HPV16/18型病毒检测与宫颈癌的相关性研究

潘智茵

【摘要】 目的：探究HPV16/18型病毒感染与宫颈癌的相关性，分析其临床应用价值。方法：选取2014年1月-2017年1月本院收治的宫颈癌患者90例为观察组，同期来院体检健康者90例为对照组。所有研究对象均采用罗氏Cobas HPV与实时荧光定量PCR检测法测定HPV16/18DNA病毒载量，比较两组的阳性率。结果：观察组HPV16/18NDA载量水平及阳性率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；ROC曲线绘制及Logistics多因素回归分析结果显示，HPV16/18DNA载量水平≥（5.56±1.04）、（5.55±0.06）copies/mL为宫颈鳞癌的独立风险因素（HR=1.004、0.783，P=0.045、0.031）。结论：宫颈鳞癌的发病与HPV16/18型病毒的感染具有一定相关性，建议临床完善高危人群的宫颈癌筛查工作，实现早发现、早诊治的目的，同时提示在宫颈癌癌前病变的过程中注意HPV感染。

【关键词】 宫颈癌； 人乳头状病毒； HPV16/18

【Abstract】 Objective：To explore the correlation between HPV16/18 virus infection and cervical cancer and analyze its clinical application value.Method：A total of 90 patients with cervical cancer admitted to our hospital from January 2014 to January 2017 were selected as observation group，and 90 healthy people during the same period were selected as control group.Roche Cobas HPV and real-time fluorescent quantitative PCR assay were used to determine the HPV16/18DNA load of two groups，and the positive rates of two groups were compared.Result：The levels of HPV16/18NDA load and positive rate in observation group were higher than those of control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.ROC curve plotting and Logistics multivariate regression analysis showed that the levels of HPV16/18DNA load≥（5.56±1.04） and（5.55±0.06） copies/mL as an independent risk factor for cervical squamous cell carcinoma（HR=1.004，0.783，P=0.045，0.031）.Conclusion：The incidence of cervical squamous cell carcinoma is associated with the HPV16/18 virus infection.It is recommended to improve the screening of cervical cancer in high-risk groups to achieve the purpose of early detection and early diagnosis and treatment，and should pay attention to HPV infection in the process of cervical cancer precancerous lesions.

【Key words】 Cervical cancer； Human papillary virus； HPV16/18

First-authors address：Foshan First Peoples Hospital，Foshan 528000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.18.013

宮颈癌是目前发病率仅次于乳腺癌的妇产科常见恶性肿瘤之一，研究数据表明，全球每年有50万左右新发宫颈癌的病例，我国大约有13万[1]。由于我国大多数人对宫颈癌知识的知晓率低、临床缺乏常规检测手段等，患者宫颈癌确诊时一般已处于晚期，手术治疗已无法解决问题，严重降低患者生活质量，危及患者生命。近年来国内外学者发现，人乳头状病毒（HPV）感染与宫颈癌的发病关系密切[2-4]。作为一种球形DNA病毒，HPV不仅能使皮肤、黏膜上皮组织受到感染，还能诱发细胞产生增殖失控的情况。在目前发现的130多种HPV亚型中，高危型HPV16/18病毒感染会在很大程度上增加宫颈癌发病的危险性[5]。本研究以本院收治的90例宫颈鳞癌患者为研究对象，对其宫颈分泌物中的HPV16/18DNA进行分析，探究两者与宫颈癌的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年1月-2017年1月本院收治的宫颈癌患者90例为观察组，同期来院体检健康者90例为对照组。纳入标准：参照NCCN公布的《宫颈癌临床实践指南》中宫颈癌诊断标准[6]，观察组均经病理证实为宫颈癌，同时病理类型为鳞癌；观察组妇科阴道镜检查提示有宫颈肥大、宫颈糜烂；观察组有白带异常、不规则出血、排液等临床表现；研究对象均处于非孕期及经期，在取材的前3 d内无阴道冲洗、性生活、用药史。排除标准：研究近期曾行放疗、化疗治疗，近期有使用激素类药物治疗史的患者。研究小组指定专人向患者及家属解释研究内容，患者自愿参与并签署同意书，且研究内容与伦理学标准相符，本院伦理委员会审核并批准本研究实施。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 研究统一采用由哈尔滨凯普德生物科技有限公司提供的Cobas检测仪器设备及试剂盒。

1.2.2 标本采集与检测方法 所有研究对象均采用罗氏Cobas HPV检测法与实时荧光定量PCR检测法测定HPV16/18DNA病毒载量。标本采集方法为：采用毛刷插入受检者宫颈管内，围绕子宫颈旋转2周，刮出宫颈口和宫颈管内的上皮细胞。将采集到的所有受试对象的Preserv Cyt或Sure Path标本置于备好的专用试管中，扫描条码并建立相应工作命令文件。操作步骤根据仪器提示进行，按要求将耗材与试剂放置于Cobas x 480提取仪器中，试剂主要有18 mL洗脱液、200 mL洗液、磁珠13.5 mL、9 mL十二烷基硫酸鈉、1.0 mL HPV Mg/Mn、两管1.2 mL的蛋白酶K、两管1.0 mL的HPV MMX、0.5 mL HPV阴性对照、0.5 mL HPV阳性对照。在试剂与耗材准备完毕后即可开始DNA的提取。将提取完成且已自动添加样品和试剂的PCR板转移至Cobas z 480全自动分析仪中开始PCR的扩增处理与荧光检测。HPV16和HPV18的检测极限分别为300、600 copies/mL。统计两组HPV16/18DNA载量及阳性率，分析HPV16/18DNA载量与宫颈癌的相关性。

1.3 统计学处理 使用SPSS 20.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验或Fishers检验；分析ROC曲线确定宫颈癌的HPV16/18DNA载量阈值；采用Logistic回归分析宫颈癌的独立风险因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较 观察组年龄25～66岁，平均（37.3±3.9）岁；体质指数（BMI）（21.71±1.95）kg/m2。对照组年龄24～67岁，平均（37.2±4.0）岁；BMI（21.67±1.96）kg/m2。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组HPV16/18DNA载量及阳性率比较 观察组HPV16/18NDA载量水平及总阳性率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 HPV16/18与宫颈癌的Logistics回归分析HPV16/18DNA载量于ROC曲线下面积分别为0.606（P=0.030）和0.743（P=0.052），阈值分别为（5.56±1.04）、（5.55±0.06）copies/mL；Logistic多因素回归分析表明，HPV16/18DNA载量水平分别≥（5.56±1.04）、（5.55±0.06）copies/mL为宫颈鳞癌的独立风险因素（P<0.05）。见表2。

3 讨论

流行病学调查结果显示，宫颈癌是除了乳腺癌以外发病率最高的女性恶性肿瘤[7-17]。宫颈发生病变时，患者会出现阴道流血、流液等特征，这些早期症状常被忽视，通常导致患者错过手术治疗的机会，晚期恶性病变转移，严重影响其生存质量。近年来，宫颈癌的发病人数逐年增多，同时其发病表现出年轻化的趋势，宫颈癌已被视为威胁全球女性健康的一个公共卫生问题，在全球宫颈癌的发病病例数中发展中国家病例数占比高达80%，我国由于人口基数大，每年新发病例占全球的28%，这对我国女性的生命健康造成严重威胁[8-10]。虽然宫颈癌早期患者无明显的症状体征，但病情的发展是一个渐进的过程，因此如果能在癌前病变的早期即进行常规筛查、给予临床诊断，进而根据病变类型给予明确治疗干预，有利于提高治愈率。

曾有学者通过跟踪随访发现，宫颈癌患者如果早期识别病变情况并给予早期干预治疗，其五年生存率可达90%[11，18]。周斌等[12]研究提出，在宫颈癌的发生与病情进展过程中HPV的作用不可忽视。朱佳英等[13]通过研究不同HPV的亚型与宫颈病变的相关性，发现在宫颈病变过程中低危型与高危型HPV均有参与，此外，当疾病向恶性程度不断发展时高危型HPV的占比随之不断升高，其中以HPV16/18型为甚[14]。HPVDNA的整合功能是HPV侵入机体发挥致癌作用的重要机制，而高危HPV16/18亚型均为整合形式。两种高危亚型中起到致癌效果的主要基因为E2、E6、E7，其中E2基因蛋白能够通过影响病毒DNA的复制过程与mRNA的转录作用而致癌，除此之外，E6、E7的转化功能受E2基因蛋白的控制。E6、E7通过降低p53抑癌基因、细胞直接转化、宿主细胞DNA感染等作用，影响细胞周期调控蛋白与致癌基因的作用环节，干扰正常的细胞周期，进而使细胞正常的生长、繁殖失控，最终导致癌变[15，19-20]。本研究以90例宫颈鳞癌患者及90例同期来院体检的健康者为研究对象，通过提取分析其宫颈分泌物的DNA探究宫颈癌与HPV16/18亚型的相关性。结果显示，观察组HPV16/18NDA载量水平及阳性率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；ROC曲线绘制及Logistic多因素回归分析结果显示，HPV16/18DNA载量水平≥（5.56±1.04）、（5.55±0.06）copies/mL为宫颈鳞癌的独立风险因素（P<0.05）。这一结果与文献[16，21]的研究结果一致，宫颈上皮内瘤变在持续HPV16/18型病毒的持续感染下易转化为宫颈癌，此外，HPV16/18高病毒载量在宫颈癌的发病中作用重要。

综上所述，HPV16/18型病毒感染与宫颈鳞癌的发病密切相关，提示临床落实高危人群的筛查工作，通过早发现、早治疗降低宫颈癌的发病率。本研究由于样本数量有限，同时在选取研究对象时可能受选择偏倚的影响，HPV16/18型病毒与宫颈癌的相关性仍需进一步探究。

参考文献

[1]应倩，夏庆民，郑荣寿，等.中国2009年宫颈癌发病与死亡分析[J].中国肿瘤，2013，22（8）：612-616.

[2] Sabeena S，Bhat P V，Kamath V，et al.Community-Based Prevalence of Genital Human Papilloma Virus（HPV） Infection：a Systematic Review and Meta-Analysis[J].Asian Pac J Cancer Prev，2017，18（1）：145-154.

[3]郑建军，胡志芳.HPV16/18型病毒检测在宫颈癌筛查中的价值[J].中国妇幼保健，2017，32（16）：3725-3727.

[4]陈园园，王英红.人乳头瘤病毒亚型与宫颈癌及癌前病变发生及预后的相关性研究[J].中国妇幼保健，2014，29（9）：1336-1341.

[5]陈姗，狄娜，秦君璞，等.宫颈癌组织APOBEC3A蛋白的表达与高危型HPV感染的相关性研究[J].中国病理生理杂志，2013，29（5）：845-849.

[6]周晖，刘昀昀，林仲秋.《2017NCCN宫颈癌临床实践指南》解读[J].中国实用妇科与产科杂志，2017，30（1）：505-507.

[7]劉艳红.子宫颈癌患者人类乳头状瘤病毒类型分布情况分析[J].肿瘤研究与临床，2012，24（8）：561-562.

[8]邹琳，兰建云，耿建祥，等.47例宫颈腺癌中人乳头状瘤病毒感染基因分型的研究[J].国际检验医学杂志，2013，34（4）：393-394.

[9]肖正华，张晓静，林英，等.高危型人乳头状瘤病毒分型检测在宫颈癌及癌前病变中的价值研究[J].中国性科学，2014，23（2）：24-26.

[10]李艳芳，王运贤，黄雪梅，等.宫颈癌患者人乳头瘤病毒与巨细胞病毒和单纯疱疹病毒Ⅱ型感染的相关性研究[J].中国医院感染学杂志，2017，27（16）：3757-3760.

[11]许剑利，徐克惠.高危型HPV检测及TCT检查在宫颈癌筛查中的应用分析[J].实用妇产科杂志，2014，30（12）：946-949.

[12]周斌，左新华，傅新文.高危型人乳头状瘤病毒16，18型DNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值[J].检验医学，2012，27（5）：393-395.

[13]朱佳英，朱郑霞，张超莉.人乳头瘤病毒基因分型与宫颈癌的相关性研究[J].实用心脑肺血管病杂志，2012，20（11）：1833-1834.

[14] Modibbo F，Iregbu K C，Okuma J，et al.Randomized trial evaluating self-sampling for HPV DNA based tests for cervical cancer screening in Nigeria[J].Infect Agent Cancer，2017，12（1）：11.

[15]连兴刚.HPV E6蛋白与宫颈HPV持续感染及宫颈癌发病的相关性研究[J].中国妇幼保健，2014，29（14）：2237-2240.

[16]白婷.宫颈癌患者血清中HPV检测的结果分析[J].中国妇幼保健，2013，28（18）：2898-2899.

[17]陈鑫苹，符生苗，梁才桂.HPV16/18型病毒感染与宫颈癌的关系研究[J].中国热带医学，2010，10（11）：1389-1390.

[17]杜蓉，陈志芳，丁岩.高危型人乳头瘤病毒检测在宫颈未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞中的价值[J].实用妇产科杂志，2011，27（8）：603-606.

[19]乌兰娜，李瑞珍，刘志红，等.LCT、HPV检测及宫颈多点小活检在宫颈癌筛查的应用[J].罕少疾病杂志，2011，18（3）：16-18，38.

[20]花敏慧，沈爱国，倪惠华，等.联合应用DAPKⅠ、RARβ甲基化和高危型HPV检测筛查宫颈癌及癌前病变的研究[J].现代妇产科进展，2011，20（7）：551-554.

[21]韩英.荧光原位杂交技术检测hTERC基因扩增在新疆部分地区宫颈癌早期筛查中的临床意义研究[D].乌鲁木齐：新疆医科大学，2010.