南宁某城区6 551例β珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果分析

石明芳

(广西壮族自治区南宁市第二人民医院医学检验科 530031)

β珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)是全世界广泛流行的一种遗传性溶血性疾病，该病是由于β珠蛋白基因发生突变引起的β珠蛋白肽链缺如(β0)或合成不足(β+)所导致。地中海沿岸、东南亚各国及我国广西、广东、海南等地是该病高发区[1]。地贫已成为广西地区最主要的出生缺陷，广西每年新增不少的重型地贫患儿。本文通过对6 551例受检者进行β地贫基因检测，对本地区β地贫的突变基因型及流行情况进行分析，以期为广西地区的β地贫基因突变类型及分布情况提供参考数据。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2015年9月至2017年6月在本院进行β地贫基因检测的6 551例患者(来自南宁市江南区)。其中男3 143例，女3 408例，年龄18 d至89岁。

1.2仪器与试剂 外周血DNA提取试剂和β地贫基因检测试剂盒由深圳益生堂生物技术有限公司提供；DNA体外扩增仪为珠海黑马医学仪器公司Hema9600型，恒温杂交仪为深圳亚能生物技术有限公司YN-16型。

1.3方法

1.3.1血样采集与处理 抽取静脉血2 mL，乙二胺四乙酸二钾抗凝，放2～8 ℃保存。

1.3.2DNA基因组的提取 按照DNA提取试剂盒说明书进行操作。

1.3.3DNA扩增反应 将提取好的DNA加入反应体系，按照设定好的程序进行扩增。

1.3.4RDB杂交 采用反向斑点膜条杂交技术(PCR-RDB)检测中国人常见的17种β珠蛋白基因突变，包含CD41-42、CD17、-28、CD71-72、IVS-Ⅱ-654、IVS-Ⅰ-1、CD27/28、CD31、IVS-Ⅰ-5、-32、CAP+1、CD26(βE)、-29、-30、CD14-15、CD43、Initiation condon。

2 结 果

2.1β地贫基因类型及构成比 6 551例受检者外周血中检出β地贫1 242例，基因携带率为18.96%，基因型以CD41-42(561例)为主，其次是CD17(339例)、-28(97例)、IVS-Ⅱ-654(75例)、βE(72例)、CD71-72(53例)、IVS-Ⅰ-1(26例)、CD43(10例)、-29(3例)、CAP(1例)、CD27/28(1例)、CD41-42位点复合βE位点(1例)、CD41-42位点复合CD17位点(1例)、CD17位点复合βE位点(1例)、βE位点纯合子(1例)。杂合子1 238例，双重杂合子3例，纯合子1例。见表1。

表1 1 242例阳性β地贫基因类型及构成比

2.2β地贫的临床类型 在1 242例β地贫中，99.68%为轻型(1 238例)，是β地贫的杂合子(β0/βN或β+/βN)，在临床上表现为轻度的小细胞低色素贫血。一般是在体检时发现，患者正常生活不受其影响。中间型β地贫检出3例，占0.24%；重型β地贫1例，患儿为2岁男孩，因贫血就诊于本院儿科门诊，其平均红细胞体积为67.2 fL,平均红细胞含量为21.4 pg,血红蛋白水平为62 g/L，该病例目前定期输血和驱铁治疗。

3 讨 论

目前，全球已发现有800多种β珠蛋白基因突变类型，我国报道的就有60多种[1]。本次检测的6 551例标本，共检出11种β地贫突变基因类型。相对于中国人常见17种β地贫点突变，CD31M、IVS-Ⅰ-5M、-32M、-30M、CD14-15M、Initiation condon M未被检出。由此可见，在本地区这6种点突变基因相当罕见。在日常检测工作中，若发现标本的血液学表型(如血常规、血红蛋白电泳、血清铁等)与基因型不匹配时，应采用其他检测方法进行深入分析，避免罕见性β地贫的漏检。

β地贫是我国南方各省最常见且影响最大的一种单基因遗传病。该病主要是由于β珠蛋白基因的点突变(少部分为缺失或插入)而导致的β珠蛋白合成障碍或合成无效。β链的合成不足，使得α链与β链失衡，多余的α链在幼红细胞和红细胞中沉积形成包涵体，包涵体的存在使得红细胞膜变形能力下降。成熟红细胞在通过脾脏时会被破坏掉，而幼红细胞通常是在骨髓内被破坏从而导致无效造血；同时多余的α链与γ链结合形成α2γ2(HbF)，HbF与氧气结合力高，导致组织缺氧[2]。

南宁市江南区β地贫基因突变以CD41-42为主，其次为CD17、-28、IVS-Ⅱ-654、βE、CD71-72。这6种突变类型占全部突变类型的96.38%。南宁市江南城区β地贫基因突变类型与区域内的北部湾[3]、贵港[4]、桂林[5]、梧州[6]等地报道的基因突变类型相似，其中前6种突变类型的先后顺序与北部湾地区报道的一致。海南黎族人中几乎全为CD41-42突变[7]，而广东梅州地区[8]、福建[9]、湖北武汉[10]等地以IVS-Ⅱ-654突变类型占第一位，可见不同地域之间β地贫基因的突变类型存在差异。

β地贫在临床上通常被分为轻型、中间型和重型3种类型[11]。(1)轻型β地贫一般无临床症状，大多在体检时发现，其血液学表型一般提示小细胞低色素贫血(红细胞平均体积<82 fL，平均红细胞血红蛋白含量<27 pg)，生活不受影响；(2)重型β地贫患儿一般在出生3～6个月后开始出现临床症状，早期症状可能不太明显，但随着年龄的增长，患儿开始出现面色苍白，肝脾肿大，腹部渐渐膨出。随着贫血的加重，造血腔的扩大，出现面部颧骨隆起、头颅额部隆起，鼻梁塌陷等典型的地中海面容。患儿一般夭折于心肌损伤或反复感染。(3)中间型β地贫的表型变化范围更宽，主要为β+地贫纯合子或双重杂合子。其临床表现为中度贫血，血红蛋白水平维持在60～100 g/L，伴随不同程度的脾肿大；大部分中间型β地贫患者需接受输血和驱铁来维持生命[12]。

迄今为止，β地贫尚缺乏理想的治疗方法。由于广西地区人群的β地贫基因携带率较高，同型β地贫携带者婚配的概率也较大，同型β地贫婚配夫妇其后代有1/4的概率为中间型或重型β地贫，重型β地贫患儿的出生将会给其家庭和社会造成极大的负担。因此，想要提高人口素质、避免重症β地贫患儿的出生不仅需要完善的地贫防控体系，还需要在本辖区内对居民大力普及地贫防控知识。加强地贫筛查，并对筛查阳性者进行地贫基因诊断，对高危人群进行遗传咨询及产前诊断势在必行。