赵 鑫,曾 强,王 洋,曹经林,任贵军
(河北医科大学第三医院肝胆外科,河北 石家庄 050010)
肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤[1]。研究发现,恶性肿瘤的转移与其微血管和微淋巴管的密度密切相关。环加氧酶(cyclooxygenase,COX)是前列腺素(prostaglandins, PG)合成过程中的限速酶,其底物是花生四烯酸[2]。大量的临床实验结果表明,COX-2在消化系统肿瘤的发生、发展及转移过程中起着重要的作用[3-4]。本文主要研究肝癌组织中COX-2蛋白的表达与肝癌组织中微血管密度(MVD)和微淋巴管密度(MLVD)的相关性,分析COX-2蛋白的表达在肝癌转移中的作用,以期为肝癌的临床治疗提供参考。
本次研究的对象是2016年10月至2017年10月期间河北医科大学第三医院收治的50例肝癌患者。在这些患者中,有男性30例,女性20例;其年龄为29~68岁,平均年龄为(42.5±0.9)岁。本次研究对象的纳入标准是:1)其年龄>18岁;2)其肿瘤的临床分期符合2001年全国肝癌会议发布的关于肝癌的分期标准[5]。本次研究对象的排除标准是:1)其肿瘤的临床分期不明确或临床资料不全;2)其合并有其他的原发性恶性肿瘤。
研究这些患者的性别、年龄、肿瘤细胞的分化程度、肿瘤的临床分期及是否存在淋巴结转移等临床资料。使用免疫组化法检测这些患者肝癌组织中COX-2蛋白的表达,分析其肝癌组织中COX-2蛋白的表达与MVD和MLVD的关系,从而判定肝癌组织中COX-2蛋白的表达与肿瘤转移的相关性。
1)用PBS缓冲液作为空白对照品。在显微镜下观察这些患者肝癌组织标本的HP染色图片。COX-2蛋白表达的阳性标准是:患者肝癌组织中的细胞膜、细胞浆内可见棕黄色的颗粒。COX-2蛋白表达的阴性标准是:患者肝癌组织中的细胞膜、细胞浆中未见着色颗粒。在高倍显微镜下观察这些患者的病理切片。在每个病理切片中任意选择5个视野,在每个视野中选择200个肿瘤细胞,共选择1000个肿瘤细胞。COX-2蛋白表达呈阳性的肿瘤细胞的数量所占的比例若<1%,表示肿瘤组织中COX-2蛋白的表达呈阴性(-);COX-2蛋白表达呈阳性的肿瘤细胞的数量所占的比例若为1%~10%,表示肿瘤组织中COX-2蛋白的表达呈弱阳性(+);COX-2蛋白表达呈阳性的肿瘤细胞的数量所占的比例若为11%~50%,表示肿瘤组织中COX-2蛋白的表达呈中度阳性(++);COX-2蛋白表达呈阳性的肿瘤细胞的数量所占的比例若≥51%,表示肿瘤组织中COX-2蛋白的表达呈强阳性(+++)。除检查结果为阴性以外,均可判定肿瘤细胞中的COX-2蛋白呈阳性表达。2)参照 Weidner计数法,在低倍显微镜下观察这些患者的病理切片。在每个病理切片中选取2个染色阳性数目较多的区域。然后在高倍显微镜下观察每张病理切片[7]。计算经CD34标记的微血管的数量,每个病理切片取5个视野,取其平均值,计算MVD和MLVD。
使用SPSS13.0统计软件对本次研究中的数据进行处理。计量资料用均数±标准差(±s)表示,采用t检验。计数资料用百分比(%)表示,采用χ²检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
在这些肝癌患者中,不同年龄、性别的患者其肝癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率相比差异均无统计学意义(P>0.05)。肿瘤分期为Ⅰ期、Ⅱ期的患者其肝癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率低于肿瘤分期为Ⅲ期、Ⅳ期的患者(P<0.05)。肿瘤细胞的分化程度为低分化的患者其肝癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率高于肿瘤细胞的分化程度为中、高分化的患者(P<0.05)。存在淋巴结转移的患者其肝癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率高于不存在淋巴结转移的患者(P<0.05)。对同一组织细胞中COX-2蛋白的表达与MVD和MLVD的相关性进行分析的结果显示,肝癌组织中COX-2蛋白的表达与MVD呈正相关(r=0.6261,P<0.001)。肝癌组织中COX-2蛋白的表达与MLVD呈正相关(r=0.6091,P<0.001)。详情见表1。
表1 不同的肝癌患者其肝癌组织中COX-2蛋白表达阳性率的比较
研究发现,微血管、微淋巴管的形成是肿瘤发生、发展的重要过程[8-9]。COX-2蛋白是前列腺素合成过程中一种重要的限速酶,其表达呈诱导性。COX-2蛋白参与了肝癌发生、发展的全过程,在肝癌组织中呈高表达。COX-2蛋白是通过抑制正常细胞的凋亡、增强肿瘤细胞的繁殖能力、促进肿瘤内血管的形成、增强肿瘤细胞的侵袭力参与到肿瘤发生、发展的过程中[10]。研究发现,COX-2蛋白的表达水平与肿瘤组织的病理类型、临床分期、是否存在淋巴结转移等因素密切相关[11]。本次研究的结果显示,COX-2蛋白在低分化肝癌组织中的表达水平高于在中、高分化肝癌组织中的表达水平。肿瘤分期为III期、IV期的患者其肝癌组织中COX-2 蛋白的表达水平高于肿瘤分期为Ⅰ期、Ⅱ期的患者。存在淋巴结转移的患者其肝癌组织中COX-2 蛋白的表达水平高于不存在淋巴结转移的患者。在同一个肝癌组织中,COX-2蛋白的表达与MVD及MLVD均呈正相关。说明肝癌组织中COX-2蛋白的表达在肿瘤转移的过程中起着促进的作用。因此有研究者认为,COX-2蛋白抑制剂可能对肝癌患者癌细胞的转移具有抑制的作用,这为肝癌的临床治疗提供了新的思路。
本次研究的结果证实,肝癌组织中COX-2蛋白的过度表达,可促进肝癌组织中微血管和微淋巴管的生长,使MVD和MLVD增加,从而使肿瘤发生转移。