枯草芽孢杆菌在断奶仔兔生长和预防腹泻中的应用研究

薛 云，周 锋，王乐伟

（河南科技大学医学技术与工程学院，河南洛阳 471023）

断奶期仔兔对环境和食物的变化较为敏感，易出现应激反应，导致生长速度放缓，生理性和病理性腹泻发生，严重时可以引起仔兔死亡，给家兔养殖业造成巨大损失（潘海强，2018）。断奶仔兔机体发育尚不完善，尤其是胃肠道黏膜较脆弱，机体对食物的消化吸收能力低，因此，当仔兔食物从母乳变成饲料时，常导致消化不良，继而出现腹泻等疫病（高媛媛等，2011）。也有学者认为，仔兔断奶之后不能再从母乳中获得免疫球蛋白，而自身体内的母源抗体水平也迅速下降，因此，感染轮状病毒等病原微生物的几率增加，导致仔兔群体腹泻（Pan等，2014）。此外，在家兔实际养殖生产中，抗生素使用不当常引起肠道微生物菌群失衡，加剧仔兔腹泻病情的发展，给断奶仔兔的饲养管理带来困扰（Yuan等，2012）。

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis，BS）作为一种重要的微生态制剂已被广泛应用于营养性饲料领域，其无毒、无残留，同时又耐热、耐酸、耐碱和耐紫外线等多种环境不利因素，是一种稳定、实用又有效的营养性饲料添加剂（Bae等，2010）。一些证据显示，枯草芽孢杆菌可提高畜禽饲料利用率，提高生产性能，增强机体免疫力，提高动物机体抗病能力（龙淼等，2015）。枯草芽孢杆菌作为一种绿色添加剂，已应用于猪、禽、牛等反刍动物和鱼类等水产动物，但在家兔养殖方面的应用研究仍相对较少（Joyeux等，1960）。因此，本试验旨在研究枯草芽孢杆菌对断奶期仔兔生长性能的促进作用，并分析在环境、饲料等因素改变所造成的应激性、病理性腹泻下其对仔兔的保护作用，为枯草芽孢杆菌在家兔养殖业中的应用奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验菌株 某企业生产枯草芽孢杆菌制剂，有效成分为枯草芽孢杆菌，辅料为淀粉。其中，枯草芽孢杆菌活菌计数＞2×1010cfu/g。

1.2 试验动物 健康断奶仔兔40只，雌性，日龄（35±3）d，体重（2±0.3）kg，购自某肉兔养殖场。

1.3 试验动物分组和饲喂方法 将40只断奶仔兔随机分为4组，每组10只。其中A、B、C组为试验组，基础日粮中分别添加0.1%、0.2%、0.3%的枯草芽孢杆菌制剂。D为对照组，基础日粮中不添加枯草芽孢杆菌制剂。基础日粮的配方参照任永军等（2014）方法进行配制，各组仔兔均按养殖场的正常频率和饲喂量连续饲喂30 d。

1.4 生长性能测定 对试验第0和30天的各组仔兔分别称量空腹体重，计算仔兔平均日增重，记录各组仔兔饲料的加料量与剩余量，计算料重比，计算公式如下：

1.5 免疫指标测定 对试验第0和第30天各组仔兔分别经耳中动脉无菌采血1 mL。4℃冰箱静置2 h后，3000 r/min离心10 min，收集血清。然后经酶联免疫吸附法（ELISA）测定兔血清中总IgA、IgM、IgG含量以及补体C3和补体C4水平。

1.6 免疫器官指数测定 试验结束后，各组随机挑选3只仔兔，颈部脱臼处死，采集脾脏和胸腺称重，测定免疫器官指数。免疫器官指数计算公式为：

脾（胸腺）指数（g/kg）=脾（胸腺）质量 /宰前活质量。

1.7 腹泻率与死亡率测定 从试验开始至30 d试验结束，每天观察仔兔的精神状态、活动情况和排便情况，重点记录各组仔兔腹泻与死亡情况。试验结束后，统计各组仔兔腹泻发生的发病率和死亡率。

1.8 统计学分析 使用SPSS 12.0软件对数据进行统计学分析。计数数据以百分率（%）表示，计量数据以“平均数±标准差”表示。计数数据之间的比较采用Fisher精确检验，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果与分析

2.1 平均日增重和料重比测定 由表1可知，各组仔兔平均日增重测定结果表明，基础日粮添加了枯草芽孢杆菌制剂的试验组A、B、C组仔兔平均日增重均显著高于无添加对照组D组（P＜0.05）。其中，B组和C组仔兔平均日增重与对照组D组相比差异极显著（P＜0.01）。A、B、C三组间仔兔平均日增重无显著差异（P＞0.05）。各组仔兔料重比测定结果表明，B组料重比显著低于对照组D组（P＜0.05），其他组间无显著差异（P ＞ 0.05）。

表1 枯草芽孢杆菌对仔兔平均日增重和料重比的影响

2.2 免疫指标测定 由表2可知，各组仔兔血清免疫指标测定结果表明，在IgA、IgM、IgG、C3和C4 5个检测指标中，B组和C组IgA、IgG水平与D组存在显著差异（P＜0.05）。而A、B、C试验组其他指标与对照组D组相比，虽略有升高但差异均不显著（P＞0.05）。

表2 各组仔兔血清免疫指标测定结果

2.3 免疫器官指数测定 由表3可知，免疫器官指数测定结果表明，C组仔兔的胸腺重量显著高于对照组D组（P＜0.05），其他组间均无显著差异（P＞0.05）。C组的脾脏和胸腺免疫器官指数均最高，但与其他各组差异不显著（P＞0.05）（表3）。

表3 各组仔兔免疫器官指数测定结果

2.4 腹泻率及死亡率的测定 由表4可知，试验开始后，跟踪观察统计断奶仔兔的健康状况发现，基础日粮添加了枯草芽孢杆菌制剂的试验组均无死亡现象，仅A组1只仔兔出现轻微腹泻症状。而对照组D组中，1只仔兔死亡，2只出现严重腹泻症状。各试验组仔兔的腹泻率和死亡率均显著低于对照组（P＜0.05）。其中，B组和C组的仔兔的腹泻率均显著低于A组（P＜0.05）。

表4 腹泻率及死亡率统计结果

3 讨论

枯草芽孢杆菌是在人和动物营养领域得到普遍认可的一种肠道益生菌，具有耐高温、耐酸碱、性质稳定等优势，常用于食品添加剂（Yu等，2009；Hong等，2008）。枯草芽孢杆菌可以产生蛋白酶和脂肪酶等多种酶类，提高机体对营养物的消化吸收能力（Liu等，2006）。同时还可以辅助动物消化道微生物健康菌群的建立，促进机体生长发育（Vepachedu等，2005；Imai等，2000）。由于断奶仔兔消化道功能不完善，对饲料的消化吸收能力有限（胡艳等，2013；张佳蕾等，2017），而枯草芽孢杆菌产生的多种酶类和多糖能帮助机体消化吸收食物，从而促进兔的生长发育和提高其抗病能力（Guo等，2017；Phuoc等，2017）。因此，推测在仔兔断奶敏感期可以起到较好的促生长作用，同时具有预防腹泻的作用。

动物日增重和料重比反应了动物对饲料的利用率，是评价生长性能的主要指标。在本研究中，我们发现向断奶仔兔基础日粮中添加适量枯草芽孢杆菌制剂能有效提高日增重和降低料重比，改善仔兔生长性能。血清免疫指标和免疫器官重量是评价健康动物机体免疫系统发育的重要参考依据。在本研究中，血清免疫指标检测发现，添加适量枯草芽孢杆菌制剂的试验组IgA、IgG水平与对照组存在显著差异。免疫器官指数测定结果也发现，部分试验组胸腺重量显著高于对照组。这结果表明，基础日粮中添加适量枯草芽孢杆菌制剂既有助于仔兔免疫系统的生长发育，也间接起到防病抗病的作用。此外，对于试验仔兔的跟踪观察发现，添加适量枯草芽孢杆菌制剂的试验组其腹泻率和死亡率均显著低于对照组，也进一步证实了我们的推测，枯草芽孢杆菌可以有效预防断奶仔兔腹泻的发生。

在本研究中，枯草芽孢杆菌添加还呈现出一定的剂量效应。对比各试验组添加0.1%、0.2%、0.3%枯草芽孢杆菌制剂的效果，0.2%枯草芽孢杆菌制剂在提高断奶仔兔的生长性能和抗腹泻能力的综合效应最佳，可以作为家兔生产养殖中推荐使用的添加剂量。

4 结论

在断奶仔兔基础日粮中添加适量的枯草芽孢杆菌制剂可以有效增加仔兔平均日增重，降低料重比，完善仔兔生长发育和免疫系统，降低腹泻发病率和死亡率。添加0.2%的枯草芽孢杆菌制剂是综合评价效用最佳的使用剂量。