杀菌剂对火龙果溃疡病的室内毒力和田间防效

贤小勇 林珊宇 朱桂宁 韦小妹 覃武 梁桂东 钟有超

摘要：【目的】明确吡唑醚菌酯等杀菌剂对火龙果溃疡病的室内抑菌活性和田间防效，为火龙果溃疡病综合防控提供科学依据。【方法】采用菌丝生长速率法测定吡唑醚菌酯等5种杀菌剂对火龙果溃疡病菌菌丝生长的室内抑菌活性；利用田间植株喷雾法评价250 g/L吡唑醚菌酯乳油125.0、166.7和250.0 mg/kg，250 g/L嘧菌酯悬浮剂250.0 mg/kg，430 g/L戊唑醇悬浮剂215.0 mg/kg，10%己唑醇悬浮剂60.0 mg/kg和400 g/L氟硅唑乳油133.3 mg/kg对火龙果溃疡病的田间防治效果。【结果】室内毒力测定结果表明，己唑醇、戊唑醇、氟硅唑和吡唑醚菌酯对火龙果溃疡病菌菌丝生长均有较好的抑制作用，抑制中浓度（EC50）分别为0.0749、0.2325、0.5277和1.8572 ?g/mL，而嘧菌酯的抑制作用稍弱，EC50为18.5655 ?g/mL。田间小区防治试验结果证明，250 g/L吡唑醚菌酯乳油对火龙果溃疡病有很好的防效，施药3次后，250 g/L吡唑醚菌酯乳油125.0、166.7和250.0 mg/kg对茎溃疡病的防效分别在60.0%、70.0%和80.0%以上，对果实溃疡病的防效分别在65.0%、75.0%和85.0%以上。250 g/L嘧菌酯悬浮剂250.0 mg/kg和430 g/L戊唑醇悬浮剂215.0 mg/kg对火龙果溃疡病也有较好的防效，分别与250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7和125.0 mg/kg的防效相当。10%己唑醇悬浮剂60.0 mg/kg和400 g/L氟硅唑乳油133.3 mg/kg的田间防效较差。【结论】吡唑醚菌酯、嘧菌酯和戊唑醇对火龙果溃疡病均具有良好的防效，可作为防治火龙果溃疡病的药剂在生产上推广应用。

关键词： 杀菌剂；火龙果溃疡病；抑菌活性；田间防效

中图分类号： S482.2 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2018）07-1338-08

0 引言

【研究意义】火龙果为仙人掌科量天尺属（Hylocereus）或蛇鞭柱属（Selenicereus）的果用栽培品种，原产墨西哥、尼加拉瓜、哥斯达黎布和古巴等中美洲沙漠地区，现人工栽培遍及美洲的美国、墨西哥和古巴，及亚洲的泰国、马来西亚、越南、中国和以色列等多个国家，是近10年来兴起的一种热带水果。火龙果富含花青素，有很好的保健作用，既可作水果、蔬菜食用，也可作花卉、盆景欣赏，集食用、保健和医药于一体，具有非常高的经济价值（高慧颖等，2012；张荣等，2013）。火龙果栽培品种主要有红皮白肉（H. undatus）、红皮红肉（H. polyrhizus）和黄皮白肉（H. megalanthus、S. megalanthus）3类（高慧颖等，2012；Mohd et al.，2013）。我国大陆地区于20世纪90年代初从台湾省引入火龙果进行试种，目前在广东、广西、海南、福建、贵州和云南等南方省（区）均有规模化种植生产，河北、山东和辽宁等北方地区在大棚内也有种植，其中广西是全国最大的火龙果产区（张荣等，2013；郭成林等，2018；林珊宇等，2018）。随着火龙果种植面积的不断扩大，火龙果病害发生日趋严重，尤其是新暗色柱节孢菌（Neoscytalidium dimi-diatum）引起的潰疡病在火龙果上发生普遍、危害严重，已成为火龙果上的毁灭性病害（陆志翔等，2015；魏雅丽等，2015；王会会等，2016）。2012年广东省清远市火龙果溃疡病的株发病率高达60%，当年8月台风过后，粤西地区火龙果溃疡病发生严重，造成红心火龙果几乎绝收（易润华等，2013；张荣等，2013）。广西防城港市高发病区火龙果溃疡病的发病率在50%左右（陆志翔等，2015）。溃疡病菌侵染火龙果植株，在肉质茎和果实上形成病斑，病斑初期为褪绿圆形小斑点，随后病斑从中央开始褐变，后期呈灰褐色，严重时可使得肉质茎腐烂、折断，造成果实腐烂，降低火龙果的品质和产量，对火龙果生产造成了严重影响（易润华等，2013；张荣等，2013；Yi et al.，2015）。因此，筛选防治火龙果溃疡病的高效低毒杀菌剂，开展病害综合防控试验示范，对促进火龙果生产发展具有重要意义。【前人研究进展】2012年台湾首次报道新暗色柱节孢菌引起火龙果茎溃疡病（Chuang et al.，2012），同年广东也报道该病原菌引起的病害，并称其为火龙果褐斑病（Lan et al.，2012），此后，我国多地火龙果种植区均报道发现了火龙果溃疡病，且该病害呈继续蔓延趋势（郑德剑等，2013；魏雅丽等，2015；王会会等，2016）。以色列、马来西亚、美国和泰国等也有新暗色柱节孢菌引起火龙果溃疡病的报道（Ezra et al.，2013；Mohd et al.，2013；Danupat and Kasem，2016；Sanahuja et al.，2016）。尽管关于火龙果溃疡病发生和鉴定的文献较多，但至今为止，对火龙果溃疡病的防治研究报道还极少。魏雅丽等（2015）对火龙果溃疡病菌进行了室内杀菌剂初步筛选试验，结果显示以多菌灵对新暗色柱节孢菌的抑制效果最好，其100和1000倍稀释液的抑菌率均达100%。李界秋等（2016）采用菌丝生长速率法测定了8种杀菌剂对火龙果溃疡病菌的抑制作用，结果表明，苯醚甲环唑等6种杀菌剂能很好地抑制火龙果溃疡病菌菌丝生长；离体喷雾杀菌剂接种溃疡病菌试验结果表明，咪鲜胺0.25 μg/mL、吡唑醚菌酯1.00 μg/mL、苯醚甲环唑0.25 μg/mL和甲基硫菌灵2.50 μg/mL的离体接种防效均在90%以上，苯甲·丙环唑0.25 μg/mL和克菌·戊唑醇0.25 μg/mL的离体防效也在80%以上。王会会等（2016）也采用菌丝生长速率法测定了13种药剂对火龙果溃疡病菌的抑制中浓度（EC50），结果表明，40%氟硅唑乳油、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、50%多菌灵可湿性粉剂和12.5%烯唑醇乳油的抑菌效果最好。【本研究切入点】目前，关于杀菌剂对火龙果溃疡病菌的室内毒力测定研究较少，且尚无杀菌剂田间防治火龙果溃疡病的研究报道。【拟解决的关键问题】测定7种杀菌剂对火龙果溃疡病菌的室内毒力，在此基础上，选择抑菌效果较好的杀菌剂进行火龙果溃疡病田间小区防治试验，筛选在田间小区具有较好防效的杀菌剂进行大面积防治试验示范，为火龙果溃疡病的综合防控提供科学依据。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

1. 1. 1 供试药剂 96%吡唑醚菌酯原药和97.3%戊唑醇原药由陕西韦尔奇作物保护有限公司提供，250 g/L吡唑醚菌酯（Pyraclostrobin）乳油为巴斯夫欧洲公司产品，250 g/L嘧菌酯（Azoxystrobin）悬浮剂为英国先正达有限公司产品，430 g/L戊唑醇（Tebuconazole）悬浮剂为拜耳作物科学（中国）有限公司产品，10%己唑醇（Hexaconazole）悬浮剂为山东省联合农药工业有限公司产品，400 g/L氟硅唑（Flusiazole）乳油为广东茂名绿银农化有限公司产品。

1. 1. 2 供试病菌 供试火龙果溃疡病菌菌株HF06分离纯化自广西防城港市华石镇果园自然发病的火龙果溃疡病植株。HF06菌株经DNA提取、ITS片段PCR扩增、测序和序列比对，鉴定为新暗色柱节孢菌（N. dimidiatum），并经致病性测定后保存备用。

1. 1. 3 供试培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：葡萄糖20 g、马铃薯200 g、琼脂20 g，加去离子水定容至1000 mL后常规灭菌。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 药剂室内毒力测定 采用菌丝生长速率法进行测定。吡唑醚菌酯和戊唑醇用原药进行测定，其余药剂使用农药制剂进行测定，所有药剂均将浓度换算成有效成分含量。96%吡唑醚菌酯原药和97.3%戊唑醇原药先用丙酮溶解，制成400 ?g/mL的母液备用。在预备试验的基础上，用灭菌去离子水分别将各杀菌剂配成系列浓度的母液，将100 mL PDA培养基溶化后冷却至50 ℃左右时，分别加入各药剂的母液1 mL，摇匀后倒入直径为9 cm的灭菌培养皿中，即制成吡唑醚菌酯等不同药剂系列浓度的含药培养基。将HF06菌株在PDA培养基上预先培养至菌落直径约7 cm时，用打孔器（内径5 mm）从菌落边缘打取新鲜的溃疡病菌菌片，将菌片的正面朝下，接种到不同的PDA含药培养基上，置于28 ℃恒温箱内培养，每个药剂浓度处理均重复3次，以不含药剂的PDA培养基作对照。培养5 d后，当空白对照的菌落直径长至7 cm以上时，用垂直十字交叉法测量各处理的菌落直径，计算菌落生长抑制率求，出毒力回归方程、相关系数r和EC50。

抑制率=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-处理菌饼直径）×100

1. 2. 2 田间小区防治试验

1. 2. 2. 1 试验地点及火龙果品种 火龙果溃疡病的田间小区防治试验分别在钦州市久隆镇、玉林市成均乡和南宁市武鸣区里建镇进行。钦州市久隆镇的试验果园为缓坡地，已种植火龙果10多年，整个果园火龙果溃疡病发生严重，供试火龙果品种为种植第2年的桂红龙三号红肉红皮品种。玉林市成均乡的试验果园已种植火龙果5年，试验地为水田改造而来，地势较低，田间沟渠常泡水，火龙果溃疡病发生也非常严重，供试火龙果为种植第5年未知名的红肉红皮品种。南宁市武鸣区里建镇的试验果园是近年来广西火龙果主产地之一，试验地地势平坦，火龙果溃疡病发生也较重，供试火龙果品种为种植第4年的振企三号红肉红皮品种。3个试验果园火龙果均采用水泥柱式架种植模式，行距2.5 m，柱距2.0 m，水泥柱密度约2000柱/ha，两个水泥柱间立4个木柱，每个水泥柱和木柱各种植2株火龙果。按常规方法进行水肥管理。

1. 2. 2. 2 试验设计及施药情况 玉林点试验设：（1）250 g/L吡唑醚菌酯乳油125.0 mg/kg（有效成分，下同），（2）250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7 mg/kg，（3）250 g/L吡唑醚菌酯乳油250.0 mg/kg，（4）250 g/L嘧菌酯悬浮剂250.0 mg/kg，（5）430 g/L戊唑醇悬浮剂215.0 mg/kg，（6）10%己唑醇悬浮剂60.0 mg/kg，（7）400 g/L氟硅唑乳油133.3 mg/kg，（8）清水对照（CK），共8个处理；钦州点和武鸣点试验仅设玉林点的前5个药剂和清水对照共6个处理。每处理重复4次，小区面积30 m2（5柱水泥柱），随机区组排列。采取茎（果实和花）表面喷雾法施药，使用背负式手摇喷雾器进行人工喷雾，喷施药液量以茎（果实和花）表面充分着药而不滴药液为宜。每小区喷施药液5.0 L，折合每公顷用药液量1667.5 L；对照喷施等量清水。火龙果为一年多次采收水果，试验时，玉林和武鸣点第1次施药均选择在刚采收完上一批果实时进行，此时植株上有未成熟的幼果、刚开过花的花蕾和未开花的小花苞，火龙果植株的茎上有溃疡病发生。钦州点尚无果实，第1次施药时火龙果植株的茎上有溃疡病发生。每次施药间隔10 d左右，连续施药3次。玉林点3次施药时间分别为2016年8月7日、8月21日和9月2日，调查时间为9月2日和9月9日；钦州点3次施药时间分别为2016年9月21日、9月28日和10月8日，调查时间为10月8日和10月21日；武鸣点3次施药时间分别为2016年9月30日、10月11日和10月23日，调查时间为10月23日和11月3日。

1. 2. 2. 3 调查方法 于第1次施药前每小区随机标记20条新长出的火龙果无病嫩茎和30个无病小幼果（钦州点尚無果实，只标记嫩茎）。于第2次和第3次施药后10 d左右进行调查，武鸣点在第3次施药后20 d再调查一次。调查发病情况时，用目测法评估标记的茎和果实的发病程度。记录调查的总茎（果实）数、病茎（果实）数及病级，计算供试药剂各浓度处理的平均病指和防效。分级标准参考宋晓兵等（2012）的方法制定。病茎（果）分级标准：0级，无病斑；1级，病斑面积占整个肉质茎（或果实）面积的5%以下；3级，病斑面积占整个肉质茎（或果实）面积的6%～10%；5级，病斑面积占整个肉质茎（或果实）面积的11%～25%；7级，病斑面积占整个肉质茎（或果实）面积的26%～50%；9级，病斑面积占整个肉质茎（或果实）面积的51%以上。

病指=Σ（各级病级代表值×该级病茎或病果数）/（调查的总茎或总果数×9）×100

防效（%）=（清水对照区病指?药剂处理区病指）/清水对照区病指×100

1. 2. 3 田间大面积防治示范试验

1. 2. 3. 1 示范地点及火龙果品种 试验在南宁市武鸣区仙湖镇进行，示范面积0.67 ha，供试火龙果为种植第4年的振企三号红肉红皮品种，火龙果溃疡病逐年加重。示范区火龙果采用水泥柱式架种植模式，行距3.0 m，柱距2.0 m，水泥柱密度约1650柱/ha，每个水泥柱四周各种植1株火龙果。

1. 2. 3. 2 试验设计和施药情况 药剂防治处理区喷施250 g/L吡唑醚菌酯乳油250.0 mg/kg，连喷3次，每次间隔10 d左右，对照区不施任何杀菌剂。采用机器施药，每公顷用药液量1237.5 L。施药时间分别为2017年7月30日、8月9日和8月19日，调查时间为8月29日。

1. 2. 3. 3 调查方法 于第1次施药前分别在示范区和对照区各随机抽取4行，每行随机标记20条新长出的无病嫩茎和30个无病小幼果；调查发病情况时，用目测法评估标记的茎和果实的发病程度。记录调查的总茎（果实）数、病茎（果实）数及病级，计算病指和防效。

1. 3 统计分析

试验所得数据采用DPS 7.05的Duncans新复极差法进行差异显著性分析。

2 结果与分析

2. 1 杀菌劑室内毒力测定结果

5种供试杀菌剂对火龙果溃疡病菌菌丝生长均有较好的抑制效果。3个三唑类杀菌剂对火龙果溃疡病菌菌丝生长的抑制作用明显更好，其中最强的是己唑醇，EC50仅为0.0749 ?g/mL，其次是戊唑醇（EC50为0.2325 ?g/mL）和氟硅唑（EC50为0.5277 ?g/mL）；嘧菌酯对火龙果溃疡病菌菌丝生长的抑制作用稍弱，EC50为18.5655 ?g/mL（表1）。

2. 2 田间小区防治试验结果

2. 2. 1 玉林点防治试验结果 第2次施药后12 d调查，对照区火龙果茎和果实溃疡病的病指分别为40.28和42.78，各药剂处理对火龙果茎溃疡病的防效为25.88%～71.45%，对果实溃疡病的防效为29.82%～78.85%；第3次施药后7 d调查，对照区火龙果茎和果实溃疡病病指分别高达62.78和61.39，各药剂处理对火龙果茎溃疡病的防效为31.05%～80.08%，对果实溃疡病的防效为34.81%～85.04%（表2）。试验结果表明，5种药剂7个处理中，以250 g/L吡唑醚菌酯乳油250.0 mg/kg处理的防效最佳，且与其他处理防效达极显著差异水平（P<0.01，下同）；250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7 mg/kg处理的防效与250 g/L嘧菌酯悬浮剂250.0 mg/kg处理的防效相当，差异不显著（P>0.05，下同），二者的防效极显著高于250 g/L吡唑醚菌酯乳油125.0 mg/kg处理和430 g/L戊唑醇悬浮剂215.0 mg/kg处理的防效；250 g/L吡唑醚菌酯乳油125.0 mg/kg处理的防效与430 g/L戊唑醇悬浮剂215.0 mg/kg处理的防效相当，差异不显著；氟硅唑和己唑醇的防效较差。

钦州点的火龙果为种植第2年，尚无果实，植株留有大量的幼嫩肉质茎。第2次施药后10 d调查，对照区火龙果茎溃疡病的病指为39.03，各药剂处理对茎溃疡病的防效为69.02%～87.21%；第3次施药后13 d调查，对照区火龙果茎溃疡病的病指高达54.44，各药剂处理对茎溃疡病的防效为71.94%～90.34%（表3）。钦州点的防效总体高于玉林点，各药剂处理的防效差异与玉林点的试验结果一致。

武鸣点防治试验在秋季进行，溃疡病发生较轻。第2次施药后12 d调查，对照区火龙果茎和果实溃疡病的病指分别为12.78和13.47，各药剂处理对茎溃疡病的防效为71.65%～84.72%，对果实溃疡病的防效为73.38%～90.76%；第3次施药后11 d调查，对照区火龙果茎和果实溃疡病的病指分别高达20.28和20.42，各药剂处理对茎溃疡病的防效为75.25%～88.89%，对果实溃疡病的防效为77.61%～93.21%（表4）。各药剂处理的防效差异与玉林点的试验结果一致。

2. 3 田间大面积防治示范试验结果

于第3次施药后10 d调查火龙果溃疡病田间大面积防治示范情况，结果显示，对照区火龙果茎溃疡病的病指为21.96，示范区病指为4.17，对茎溃疡病的防效为81.07%；对照区火龙果果实溃疡病的病指为26.11，示范区的病指为3.89，对果实溃疡病的防效为85.07%。试验中观察发现，示范区的火龙果长势明显优于对照区，枝条及幼果更青绿油亮，病斑少，成果的商品率显著提高。

3 讨论

吡唑醚菌酯和嘧菌酯属于甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，该类杀菌剂是一种病原菌线粒体呼吸链抑制剂，作用于呼吸链中的细胞色素Cyt bc1复合物，通过阻止呼吸链中的电子传递而抑制病菌的线粒体呼吸，致使线粒体不能产生能量（ATP）提供细胞进行正常的生理代谢活动，从而抑制病原菌生长。嘧菌酯和吡唑醚菌酯均具有保护、治疗和铲除作用，且具有很强的内吸性能，可耐雨水冲刷，对多种植物病原菌有很好的防效（思彬彬和杨卓，2007；贾丽等，2014；凌金锋等，2016；肖敏等，2016）。本研究结果表明，吡唑醚菌酯对火龙果溃疡病菌菌丝生长有很好的抑菌活性，与李界秋等（2016）、王会会等（2016）的研究结果一致。本研究测得吡唑醚菌酯的EC50为1.8572 μg/mL，介于王会会等（2016）测得的1.0291 μg/mL和李界秋等（2016）测得的2.1786 μg/mL之间，证明目前我国海南和广西等火龙果主要种植区的溃疡病菌对吡唑醚菌酯的敏感性较一致。本研究测得嘧菌酯的EC50为18.5655 μg/mL，低于李界秋等（2016）测得的33.8078 μg/mL，可能与不同的病菌菌株对嘧菌酯的敏感性存在明显差异有关。金丽华等（2007）分别测定采自海口、三亚、淮阴和南京的5株辣椒炭疽病菌（Colletotrichum capsici）野生敏感型菌株对嘧菌酯的敏感性，结果显示抑制菌丝生长的EC50为11.466～43.388 μg/mL，敏感性差异明显，当时上述地区从未施用过嘧菌酯等甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂。

李界秋等（2016）进行了溃疡病菌室内离体接种防治试验，结果显示，吡唑醚菌酯1.00 ?g/mL的防效为95.06%，而嘧菌酯50.00 ?g/mL的防效仅为34.21%，该结论为进行田间药效防治试验提供了一定依据。本研究首次开展了杀菌剂对火龙果溃疡病的田间防治试验，结果证明吡唑醚菌酯无论是对火龙果茎溃疡病还是果实溃疡病均有较好的防效，施药3次后，250 g/L吡唑醚菌酯乳油250.0 mg/kg對茎溃疡病和果实溃疡病的防效均在80.00%以上；250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7 mg/kg处理也有较好的防效，在钦州和武鸣点的防效均在80.00%以上，在玉林点的防效也在70.00%以上；250 g/L吡唑醚菌酯乳油125.0 mg/kg处理也有一定的防效。本研究田间试验的250 g/L吡唑醚菌酯乳油剂量为有效成分125.0～250.0 mg/kg，远高于李界秋等（2016）的离体试验剂量1.00 ?g/mL，但防效比其离体试验防效低，可能是因为李界秋等（2016）的试验是在室内进行，而田间杀菌剂防治病害的效果受多种因素影响，田间病原菌含量、品种抗性、气象因子（降雨、湿度、温度等）及杀菌剂本身的特性均会影响田间病害的防治效果。

在甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂发展早期阶段，人们就已发现植物病原菌可通过诱导旁路氧化途径抵抗这类杀菌剂的抑菌作用。旁路氧化酶（Alternative oxidase，AOX）是旁路氧化途径的关键酶，能促使呼吸链绕过甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的作用靶标Cyt bc1进行电子传递和ATP合成（Joseph-Horne and Hollomon，2000；Joseph-Horne et al.，2001；金丽华等，2007），以降低杀菌剂的抑菌活性。但已知的旁路氧化只在病原菌腐生阶段发生作用，在寄生阶段并不影响该类杀菌剂对植物病害的控制（Olaya and K?ller，1999；Ziogas et al.，1999；金丽华等，2007）。本研究室内测得嘧菌酯抑制火龙果溃疡病菌菌丝生长的EC50高达18.5655 ?g/mL，但其在田间对火龙果溃疡病仍具有较好的防效，导致室内毒力测定与田间防效的不同表现可能也与火龙果溃疡病菌的旁路氧化途径有关，但确切原因有待进一步证实。甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对病原菌的作用位点单一，极易产生抗药性，建议生产上与其他作用机理不同的杀菌剂种类进行轮用或混配使用，同时应控制用药次数，以延缓病原菌抗药性的产生。

本研究中钦州和武鸣点的防效明显高于玉林点，可能与玉林点试验果园地势过低、排水不良，造成火龙果植株露多、露重、露时长，导致溃疡病发生严重有关，同时与当地种植管理水平较低，果园未及时清除病枝条和病果，病原菌基数较大有关。此外，试验期间正值台风季节，降雨日多（整个试验期间的降雨日多达20 d）且雨量大，利于病害发生，连续降雨还导致不能按时施药，正是玉林点防效偏低的原因。

甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂除了能直接防治病害外，还能提高产量，延缓植物衰老（思彬彬和杨卓，2007）。本研究发现，经吡唑醚菌酯和嘧菌酯处理的火龙果长势明显更优，枝条及幼果更青绿油亮，说明甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂还能促进火龙果生长，延缓植株衰老。

4 结论

吡唑醚菌酯、嘧菌酯和戊唑醇对火龙果溃疡病菌具有良好的室内毒力，其田间防治试验结果表明，250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7～250.0 mg/kg、250 g/L嘧菌酯悬浮剂250.0 mg/kg对火龙果茎和果实溃疡病均有很好的防治效果，250 g/L吡唑醚菌酯乳油125.0 mg/kg和430 g/L戊唑醇悬浮剂215.0 mg/kg的防效也较好，可作为防治火龙果溃疡病的药剂在生产上推广应用。

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（責任编辑 麻小燕）