C反应蛋白基因多态性T-757C与高血压病的相关性研究

戚 猛

（无锡市第二中医医院心内科，江苏 无锡 214121）

高血压病是指以体循环动脉血压增高为主要表现，可伴有心、脑、肾等器官功能或器质性病变的临床综合症，是我国最常见的慢性疾病之一，同时其也是心脑血管病最主要的危险因素[1]。多项研究显示高血压患者血管壁长有炎症反应，这种炎症反应在高血压的发生、发展中起着重要的作用。C反应蛋白（C Reactive Protein，CRP）主要由白介素-6通过剂量以来的方式刺激肝细胞及活化巨噬细胞合成，对于血管内皮细胞增生、迁移、动脉内膜增厚等均具有较强的促进作用。研究显示CRP基因变异对于体内血清CRP水平基因多态性与高血压病相关性方面尚存在争议[2]，因此本文开展相关研究旨在探讨C反应蛋白基因多态性T-757C与高血压病的相关性，为该病的临床诊治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月～12月在我院就诊的原发性高血压病患者160例（观察组）与同期健康体检血压正常者160例（对照组）进行研究。纳入标准：①观察组患者符合美国《2017年成人高血压预防、诊断。评估和管理指南》[3]中的相关诊断；②受试者者智力正常，可与医护人员进行正常交流；③受试者已获知情同意。排除标准：①继发性高血压患者；②冠心病史、高胆固醇的患者；③恶性肿瘤的患者；④感染性疾病的患者；⑤结缔组织疾病的患者；⑥肝肾功能异常者。其中，对照组年龄36～59岁，平均（41.83±9.28）岁，男95例，女65例，BMI指数19～23 kg/m2，平均（21.09±1.27）kg/m2；对照组年龄34～58岁，平均（42.09±9.33）岁，男92例，女68例，BMI指数20～24 kg/m2，平均（21.09±1.27）kg/m2。两组患者性别、年龄、BMI指数等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

①DNA提取：两组受试者均在禁食10h后抽取空腹外周静脉血5 mL，置含抗凝剂PU管中，以3000 r/min转速离心15min分离血浆及白细胞，以酚-氯仿法抽取外周血白细胞基因组DNA。②目标DNA的PCR扩增：采用金斯瑞公司生产合成的引物，上游引物为5’-GTAGTAAGATTGACAGCAAG-3’，下游引物为5’-TTCTCATTGTTCAATTCCCA-3’。PCR反应体系：总体积50 μL，其中包括5 μL的10×反应缓冲液，镁离子终浓度为2.0 mmol/L，4中脱氧核糖核酸苷酸终浓度为0.2 mmol/L，上下游引物各20 pmol，DNA聚合酶1.25U与末班DNA100ng。PCR反应条件：94℃预变性5 min，接着同样温度下变性1min，53℃退火48s，72℃延伸48 s，共35个循环，最后72℃延伸 5min。反应完成后将产物置1%琼脂糖凝胶电泳后分析PCR扩增效果。③多态性测定：取PCR扩增产物4 μL，限制性内切酶Mfe I 2U，10×酶切缓冲液2 μL，灭菌超存水补足体积值20 μL，混匀在37℃下温育11h。酶切产物置3%琼脂糖凝胶中电泳，成像后判断其基因型。取部分PCR扩增无进一步测序。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行处理，计数资料采用x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 CRP基因T-757C多态性分析及PCR测序产物

PCR扩增产物为314 bp特异性片段，本研究检测到3中基因型分别是CC型（314 bp）、TC型（314 bp，234 bp，80 bp）及TT型（234 bp，80 bp）。

2.2 CRP基因T-757C多态性分布特点

两组基因型对比具有显著性差异，观察组TC基因型比例明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），两组TT基因型、CC基因型及等位基因，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 CRP基因T-757C多态性分布特点

2.3 CRP基因T-757C多态性TC基因型与高血压的关系

单因素分析结果显示TC基因型、Glu、HDL及吸烟与高血压的发生有关（P＜0.05），多因素分析结果显示在调整上述因素后CRP基因T-757多态性TC基因型、HDL与高血压病的发生仍具显著相关性（P＜0.05）。见表2、3。

表2 CRP基因T-757C多态性TC基因型与高血压的关系单因素分析

表3 CRP基因T-757C多态性TC基因型与高血压的关系多因素分析

3 讨 论

CRP为一种炎症时相非特异性反应蛋白，可促进血管内皮细胞增生、迁移及动脉内膜增厚，对单核细胞聚集有明显的调节作用，还可与膜攻击复合物共同存在于早期动脉粥样硬化病种[4]；对血管内皮细胞有明显的刺激作用，可引起细胞间黏附因子-1的分泌，诱导内皮细胞致炎因子的表达，并可对巨噬细胞摄取低密度脂蛋白进行调节转为泡沫细胞，可见CRP与动脉粥样硬化的发生发展有着密切的关系。有研究显示高血压湍流增多和剪切应力增高可引起动脉内膜损伤，动脉壁损伤、修复和动脉硬化均伴有炎症反应，CRP与加剧动脉粥样硬化和严重心血管病发作具显著的相关性，可引起血管壁重构而使阻力增加，从而引起血压的升高[5]。

CRP基因在人类染色体1q13.2区域，全长约6.8 kb，含有2个外显子中间被1内含子隔开。关于CRP基因多天线与心血管疾病日益受到研究者所重视，但其与高血压病之间的相关性研究较少[6]。本研究结果显示两组基因型对比具有显著性差异，观察组TC基因型比例明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），两组TT基因型、CC基因型及等位基因，差异均无统计学意义（P＞0.05），提示CRP基因多态性T-757C与高血压病显著相关，大量研究证实遗传因素对血清CRP、白细胞及白蛋白均有重要的作用，位于启动序列的CRP基因-286C＞T＞A属于功能性多肽性位点，其可通过影响逆转录机制而影响CRP水平，CRP基因T-757C同样属于启动子区，是DNA分子上能与RNA聚合酶结合形成转录其实复合体的区域，对于转录有较强的调节作用，但T-757C与-286C＞T＞A存在强连锁不平衡，因此认为T-757C可通过逆转录影响前提mRNA生成而影响翻译及血清CRP水平，促进动脉粥样硬化的进行导致血管弹性下降进而引起高血压病的发生[7]。单因素分析结果显示TC基因型、Glu、HDL及吸烟与高血压的发生有关（P＜0.05），多因素分析结果显示在调整上述因素后CRP基因T-757多态性TC基因型、HDL与高血压病的发生仍具显著相关性（P＜0.05）。高血压患者CRP浓度上升可能与血管内皮损伤及免疫反应有关，血管内皮功能障碍被认为是动脉粥样硬化初期最重要的病理改变，高血压患者血管内皮受损可能与长期血压较高导致血管内皮长期受压和受到血流的异常冲击有关，损伤的内皮可致炎性细胞粘附、激活单核巨噬细胞，促进单核巨噬细胞、T细胞等进入受损细胞内产生IL-1、TNF-α等细胞因子而刺激细胞合成CRP[8]。

综上所述，C反应蛋白基因多态性T-757C与高血压病的发病密切相关，TC基因型可能为高血压病遗传易感性基因标记之一。因本研究为单中心研究，样本量较小，取得的结果可能有一定的偏差，下步将扩大样本量进行进一步深入研究。