归肺经中药提取物对人肺炎支原体的抑菌试验

岑凯莹， 王海颖

肺炎支原体肺炎是由肺炎支原体引起的肺炎，并且可导致血液、神经、消化、泌尿、循环等多系统及皮肤的病变。目前该病以抗生素防治为主，包括大环内酯类、喹诺酮类、四环素类等。随着抗生素的广泛应用，造成了菌群失调、耐药株的产生及药物的不良反应[1]，由于中药的特殊性，细菌较少对中药产生耐药，不良反应也较少发生，故对中药治疗肺炎支原体感染研究尤其重要。

肺炎支原体感染临床多以上呼吸道感染、支气管炎、肺炎等证为表现，证属中医“肺炎喘嗽”“肺风咳嗽”范畴。外感六淫时邪、正气亏虚为本病的两大病因，临床上治疗本病多以清热解毒、燥湿化痰及止咳平喘为主。近些年学者对中药体外抑制肺炎支原体的作用进行了研究，研究显示，金银花、黄芪、苦参、麦冬等均具有抑制肺炎支原体的作用[2]。小复方(鱼腥草、桑白皮各15 g，地龙9 g)是上海中医药大学附属医院姜永红副教授，用于治疗小儿肺炎支原体肺炎常用的方。鱼腥草清热解毒；地龙清热平喘；桑白皮泻肺平喘。实验研究表明，此三味中药均具有抗菌作用。鱼腥草对白色念珠菌、肺炎链球菌等病原微生物具有抑制作用[3-4]。地龙能抑制绿脓杆菌、肺炎双球菌等病原微生物[5]。桑白皮对肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌等具有抗菌效果[6]。三味中药均为临床治疗小儿肺炎支原体肺炎常用的中药，常配伍使用[7]。然而其不同配伍方式以及不同提取物对抑制肺炎支原体的作用差异尚不明确，本实验通过研究鱼腥草、桑白皮、地龙单味中药、药物两两配伍、三味药组成的小复方对肺炎支原体体外的抑菌作用，筛选的抑菌作用最佳的配伍及提取方式，为进一步研究及临床应用提供参考。

1 资料与方法

1.1 材料与试剂 肺炎支原体标准菌株(15531)购自美国ATCC公司。鱼腥草(批号：160625)、地龙(批号：160711)、桑白皮(批号：160308)，饮片均购自上海康桥中药饮片公司。支原体肉汤基础培养基(CM0403B)、支原体添加剂(SR0059C)，购自英国OXOID公司，其他实验材料均购自上海海硕生物科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 药物制备 取鱼腥草、桑白皮单、地龙(5∶3∶3)混合，用打粉机粉碎，采用水煎法提取水提，所得药液用旋转蒸发仪低温浓缩，然后干燥脱水，即得药物水提物。药液过滤后药渣加70%乙醇回流提取两次，每次2 h，合并滤液后用纱布过滤，再用旋转蒸发仪浓缩回收乙醇，所得浓缩液干燥脱水，即得中药醇提物。

1.2.2 肺炎支原体培养 将肺炎支原体接种在支原体肉汤培养基中，置于37 ℃，5%CO2培养箱培养5～6 d，至培养基着色变黄并呈均匀一致的混浊时，收获处于对数期生长的人肺炎支原体菌液，颜色改变单位法(color change unit，CCU)定量。

1.2.3 体外抑菌实验 采用微量肉汤稀释法测定各组中药提取物最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。取96孔板，1～11孔每孔加入1×106CCU/mL支原体菌液100 μL，加药液使得药物浓度依次为62.50、31.25、15.63、7.81、3.91、1.95、0.98、0.49、0.24、0.122、0 g/L，第12孔为空白对照孔，无菌液体石蜡密封，置于37 ℃，5%CO2培养箱培养5～6 d，至加药孔不再发生颜色变化判定一次结果(发生颜色变化前一管的药物稀释浓度为MIC值)。各单味药及不同组合混合液的药敏试验均在相同条件下重复3次，分别测得MIC值已换算成生药浓度，计算平均值。

2 结果

中药提取物对肺炎支原体的MIC值比较见表1。

表1 中药提取物对肺炎支原体的MIC值比较

注：与小复方醇提组比较，aP<0.01。

表1结果表明，小复方醇提物组体外抑菌作用最佳，与鱼腥草水提组和醇提组、桑白皮水提组和醇提组、地龙+桑白皮水提组和醇提组、桑白皮+鱼腥草水提组和醇提组比较差异有统计学意义(P<0.01)。

3 讨论

本研究发现各组中药提取物对肺炎支原体均有一定的抑制作用。且小复方组抑菌效果优于两两配伍及单味药组，且复方醇提物的抑菌作用最强。药物两两配伍及三味药联用体现了协同作用，无明显拮抗作用。

鱼腥草、地龙、桑白皮对肺炎支原体均有一定的抑制作用，鱼腥草主要活性成分为挥发油和黄酮类化合物[8]。鱼腥草挥发油对金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠埃希菌均有一定的抑制作用[9]。其中癸酰乙醛是鱼腥草挥发油中是其发挥抗病毒、抗菌的有效成分之一[10]。中药地龙的化学成分有蚓激酶、蛋白质、氨基酸、次黄嘌呤等;其药理作用为抗血栓、抗肿瘤、免疫调节、降压平喘等；具有溶血栓和抗凝血、降压平喘、抗惊厥、镇静解热、抗癌、增强免疫功能等作用[11]。地龙肽是地龙产生的一类对抗外源性病原体致病作用的防御性多肽活性物质，是其发挥抗菌作用的主要活性成分[12]，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等十多种菌均有不同程度的抑制作用[13]。桑白皮含有多种化学成分，主要以酚类化合物为主，尚含少量三萜、香豆素及多羟基生物碱类化合物[14]。现代研究表明，桑白皮提取物具有降血糖、抗氧化、利尿、抑制蛋白糖激化等作用，桑白皮总黄酮为主要活性成分之一[15]。研究证明桑白皮甾醇能抑制大肠杆菌生长，对大肠杆菌的菌体分裂、对菌体蛋白的正常代谢都有明显抑制[16]。实验研究表明鱼腥草、地龙、桑白皮都具有抑制肺炎支原体的作用，且三味药联用时，具有更好的体外抑菌作用，体现了中药配伍“七情学说”，药物配伍使用起到了一定协同增效的作用，就其具体增效及抗菌机制有待进一步研究。