嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒剂高效液相色谱分析

刘毓民

[山西省化工研究所(有限公司)，太原 030021]

嘧霉胺是一种高效、低毒的苯胺基嘧啶类杀菌剂，具有内吸传导和熏蒸作用，主要用于防治番茄、黄瓜等作物的灰霉病病害，并且对非苯胺基嘧啶类杀菌剂已产生抗药性的灰霉病菌有效[1]。啶酰菌胺是由德国巴斯夫公司开发的一种新型碳酰胺类内吸性杀菌剂，用于多种经济作物的灰霉病、菌核病、白粉病等病害的防治，与其他药物无交互抗性[2]。两者复配能克服单一制剂的局限性，提高药效、降低成本。上述2种单剂有效成分的液相、气相色谱检测方法已有研究[1-4]，但对于嘧霉胺和啶酰菌胺复配制剂中2种有效成分在同一条件下进行检测的方法尚未见报道[5-6]。嘧霉胺和啶酰菌胺混配的农药制剂，对有效成分分析检测方法的建立提出了新的要求。本文建立了在同一液相色谱条件下，同时测定嘧霉胺和啶酰菌胺的分析方法。试验结果表明，该方法具有快速、准确、分离效果好、重现性好等特点，是一种对嘧霉胺和啶酰菌胺复配制剂中有效成分进行检测的较为理想的方法。

1 试验部分

1.1 试剂和仪器

高效液相色谱仪(UItiMate 3000)，具有紫外可变波长检测器；超声仪(昆山超声仪器有限公司，KQ-50B)；紫外-可见分光光度计(上海第三分析仪器厂，752)；过滤器(滤膜孔径0.45 μm)；微量进样器(100 μL)；甲醇(色谱级)；新蒸二次蒸馏水；啶酰菌胺标样(纯度≥99.0%)；嘧霉胺标样(纯度≥98.5%)；50%嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒剂(实验室留样)。

1.2 高效液相色谱操作条件

色谱柱：250 mm×4.6 mm (i.d)不锈钢柱，内填Nove-Pak C18、5 μm填充物；柱温：室温；流动相：甲醇+水=75+25 (体积比)；流量：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：254 nm；进样体积：20 μL；保留时间：嘧霉胺约为5.4 min，啶酰菌胺约为8.7 min。标样和样品的高效液相色谱图见图1、2。

图1 嘧霉胺和啶酰菌胺标样的高效液相色谱图

图2 嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒剂的高效液相色谱图

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液的制备

称取嘧霉胺标样0.06 g (精确至0.000 2 g)和啶酰菌胺标样0.05 g (精确至0.000 2 g)，置于同一100 mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声仪震荡5 min，使标样溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度摇匀。准确吸取10.0 mL该溶液于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀备用。

1.3.2 试样溶液的制备

称取约0.22 g的试样(精确至0.000 2 g)，置于另一 100 mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声仪震荡5 min，使试样溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度摇匀。准确吸取10.0 mL该溶液于另一50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤后备用。

1.3.3 测定

在上述的高效液相色谱操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针的嘧霉胺(或啶酰菌胺)峰面积相对响应值变化小于1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.3.4 计算

将测得的2针试样溶液以及试样溶液前后2针标样溶液中嘧霉胺(或啶酰菌胺)峰面积分别进行平均。试样中嘧霉胺(或啶酰菌胺)质量分数X (%)按下式计算：

式中：A1为标样溶液中嘧霉胺(或啶酰菌胺)峰面积的平均值，A2为试样溶液中嘧霉胺(或啶酰菌胺)峰面积的平均值，m1为嘧霉胺(或啶酰菌胺)标样的质量(g)，m2为样品的质量(g )，P为标样中嘧霉胺(或啶酰菌胺)的质量分数(%)。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

在200～300 nm波长范围内，用紫外分光光度计进行扫描。试验发现，嘧霉胺在254 nm和280 nm处有紫外吸收，啶酰菌胺在210 nm、230 nm和254 nm处有紫外吸收。从这2组试验数据可以看出，在254 nm波长下，嘧霉胺和啶酰菌胺均有紫外吸收，可以用该波长进行试验。在后续的试验中，从图1和图2可以看出，嘧霉胺和啶酰菌胺的响应值和峰高比例都较为合适，并且杂质也不影响有效成分测定，所以本文选择254 nm作为试验的检测波长。

2.2 流动相的选择

分别选用不同比例的甲醇+水与乙腈+水作为流动相进行试验。从多次试验的结果中可以发现，用甲醇+水=75+25 (体积比)作为流动相，流量为1.0 mL/min时，2个有效组分之间，以及组分与杂质之间均有较好的分离，相互之间没有干扰；2个有效组分的峰型尖锐、对称。由于分离效果及出峰形状都比较满意，符合要求，因此本文选用了甲醇+水=75+25(体积比)作为流动相。

2.3 线性相关性测定

称取嘧霉胺标样0.06 g (精确至0.000 2 g)和啶酰菌胺标样0.05 g (精确至0.000 2 g)，置于同一100 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。用移液管准确吸取上述混和标样溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 mL分别置于5个50 mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度摇匀，在相同的色谱条件下进行测定。以质量浓度为横坐标(X)，以峰面积(A·10-5)为纵坐标(Y)，分别绘制标准曲线并计算其线性方程。嘧霉胺的线性方程为y=0.902 7x－2.834 8，相关系数r为0.999 0；啶酰菌胺的线性方程为y=0.666 2x+1.538 7，相关系数r为0.999 6。

2.4 方法的精密度试验

取同一个批次的样品，在相同色谱条件下平行测定 5次，嘧霉胺和啶酰菌胺的标准偏差分别为0.089和0.097，变异系数分别为0.32%和0.42%。由表1的试验结果可以看出，嘧霉胺和啶酰菌胺的标准偏差和变异系数都很小，表明本方法的精密度高，试验方法可行。

表1 嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒剂精密度测定结果

2.5 方法的准确度试验

在已知含量的试样中，同时加入一定量的嘧霉胺和啶酰菌胺标样，在上述色谱条件下进行测定，嘧霉胺和啶酰菌胺的平均回收率分别为 99.51%和99.33%。由表2的试验结果可以看出，嘧霉胺和啶酰菌胺加标品回收率好，表明本方法的准确度高。

表2 嘧霉胺·啶酰菌胺水分散粒剂准确度测定结果

3 结 论

通过以上一系列的试验可以看出，本试验方法的分离效果和线性关系良好，精密度和准确度较高，能够达到分析检测的技术要求，并且具有操作简便、快速的特点。因此，该方法可用于嘧霉胺和啶酰菌胺复配制剂中2种有效成分的同时定量分析，以及相关产品的质量检测。

欧盟将不再批准敌草快、草铵膦再评审申请，两产品或将退出欧盟市场

近期从瑞典化学局获悉，欧盟将不再批准除草剂敌草快[Diquat (dibromide)]和草铵膦(glufosinate，glufosinate-ammonium)的再评审申请。这2种活性物质在欧盟都属于候选替代物质(candidate for substitution，CfS)。

(摘自世界农化网)