HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中EDTA—2Na的含量

赵杰

摘 要：目的 建立高效液相色谱（HPLC）法测定注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量。方法 选择固定相为十八烷基硅烷键合硅胶（直径为5 μm），尺寸为250 mm×4.6 mm色谱柱，以乙腈-磷酸盐缓冲液（15∶85，v/v，用磷酸调节pH至2.5±0.1）为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为255 nm，柱温为35 ℃。结果 EDTA-2Na浓度在2.0～32.0 μg/ml范围内线性方程为A=2.317×104C-1.235×103（r=0.9998），EDTA-2Na的平均回收率為100.40%，RSD 为0.92%（n=9）。结论 本方法简便、可靠、准确度高、重复性好，可用于测定注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量。

关键词：泮托拉唑钠；EDTA-2Na；高效液相色谱法；含量测定

中图分类号：R927.2 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.11.044

文章编号：1006-1959（2018）11-0138-02

Determination of EDTA-2Na in Pantoprazole Sodium for Injection by HPLC

ZHAO Jie

（Department of Pharmacy，Baodi Clinical College of Tianjin Medical University，Tianjin 301800，China）

Abstract：Objective To establish a（HPLC）method for the determination of EDTA-2Na in Pantoprazole sodium for injection.Methods The stationary phase was octadecylsilane chemically bonded silica（diameter of 5μm），the chromatographic column was of 250 mm×4.6 mm size，the mobile phase consisted of acetonitrile-phosphate buffer（15：85，v/v and pH adjusted to 2.5±0.1 with phosphoric acid），flow rate 1.0ml/min，detection wave length 255nm，column temperature 35 ℃.Results The linear equation of EDTA-2Na concentration in the range of 2.0～32.0μg/ml is A=2.317x104C-1.235x103（r=0.9998），the average recovery of EDTA-2Na is 100.40% and RSD is 0.92%（n=9）.Conclusion The method is simple，reliable，accurate and reproducible，and can be used for the determination of EDTA-2Na in Pantoprazole sodium for Injection.

Key words：Pantoprazole sodium；；EDTA-2Na；HPLC；Content determination

注射用泮托拉唑钠主要用于十二指肠溃疡、胃溃疡、急性胃粘膜病变、复合型胃溃疡等所致的急性上消化道出血[1-3]，为质子泵抑制剂，是一种良好的抑制胃酸药物，临床使用广泛。由于泮托拉唑钠容易与金属离子相互作用发生水解反应，影响了产品制备过程中以及在使用过程中的稳定性，因此需要在处方中加入金属离子螯合剂EDTA-2Na提高产品的稳定性[4，5]。为了更好地控制产品质量，本研究开发了一种简单、迅速、精确的用于测定注射用泮托拉唑钠中的金属螯合剂EDTA-2Na的含量测定方法[5]。

1仪器与材料

1.1仪器 Waters Alliance HPLC高效液相色谱系统（沃特世科技上海有限公司）；XJ120ASCS电子天平（上海精科天美科学仪器有限公司）；PHSJ-6L型实验室pH计（上海仪电科学仪器股份有限公司）；SK1200H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）。

1.2材料 磷酸二氢钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20170105）；磷酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20160901）；硫酸铜（分析纯，湖州展望药业股份有限公司，批号：20170222）；乙腈（色谱纯，德国默克公司，批号：394857104）；EDTA-2Na对照品（国药集团化学试剂有限公司，批号20130428）；注射用泮托拉唑钠（日本武田制药公司，批号：271940712）；蒸馏水自制。

2方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶（直径为5 μm），尺寸为250 mm×4.6 mm，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（15∶85，v/v，用磷酸调节pH至2.5±0.1），流速：1.0 ml/min，检测波长：255 nm，柱温：35 ℃。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液制备 称EDTA-2Na对照品约10.0 mg，精密称定置50 ml容量瓶中，加入蒸馏水溶解并定容，精密移取EDTA-2Na对照品储备液2.0 ml置25 ml容量瓶中，加入1.0 ml浓度为5%硫酸铜溶液，轻轻振摇，加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀，取上述溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。

2.2.2供试品溶液制备 取1瓶市售注射用泮托拉唑钠固体粉末，全部取出称重为45.3 mg（粉末中含EDTA-2Na重量为1.0 mg），将粉末全部加入到50 ml容量瓶中，加入大约5 ml蒸馏水溶解粉末，加入1.0 ml浓度为5%硫酸铜溶液，轻轻振摇，加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀，取上述溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。

2.2.3空白溶液制备 取1瓶自制注射用泮托拉唑钠固体粉末（不含EDTA-2Na），将粉末全加入到50 ml容量瓶中，加入約5 ml蒸馏水溶解粉末，加入浓度为5%硫酸铜溶液0.5 ml，轻轻振摇，加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀，取上述溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。

2.3系统适用性试验 分别取“对照品溶液”、“供试品溶液”和“空白溶液”三份样品采用“2.1”项下色谱条件进样检测，得到三份样品色谱图，由色谱图可知，EDTA-2Na的保留时间为约为6.8 min，理论塔板数均为5600，拖尾因子为1.02。

2.4线性关系考察 称取EDTA-2Na对照品大约10.0 mg，精密称定置50 ml容量瓶中，加入蒸馏水溶解并定容，分别精密移取EDTA-2Na对照品储备液0.25 ml、0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、4.0 ml分别加入到25 ml容量瓶中，再分别加入1.0 ml浓度为5%硫酸铜溶液，轻轻振摇，加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液，含有EDTA-2Na质量浓度分别为2.0 μg/ml、4.0 μg/ml、8.0 μg/ml、16.0 μg/ml、32.0 μg/ml，采用“2.1”项下色谱条件进样检测，以峰面积（A）对浓度（C）为进行线性回归，得到标准曲线方程为A=2.317×104C-1.235×103（r=0.9998），说明EDTA-2Na浓度在2.0～32.0 μg/ml范围内线性关系良好，日间、日内精密度均符合要求，平均回收率为100.40%，RSD为0.92%（n=9）。

2.5样品含量测定 取3批自制注射用泮托拉唑钠固体粉末各1瓶，全部取出称重（粉末中含EDTA-2Na重量约为1.0 mg），分别将粉末全部加入到50 ml容量瓶中，加入大约5.0 ml蒸馏水溶解粉末，加入1.0 ml浓度为5%硫酸铜溶液，轻轻振摇，加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀，取上述溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤，进样检测；同时取对照溶液进样测定，按照外标一点法计算每瓶中EDTA-2Na的含量。3瓶注射用泮托拉唑钠固体粉末中EDTA-2Na含量分别为1.03 mg、1.08 mg、0.982 mg。

3讨论

3.1测定方法选择 EDTA-2Na现有的检测方法包括滴定法和比色法，该方法的灵敏度和专属性较差，无法将目标螯合物和其他螯合物区分开[5]；有报道采用HPLC法测EDTA-2Na的方法，但该方法经验证后峰形较差，检测的准确性和重现性较差[6，7]。本研究在预实验中考察了甲醇-磷酸盐缓冲液、乙腈-磷酸盐缓冲液、乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液、乙腈-磷酸-磷酸盐缓冲液等多个流动相系统，以乙腈-磷酸盐缓冲液（15∶85，v/v，用磷酸调节pH至2.5±0.1）作为流动相时，EDTA-2Na出峰时间适宜，峰形较好，基线平稳，检测结果准确可靠，专属性强，主峰保留时间在7 min左右，检测时间较短。

3.2硫酸铜用量的选择 EDTA-2Na可与硫酸铜结合形成螯合物，泮托拉唑钠也可以与硫酸铜结合形成螯合物，共同存在下，硫酸铜优先与EDTA-2Na结合，形成螯合物，经过预实验筛选确定了硫酸铜的用量，避免药物与过量的硫酸铜反应，生成其他螯合物，影响测定，泮托拉唑钠与硫酸铜结合形成蓝绿色沉淀，以此判定硫酸铜的用量[8]。此外研究还考察pH对EDTA-2Na硫酸铜螯合物的稳定性，研究显示，在pH 2.5条件下，螯合物稳定性较好，故选择磷酸调节pH至2.5±0.1，以磷酸调节流动相pH，有效改善了目标物质的峰形，提高检测的灵敏度和准确性。

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收稿日期：2018-1-31；修回日期：2018-3-1

编辑/杨倩