HER-2/CEP17信号比与乳腺癌新辅助化疗后病理完全缓解的相关性研究

新辅助化疗（neoadjuvant chemotherapy，NAC）已成为非早期乳腺癌的重要治疗方法［1］。研究显示，乳腺癌新辅助化疗获得病理完全缓解（pathologic complete response，pCR）对于化疗药物敏感性及患者预后具有重要的提示作用［2］。人表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）基因定位于人染色体17q21，在正常乳腺组织中通常为阴性或微量表达，但在部分乳腺癌组织中却过量表达，与不良预后相关。研究显示，HER-2基因拷贝数的增加主要通过染色体基因片段优势复制和染色体非整体数目变化［3］。17号染色体多体性为17号染色体着丝粒（chromosome 17 centromere，CEP17）探针信号数目增加，是乳腺癌中常见遗传变异［4］，影响HER-2基因扩增的判读，导致HER-2基因扩增假阳性的增加［5］。既往研究显示，乳腺癌新辅助化疗疗效中HER-2/CEP17信号比对于HER-2基因扩增可能具有提示作用［6-7］，但其与新辅助化疗疗效相关性尚无定论。本研究将HER-2/CEP17信号比作为分子生物学指标，评价其与乳腺癌新辅助化疗后病理完全缓解的相关性和预测作用。

1 材料与方法

1.1 病例资料

回顾性分析中山大学孙逸仙纪念医院2013年1月至2017年12月635例浸润性乳腺癌新辅助化疗患者的临床资料，均为女性。根据患者新辅助化疗后手术病理标本，分为病理完全缓解（pCR）组117例和非pCR组518例。入组标准：初发诊断临床分期为ⅡB～Ⅲ期浸润性乳腺癌，年龄18～69岁，就诊前未行化疗、放疗及内分泌治疗等。排除标准：发生远处转移者，合并严重全身疾病或其他部位恶性肿瘤者，双侧乳腺癌、妊娠或哺乳期乳腺癌及HER-2基因的免疫组织化学检测结果与FISH检测结果不相符者。

1.2 方法

化疗方案剂量及疗程均依据NCCN乳腺癌临床实践指南（2012～2017年）。化疗后乳腺原发病灶临床缓解的评价标准，依据实体肿瘤疗效评估标准1.1版（RECIST 1.1）［8］。pCR定义为原发病灶及区域淋巴结经术后病理检查均无浸润性癌细胞残留，但原发病灶可残留原位癌细胞。免疫组织化学法检测结果：ER、PR阳性细胞表达≥1%为阳性，阳性细胞表达＜1%为阴性；Ki-67阳性细胞≥20%为高表达，阳性细胞＜20%为低表达；TOPOⅡα和P53阳性细胞表达≥10%为阳性，阳性细胞表达＜10%为阴性；HER-2染色0/+为阴性，++为不确定，+++为阳性。FISH双探针法采用PathVysionTM HER-2探针检测试剂盒（美国雅培公司）检测，其结果判定依据ASCO/CAP乳腺癌HER-2检测指南（2013年）［9］，对40个细胞核内的HER-2信号（红色）和CEP17信号（绿色）的总数分别计数，再计算HER-2/CEP17信号比，判定FISH检测结果，对于不确定者需重新计数。依据ASCO/CAP乳腺癌HER-2检测指南（2013年）和既往研究［6］结果，对HER-2/CEP17信号比与pCR率相关性进行进一步亚组分析。

1.3 统计学分析

采用SPSS 24.0软件进行统计学分析。计数资料采用表示，采用t检验；计量资料采用χ2检验或Fisher确切概率法。通过单因素和多因素Logistic回归模型筛选出pCR的独立预测因子，采用Spearman秩相关检验分析不同HER-2/CEP17信号比与pCR率相关性。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 临床病理学特征

635例行新辅助化疗前浸润性乳腺癌患者中，临床分期ⅡB期为374例、ⅢA期为183例、ⅢB期为53例、ⅢC期为25例。经新辅助化疗后pCR率为18.4%（117/635），而未获得 pCR 率为 81.6%（518/635）。pCR组的平均年龄为（46.68±9.50）岁，非pCR组为（47.47±10.07）岁，两组比较差异无统计学意义（P=0.438）。pCR组的体质量指数为（23.04±2.97）kg/m2，非pCR组为（23.40±3.51）kg/m2，两组比较差异无统计学意义（P=0.305）。依据HER-2基因拷贝数及HER-2/CEP17信号比判定FISH检测结果，HER-2基因拷贝数≥6为231例，拷贝数＜6为404例；HER-2/CEP17信号比≥2为241例，信号比＜2为394例（图1）。

图1 HER-2双探针FISH检测浸润性乳腺癌患者结果

2.2 新辅助化疗获得病理完全缓解的预测因子

单因素分析结果显示，T分期、临床分期、ER、PR、HER-2、Ki-67表达、分子分型、靶向治疗、HER-2基因拷贝数及HER-2/CEP17信号比与获得pCR显著相关（P＜0.1，表1）。多因素Logistic回归分析结果显示，T分期（OR为0.500，95%CI为0.350～0.712，P＜0.001），Ki-67表达（OR为3.461，95%CI为1.891～6.333，P＜0.001），分子分型（OR为1.458，95%CI为1.188～1.791，P＜0.001，），HER-2基因拷贝数（OR为6.173，95%CI为2.110～17.857，P=0.001）及HER-2/CEP17信 号 比（OR 为 9.076，95%CI为 3.142～26.215，P＜0.001）为新辅助化疗后pCR的独立预测因子（表2）。

2.3 新辅助化疗联合与未联合曲妥珠单抗靶向治疗后病理完全缓解的预测因子比较

新辅助化疗联合曲妥珠单抗靶向治疗患者共134例，其中获得pCR者为34例、未获得pCR者为100例。多因素Logistic回归分析结果显示，临床分期（OR为0.433，95%CI为 0.186～1.009，P=0.052）和 HER-2/CEP17信号比（OR为4.925，95%CI为1.595～15.205，P=0.006）为新辅助化疗联合靶向治疗后pCR的独立预测因子（表3）。未联合曲妥珠单抗靶向治疗患者共501例，其中获得pCR者为83例、未获得pCR者为418例。多因素Logistic回归分析结果显示，T分期（OR为0.338，95%CI为0.223～0.675，P=0.001），Ki-67表达（OR为3.257，95%CI为1.587～6.686，P=0.001），TOPOⅡα表达（OR为1.509，95%CI为1.055～2.159，P=0.024），分子分型（OR为1.444，95%CI为1.169～1.784，P=0.001），HER-2/CEP17信号比（OR为1.718，95%CI为1.005～2.939，P=0.048）为新辅助化疗未联合靶向治疗后pCR的独立预测因子（表4）。

表1 635例乳腺癌患者新辅助化疗获得病理完全缓解预测因子的单因素分析

表1 635例乳腺癌患者新辅助化疗后病理完全缓解预测因子的单因素分析（续表1）

表2 乳腺癌患者新辅助化疗后病理完全缓解预测因子的多因素Logistic回归分析

表3 新辅助化疗联合曲妥珠单抗靶向治疗后病理完全缓解预测因子的多因素Logistic回归分析

表4 新辅助化疗未联合曲妥珠单抗靶向治疗后病理完全缓解预测因子的多因素Logistic回归分析

2.4 HER-2/CEP17信号比与新辅助化疗后病理完全缓解的相关性

HER-2/CEP17信号比＜2患者获得pCR率为13.2%（52/394），HER-2/CEP17信号比为2～6患者获得pCR率为22.0%（18/82），HER-2/CEP17信号比＞6患者获得pCR率29.6%（47/159），三者比较差异具有统计学意义（P＜0.001）。Spearman秩相关性分析显示，新辅助化疗后pCR率与HER-2/CEP17信号比具有相关性（r=0.235，P＜0.001）。

3 讨论

既往研究显示，临床病理指标，肿瘤生物学指标及循环生物学指标都可能作为乳腺癌新辅助化疗疗效的预测指标［10-11］。然而这些预测指标对于乳腺癌新辅助化疗疗效预测较为局限。因此寻找更多有效的分子生物学指标对于制定个体化治疗方案和提供精准治疗具有重要的临床意义。本研究表明，乳腺癌的新辅助化疗疗效与肿瘤大小，Ki-67及分子分型相关，这与之前的学者研究结果基本相同［12-14］。本研究显示，乳腺癌患者的新辅助化疗、新辅助化疗联合靶向治疗与未联合靶向治疗中HER-2/CEP17信号比均为病理完全缓解的独立预测因子，提示高HER-2/CEP17信号比的乳腺癌不仅对于化疗联合靶向治疗敏感，同时对于单纯化疗也较敏感，并且pCR率与HER-2/CEP17信号比具有相关性。既往研究也证实，HER-2/CEP17信号比为新辅助化疗联合曲妥珠单抗靶向治疗获得pCR的预测因子［6-7］。一项预测模型显示，HER-2/CEP17信号比为HER-2阳性乳腺癌新辅助化疗获得pCR的预测指标［15］。尽管NCCN乳腺癌临床实践指南（2017年）推荐，对于HER-2阳性乳腺癌应行新辅助化疗联合靶向治疗。但在我国因经济水平等多方面因素影响，部分HER-2阳性乳腺癌患者并未选择联合曲妥珠单抗的新辅助治疗方案。本研究显示，高HER-2/CEP17信号比对于新辅助化疗未联合靶向治疗的患者也具有良好的敏感性和预测效果。因此FISH双探针检测HER-2/CEP17信号比作为预测乳腺癌新辅助化疗的预测因子具有较好的准确性和较大的价值。

综上所述，乳腺癌新辅助化疗疗效的预测是一个复杂并且涉及多种因素的过程。本研究为单中心回顾性的病例对照研究，存在一定的局限性，需要大样本多中心前瞻性研究进一步验证，并且因纳入标本的组织学分级、TOPOⅡα及P53表达等因素不完全或部分缺失，可能在一定程度上影响结果的准确性。HER-2/CEP17信号比与乳腺癌新辅助化疗后病理完全缓解具有相关性，是其获得病理完全缓解的独立预测因子。