超高效液相色谱串联质谱测定果蔬中氯虫苯甲酰胺残留

李桂红，李二虎，张 武，赵 瑞，李 俊，程 媛

[农业部农药质量监督检验测试中心(天津)，天津 300061]

氯虫苯甲酰胺是美国杜邦公司近年研究开发成功的杀虫剂，属邻甲酰氨基苯甲酰胺类杀虫剂。该剂主要激活鱼尼汀受体，释放平滑肌和横纹肌细胞内贮存的钙离子，引起肌肉调节衰弱，肌肉麻痹，直至最后害虫死亡。氯虫苯甲酰胺对鳞翅目害虫的幼虫活性高，杀虫谱广，持效性好，具有长而稳定的对作物的保护作用。防治水稻主要害虫时，迅速保护水稻，尤其对其他水稻杀虫剂产生抗性的害虫有特效，如稻纵

卷叶螟、二化螟、三化螟、大螟，对稻瘿蚊、稻象甲、稻水象甲也有很好的防治效果。该农药属微毒级，对施药人员非常安全，对稻田有益昆虫、鱼虾也非常安全。持效期可以达到15 d以上，对农产品无残留影响，同其他农药混和性能好[1]。

1 试验方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

TSQ Quantum Access三重四极杆串联液质联用仪(Thermo Fisher Scientific公司)；高速匀浆机(IKA®-WERKE, T25 basic)；水浴氮吹仪(N-EVAP111,Organomation Associates, Jnc.)。

1.1.2 试剂与材料

氯虫苯甲酰胺标样(1 000 mg/L)、甲醇、乙腈均为 HPLC 级(Merck，Darmstadt，Germany)，二氯甲烷、氯化钠(140 ℃烘烤4 h)均为分析纯；娃哈哈纯净水；氨基柱(Cleanert NH2-SPE；500 mg/6 mL)；0.22 μm过滤膜。

1.1.3 标准工作液的配制

将氯虫苯甲酰胺标准溶液用甲醇配置成浓度为100 mg/L作为储备液。系列浓度的标准工作溶液由氯虫苯甲酰胺标准贮备溶液用甲醇配制(现用现配)。

1.1.4 色谱与质谱条件

色谱条件：色谱柱：Hypersil Gold(2.1×100 mm)；柱温：室温；流动相采用梯度洗脱(洗脱参数见表1)；进样体积：5 μL。

表1 梯度洗脱参数

质谱条件：ESI正离子模式；喷雾电压4000V；离子传输毛细管温度：350 ℃；鞘气：35 psi；采用选择反应监测(SRM)扫描模式。质量条件参数见表2。

表2 质谱质量条件参数

1.2 试验方法

1.2.1 样品提取

称取果蔬(粉碎样)样品25.00 g，置于125 mL的广口瓶中，加入50 mL乙腈，高速匀浆1 min，然后过滤到100 mL的具塞量筒中，加入6 g氯化钠，振摇提取2 min，静置分层后，分离有机相和水相，量取有机相10 mL于60 ℃水浴上氮吹至近干，残余用洗耳球吹干。用2 mL二氯甲烷+甲醇(95︰5，体积比)混合液溶解，待净化。

1.2.2 样品净化

净化用氨基柱，先用 5 mL二氯甲烷+甲醇(95︰5，体积比)的混合溶液预淋柱子，当溶液到达吸附层表面时，立即将上述浓缩液加至柱中，并用刻度试管接洗脱液，用上述混合液5 mL洗涤3次，收集全部淋洗液。将收集的洗脱液在45 ℃水浴氮吹至近干，用甲醇准确定容至5 mL，用0.22 μm滤膜过滤，待上机。

1.2.3 测定步骤

在1.1.4色谱工作条件下，待仪器稳定后，按标准溶液、样品溶液、标准溶液的顺序进行色谱分析。采用外标法对样品进行定量分析。

2 结果与讨论

2.1 洗脱液选择

本方法选用二氯甲烷+甲醇(95︰5，体积比)作为净化洗脱溶液。当用5 mL洗脱液洗脱2次时回收率最佳，且杂质影响不大。

2.2 流动相选择

本方法对流动相条件进行了优化，采用梯度洗脱，使得峰型得到了很好的改善，并且能够使氯虫苯甲酰胺和杂质得到很好的分离，效果比较理想。

2.3 质谱条件的优化

根据氯虫苯甲酰胺分子的结构，选择 ESI(＋)作为电离化模式，将氯虫苯甲酰胺标准溶液配置成1.0 μg/mL的甲醇溶液，通过全扫描模式找出母离子。

使用二级扫描的方式根据母离子选择特征离子，选用离子强度较大的2个子离子作为定量和辅助定性离子，并优化其碰撞能量，最后在SRM方式中进一步验证碰撞能量。最终选择的母离子、特征离子和碰撞能量详见表2。

图1 标准样品色谱图

2.4 分析方法的线性相关测定

在上述确定的色谱条件下，氯虫苯甲酰胺标准样品谱图见图1。用甲醇将氯虫苯甲酰胺标准贮备溶液配制成 10.0、20.0、40.0、80.0、160.0、320.0 μg/L 系列浓度的标准工作溶液。将系列浓度分别进样5 μL，在液质联用仪上测定峰面积，每个浓度测得的峰面积与对应的氯虫苯甲酰胺标准溶液浓度绘制标准曲线。氯虫苯甲酰胺的浓度在10.0～320.0 μg/L呈良好的线性关系，线性方程为 y=21 154x－188 580，R2=0.995 3 (图 2)。

图2 氯虫苯甲酰胺标准曲线

2.5 精密度、回收率试验

采用添加法，在表3所列无杂质干扰的空白样中添加已知含量的标准溶液，在上述的色谱条件下进行测定，添加量0.04 mg/kg、0.08 mg/kg和0.16 mg/kg，测得花椰菜等11种果蔬样品添加回收率为70.60%～116.42%，色谱图如图3～图13，表明本方法对花椰菜等 11种果蔬中氯虫苯甲酰胺农药残留的测定灵敏度高，操作简单，定量准确。具体数据见表3。

3 结 论

本文选用LC-MS/MS法的SRM方式检测花椰菜等11种果蔬中的氯虫苯甲酰胺，用固相萃取柱净化，过滤后进行分析，方法简便、快速。

表3 花椰菜等11种果蔬中氯虫苯甲酰胺添加回收率(n=5)

图3 花椰菜样品添加回收谱图

图4 苹果样品添加回收谱图

图5 甘蓝样品添加回收谱图

图6 油菜样品添加回收谱图

图7 姜样品添加回收谱图

图8 马铃薯样品添加回收谱图

图9 芹菜样品添加回收谱图

图10 菜豆样品添加回收谱图

图11 黄瓜样品添加回收谱图

图12 西葫芦样品添加回收谱图

图13 草莓样品添加回收谱图

采用三重四极杆质谱的选择反应监测(SRM)方式，确定其母离子，经碰撞能量优化试验确定特征离子，获得极高的检测灵敏度。

经试验验证，在10.0～320.0 μg/L，氯虫苯甲酰胺的相关系数为0.995 3，回收率为70.60%～116.42%，精密度小于15.2%。

综上所述，本方法可适用于花椰菜等11种果蔬的测定，具有快速、准确、灵敏度高等优点，方法灵敏度高、选择性更优、重现性更好。