菊苣与葛根、金银花、蒲公英配伍后黄酮类成分变化

王 赫，王 斌，张腾霄 李 华，于春贺

(绥化学院食品与制药工程学院，黑龙江绥化 152061)

菊苣又名苦苣，菊科多年生药食两用植物，主要含有多糖类、萜类、黄酮类等化学成分，具有清肝利胆、健胃消食、利尿消肿等功效，具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗肿瘤等生物活性[1]。葛根为豆科植物葛的根，属药食两用植物，主要活性成分为异黄酮类化合物，临床上用于治疗冠心病、心绞痛、眼底病、突发性耳聋、偏头痛、颈椎病等疾病[2]。金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花，它是我国第一批药食兼用植物，具有抗病原微生物、抗炎、解热、保肝、抗生育、止血、免疫调节、降血脂、中枢兴奋等药理作用[3]。蒲公英具有清热、解毒、利尿、散结等功效，是集营养与药用于一身的宝贵野生资源[4]。本实验研究菊苣、蒲公英、葛根、金银花4种药食同源的药物配伍后其黄酮类成分的变化规律，为开发上述4种药物的保健品提供科学依据。

1 材料与仪器

1.1 试验样品

样品编号及来源见附表。

1.2 仪器

101-2A型数显电热鼓风干燥箱，上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司；FW100高速万能粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司；分析天平FA2014，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；DK-98-IIA电热恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；KQ-50B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；752紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司。

附表 样品编号及来源

注：采购时间2016年

1.3 试剂

芦丁对照品，中国食品药品鉴定研究院；乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏水，均为分析纯。

2 方法

2.1 线性关系考察

精密称取干燥恒重芦丁标准品，65%乙醇溶解，制成1.0 mg/mL标准液，备用。精密吸取芦丁标准液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、 0.6 mL至25 mL容量瓶中，加入0.7 mL 5% NaNO2，5 min后加入0.7 mL 10% Al(NO3)3，放置10 min，加入5.0 mL 4%的NaOH，混匀后用30%乙醇定容至刻度，38℃水浴中显色15 min，试剂空白为对照，510 nm处测定吸光度[5]。

2.2 样品测定

2.2.1样品液制备 样品55℃干燥4h，粉碎，过40目筛。精密称取样品粉末各2.0 g，置100 mL三角瓶中，加70%乙醇30 mL，密封，浸泡6 h，超声提取15 min，取上清液。提取2次，合并两次滤液，70%乙醇定容至50 mL，备用。精密称取1、2、3、4号样品粉末各1.0 g，两两混匀后按上述提取过程操作，提取液用70%乙醇定容至50 mL，备用。精密称取1、2、3、4号样品粉末各0.5 g，混匀后按上述提取过程操作，提取液用70%乙醇定容至50 mL，备用。所有试验平行3次。

2.2.2样品测定 按2.1项条件测定样品，计算黄酮含量。计算公式如式(1)：

百分含量(%)={[(X×V样÷V取)÷ 1000]÷M}×100

(1)

式(1)中，X为根据标准曲线换算为芦丁的质量，单位mg；V取为测定样品时取样体积；V样为制备样品时总体积；M为制备样品液时称取样品重量，单位g。

2.3 方法学考察

按要求进行了精密度实验、加样回收率实验、重复性实验、稳定性实验等方法学考察。

3 结果与分析

3.1 精密度及加样回收率

精密度及加样回收率实验结果表明，精密度良好，RSD为1.87%，加样回收率为101.19%。由此可知，亚硝酸钠—硝酸铝比色法测定黄酮含量，方法简便、可靠、易行。

3.2 重复性及稳定性

重复性实验表明重复性良好，RSD为1.31%。稳定性实验表明，在60 min内，吸光度均基本稳定。说明该方法重复性好且测定数据稳定。

3.3 样品中黄酮含量

经回归分析，测定黄酮含量回归方程为y=1.255x+0.026 2，R2=0.9981，标准曲线见图1。

由图2可知，菊苣、葛根、金银花、蒲公英中的黄酮含量分别为0.75%、2.50%、15.04%、1.22%，其中，金银花中黄酮含量最高，菊苣中黄酮含量最低。为了解4种样品配伍后黄酮含量的变化，试验采用两两样品按质量比1∶1相互配伍及4种样品按质量比1∶1∶1∶1进行配伍后测定其黄酮含量。同时，根据各样品中测得的黄酮含量，理论推算出配伍后黄酮含量，与实际测量值进行比较分析。由图3可知，金银花与葛根配伍后黄酮含量最高，为6.85%，菊苣与蒲公英配伍后黄酮含量最低，为0.87%，4种样品配伍后黄酮含量为3.33%。

图1 测定黄酮含量标准曲线

图2 样品配伍前各自黄酮含量

图3 样品配伍后黄酮含量实测值与理论值比较

通过对配伍后黄酮实测值与理论值比较分析，除了葛根与菊苣、葛根与蒲公英配伍后黄酮实测值略高于理论值外，其他配伍组合黄酮实测值均都低于理论值，其中，金银花与蒲公英黄酮实测值与理论值相差最为悬殊，相差5个百分点。葛根与菊苣、葛根与蒲公英配伍后黄酮含量略有上升，有可能是葛根中含有某些成分可提高黄酮的溶出度或它是黄酮化合物生物合成的影响因子，进而增加了黄酮类化合物的生物合成。下一步应从分子生物学角度进一步研究葛根影响配伍后样品中黄酮化合物含量变化的作用机制，进而增加配伍后样品中的黄酮含量。

其他配伍组合黄酮实测值均都低于理论值，即配伍后黄酮含量下降，说明配伍后黄酮溶出量减少，分析原因可能是样品中的某些成分易与黄酮成分发生反应或存在某种可降低黄酮含量的成分，从而造成配伍后含量降低。黄酮类化合物分子中多具有酚羟基，易发生络合反应和氧化反应，如金银花中含大量木犀草素，它是一种典型的含4个酚羟基的黄酮化合物，在提取液中更容易受金属离子干扰而发生络合反应，推测这是造成样品配伍后黄酮含量实测值显著低于理论值的原因之一。

4 结论

本文采用亚硝酸钠—硝酸铝比色法测定黄酮含量，回收率实验和精密度实验表明，2种方法均排除了干扰因素，精密度良好，说明方法简便、可靠、易行。现代药理研究表明，黄酮类化合物在抗老化、调血脂、降血压、抗心绞痛等方面疗效显著，对于开发菊苣、葛根、金银花、蒲公英以黄酮化合物为主要指标的产品，应根据上述配伍规律合理进行配伍，尽量提高配伍后黄酮含量。本实验仅研究了不同样品配伍后合在一起提取后的黄酮变化，没有研究各样品先进行提取，然后将提取液进行配伍后研究黄酮的变化。样品配伍后化学成分含量不是简单的相加减，更需要注重对其不同化学成分组合、量化和相互作用的研究，尤其应注重对综合效应的有效物质组群研究[6]。下一步需要研究和完善不同样品配伍后其他化学成分的变化，按影响因素、因素水平设计正交试验，确定4种样品的最佳配伍工艺，为开发上述样品的保健品提供更为准确的技术参数。◇