此，如患者存在真菌感染的可能，建议临床采用ALDI-TOF MS法，对真菌进行鉴定。进而明确是否存在真菌感染，提高疾病检出率。确诊为感染后，需立即给予治疗。并视患者的病情，考虑继续采用MALDI-TOF MS法，对治疗效果进行观察[10]。一旦发生感染真菌类型有所变化，需对治疗方案进行调整，提高治疗的针对性。

脓毒血症，为血液感染的常见疾病。进行血培养以及鉴定，为疾病病原菌检验的金标准。但该检验方法所需时间较长，检验结果获取的及时性差。将MALDI-TOF MS应用到血液标本的检验中，可直接对标本中的细菌，进行培养与鉴定。鉴定结果准确度，可达到66%及以上。需注意的是，草绿色链球菌，与肺炎链球菌，均属于不易识别的菌种。因此检验时，可能存在假阴性问题。为提高检验结果的准确度，建议将细菌浓度，控制在107/mL以上。尿培养，为临床用于诊断泌尿系统疾病的金标准。但具有效率低、成本高的缺陷。采用MALDI-TOF MS直接检验尿液标本，可于2次离心后，将白细胞去除，并收集到病原菌。检验结果的准确度，以及检验效率，均能够得到保证。上述研究成果，进一步证实了MALDI-TOF MS在临床微生物检验中的应用价值。临床可视感染类型，选择不同标本，采用该技术进行检验，提高疾病检出率。

综上所述，将MALDI-TOF MS应用到临床微生物检验中，有助于提高疾病检出率，明确病原菌，提高治疗有效率。