于 静,姜 波,潘巧灵,杨鑫淼,陆榆先,赵晓倩,尹新颖
(大连民族大学生命科学学院,辽宁大连 116600)
荷叶,是莲科莲属多年生草本挺水植物莲荷的叶,研究表明,其具有降脂[1-3]、抗氧化抗衰老[2-4]、抑菌等多方面药理活性,荷叶碱作为荷叶具有降脂减肥功效的主要生物活性物质之一,是一种极具开发前景的减肥资源。地骨皮,别名枸杞皮,是枸杞的根皮,主要分布于我国东北、河北、山西等地区,可入药食用,在降血脂、降血压、降血糖、解热抗菌等方面有显著功效[5-7]。刺嫩芽,属多年生落叶小乔木,作为食药兼用类食物,其营养成分丰富,富含多种矿物质,具有一定的药用价值,其在降血糖、抗衰老、抑制肿瘤等方面有显著功效[8,9]。葛根,性凉,味甘、辛,广泛分布于我国各地,药理研究表明,其在改善血脂和血糖代谢[10,11]、抗氧化损伤[11,12]、抗细胞凋亡等方面表现出药理活性,葛根素对高血压、高血脂、高血糖和心脑血管疾病有一定疗效。荔枝核,为无患子科植物荔枝的干燥成熟种子,在降糖调血脂[13,14]、抗肝损伤及抑制肿瘤[14]等方面有显著功效。
荷叶、地骨皮、刺嫩芽、葛根、荔枝核5种中药材均有降三高(降血糖、降血脂、降血压)的共同药理作用。通过对这5种中药材中的14种金属元素含量进行测定,并对其药物活性及关联性进行研究,对降三高药物的药理作用机理以及测定的5种药材的进一步开发与利用等方面提供有效帮助。
原子吸收分光光度计:Z-2000型,日本Hitachi公司,配钾、镁、钙、钠、铁、铜、锰、锶、锌、钴、镍、铬、镉和铅空心阴极管;微波消解装置:ETHOS 900型,意大利Milestone公司;硝酸:分析纯,天津市科密欧化学试剂开发中心;过氧化氢:分析纯,天津市天河化学试剂厂;钾、镁、钙、钠、铁、铜、锰、锶、锌、钴、镍、铬、镉和铅标准贮备溶液:质量浓度为1000mg/L,由国家标准物质研究中心提供,使用时稀释至所需浓度。
1.2.1 微波消解仪条件。见表1。
表1 微波消解仪消解条件
1.2.2 原子吸收分光光度计测定条件。原子吸收分光光度计,采用空气-乙炔和外标法测定。仪器工作条件见表2。
表2 原子吸收分光光度计条件
荷叶、地骨皮、葛根、荔枝核、刺嫩芽购于大连市药店,用70℃烘箱干燥,粉碎机粉碎过筛(80目)。准确称取0.2000g已粉碎的干燥样品于消解罐中,加入5mL浓硝酸及1mL双氧水,按表1微波消解仪消解条件进行微波消解,微波消解后的溶液用去离子水定容至 25mL,混匀,待测[15]。
按照1.2.1微波消解条件处理荷叶、地骨皮、刺嫩芽、葛根、荔枝核5种中药药品,在1.2.2原子吸收分光光度计测定条件下,采用火焰原子吸收分光光度计分别测定5种中药药品中钾、镁、钙、钠、铁、铜、锰、锶、锌、钴、镍、铬、镉和铅14种标准溶液吸光度值。并分别以14种金属元素溶液的质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,计算各元素的标准曲线方程,然后根据线性方程计算中药样品中各金属元素的含量。
采用浓硝酸和过氧化氢作为微波消解试剂。浓硝酸具有强酸性和氧化性,在AAS分析过程中干扰小,是理想的微波消解试剂[15]。中药样品成分一般比较复杂,采用同时加入过氧化氢的办法较比于单纯使用硝酸,在同等消解条件下使得中药样品消解完全,得到了清澈的样品溶液,取得了较好的消解效果。
按表3配制系列标准溶液,在1.4的试验方法下依次测定钾、镁、钙、钠、铁、铜、锰、锶、锌、钴、镍、铬、镉和铅系列标准溶液的吸光度值,并以各元素的质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线,计算检出限[16]。
表3 标准溶液浓度
14种元素的标准溶液浓度、线性方程、线性相关系数和检出限见表4。由表4可知,14种金属元素标准曲线线性关系良好,相关系数均大于0.999,检出限为0.0015~0.0132。
表4 标准溶液和标准曲线线性方程
用荷叶样品进行加标回收试验,在样品溶液中分别加入不同体积的低浓度标准样品,用于测定11种金属元素的回收率,加标回收及不同元素10次测定结果的相对标准偏差的试验结果见表5。由表5可见,11种元素10次平行测定结果的相对标准偏差为0.76%~4.82%,说明方法的精密度好。加标回收率在95.5%~104.4%之间,说明方法可靠性高。
表5 荷叶回收率及RSD测定结果
用火焰原子吸收光谱法对荷叶、地骨皮、刺嫩芽、葛根、荔枝核5种中药材中钾、镁、钙、钠、铁、铜、锰、锶、锌、钴、镍、铬、镉和铅14种金属含量测定结果见表6。
从表6的实验结果可知,5种中药材中均有较高含量的钙、镁、钾元素,这些元素对降三高都有一定的益处。钙在生物体中是一种重要的元素,研究表明,人体缺钙会导致血压升高,补充钙可使某些血压正常者和高血压受试者血压短期轻微下降[17];镁是人体细胞内的主要阳离子,其含量在人体中仅次于钙、钠、钾,科研结果表示人体缺少镁会导致脑血管疾病、高血压病、糖尿病等多种疾病[18];钾可以调节细胞内适宜的渗透压和体液的酸碱平衡,参与细胞内糖和蛋白质的代谢,饮食中含有钾元素对降血压有作用。在5种中药材中不含具有镍、铅、镉生物毒性元素,因此其入药具有安全性食用性。
表6 原子吸收法测定中药样品中的金属元素含量/(μg/g)
微波消解法消解样品,消解速度快、试剂用量少、避免试剂污染,是一种很好的样品处理方法。浓硝酸和过氧化氢作为微波消解试剂,在原子吸收光谱法分析过程中干扰小,是理想的微波消解试剂。采用火焰原子吸收光谱法测定荷叶、地骨皮、刺嫩芽、葛根、荔枝核5种中药材中14种金属元素含量的方法灵敏度高、简单、快速、准确、可靠,具有较高的实用价值。