结直肠癌组织中DEK蛋白的表达及意义

邢维山 张锦辉 夏荣钧 郑琳琳 林黎娟

结直肠癌(CRC)是1种常见的恶性肿瘤，手术切除是较有效的治疗手段。

原癌基因DEK是由急性髓系白血病亚型中以DEK-CAN 融合蛋白的形式分离出来的[1]，它在很多实体肿瘤如肺癌、膀胱癌、肝癌、子宫颈癌以及黑色素瘤中呈现过表达方式[2]。近些年来，DEK在肿瘤细胞的发生发展中的作用研究日益增多。研究普遍认为DEK与细胞凋亡有密切联系[3]。我们的前期研究[4]证实了DEK与子宫颈癌细胞增殖密切相关，与增殖细胞标记Ki-67蛋白的表达密切相关，两者的联合检测对于宫颈癌及其癌前病变的诊断具有重要的指导意义；另外，我们的研究也发现DEK与乳腺癌和卵巢癌细胞的发生、发展密切相关[5-6]。本研究利用检测109例结肠癌及癌旁正常结肠粘膜组织中DEK蛋白的表达，并分析了DEK蛋白过表达与临床病理学参数及患者生存情况之间的关系。

1 材料与方法

1.1 组织标本

随机选取丹东市第一医院2006至2009年期间手术治疗的CRC患者109例，其中包括87例男性、22例女性，中位年龄48.6岁(34～76岁)。术后经病理证实均为原发性CRC，所有患者术前均未经化疗，无远处脏器转移；109例癌旁正常结肠粘膜组织及12例转移淋巴结组织也被纳入本研究。109例患者全部进行跟踪随访5年或者至死亡，随访结束时有77位患者生存。本研究经得到当地伦理委员会许可。

肿瘤部位：结肠和回盲部57例，直肠52例；肿块直径≤ 5 cm者61例、>5 cm者48例；有淋巴结转移者49例；侵及浆膜者52例；高分化49例，中、低分化60例；按AJCC分期标准，Ⅰ期14例、Ⅱa期38例、Ⅱb 期4例、Ⅲa期7例、Ⅲb期28例、Ⅲc期15例。

1.2 免疫组化染色

SP法进行免疫组化染色。组织芯片脱蜡、水化，柠檬酸盐抗原修复液中修复，PBS漂洗，置入30 ml/ L H2O210 min，正常血清37 ℃孵育15 min，加入抗 DEK 单克隆抗体(美国BD公司，1∶50 稀释)后在4 ℃冰箱内孵育并过夜，再加入生物素标记抗IgG抗体和辣根过氧化物酶标记抗IgG抗体(北京中杉公司)经过37 ℃孵育60 min后，用DAB进行显色以及苏木精复染，最后中性树胶封片。由光学显微镜判断结果着色情况，DEK表现为核染色。

1.3 统计学分析

所得数据应用SPSS 19.0软件进行统计学分析。DEK蛋白表达率与临床病理学参数间的关系由卡方检验；术后生存率用Kaplan-Meier和Cox比例风险模型进行分析。P<0.05视为差异有显著性。

2 结果

2.1 DEK 蛋白表达与结直肠组织类型的关系

53例CRC(48.6% )、10例(9.2%)癌旁正常组织、8例(66.7%)转移淋巴结组织，采用免疫组化染色检测可见细胞核DEK表达。结直肠癌组织中DEK蛋白表达与癌旁良性组织、转移淋巴结组织及癌周组织比较均有明显差异(P均<0.001)，癌组织与淋巴结组织之间比较无相关性(P=0.237)。

2.2 DEK表达与临床病理学及预后的关系

将DEK表达与临床病理因素的关系见表1，DEK蛋白表达与肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移、浆膜侵犯和肿瘤分期有相关性(P分别为 0.029、0.009、0.006、0.031和0.010)，但与年龄、性别及部位无关。另外，DEK呈阳性表达的CRC与阴性表达的CRC相比，生存率明显降低，P=0.025(图1)。

表1 DEK蛋白表达与结直肠癌临床病理学参数的关系/例

图1 Kaplan-Meier方法分析图

2.3 DEK表达与组织分级、浆膜侵犯及淋巴结转移共同对CRC预后的影响

为了进一步证实DEK表达在CRC进展中的重要作用，比较了它与其它影响CRC进展的因素在评估预后中的作用，其中年龄、组织分级、浆膜浸润、淋巴结转移以及肿瘤分期都与患者5年生存率有相关性(P分别为0.002、0.016、0.003、0.002和<0.001)。通过联合分析发现，组织分级低且伴DEK表达的CRC比组织分级高但不伴DEK表达的CRC 5年生存率高(P<0.001)；有浆膜浸润且伴DEK表达的CRC比有浆膜浸润但不伴DEK表达CRC的5年生存率低(P=0.005)；有淋巴结转移CRC 5年生存率与是否伴DEK表达有相关性(P=0.009)。

2.4 DEK表达与肿瘤分期对CRC预后的影响

肿瘤分期是CRC最重要的组织学预后影响因素，运用Cox进行的多变量生存分析显示(表2)，肿瘤分期是CRC总生存率独立影响因素(P=0.0042)。高分期且伴DEK表达的CRC5年生存率最低，明显低于低分期且伴DEK表达的CRC (P=0.001)；同是高分期的CRC，伴有和不伴有DEK表达的5年生存率显著不同(P=0.035)。

表2 多因素分析109例CRC患者的独立风险因素

3 讨论

DEK蛋白是1种核磷酸化蛋白，DEK的磷酸化是1种重要的翻译后修饰，且磷酸化水平高低与细胞凋亡程度密切相关。有研究表明，诱导细胞凋亡时DEK 的磷酸化水平明显降低[7]。Wise-Draper等[8]认为，DEK过表达可以抑制HeLa细胞的衰老，当HeLa细胞内的DEK敲除后会抑制增殖、诱导凋亡。DEK作为原癌基因在许多恶性肿瘤组织中呈高表达，且其表达水平明显影响患者的预后状况，可以用来评估胶质瘤和子宫颈癌的分化程度[9]。

CRC是世界范围内常见的致死性的恶性肿瘤，其5年总生存率约65%，肿瘤分期是影响预后的最重要的因素。尽管外科手术为CRC提供了较有效的治疗，但CRC患者的前景仍然很值得担忧，因此，认识更多预见不良预后的分子标志物有利于提高患者的治疗效果。本研究中我们发现DEK在近二分之一的CRC中呈高表达，且其表达与组织分级、肿瘤大小、浆膜侵犯、肿瘤分期及淋巴结转移有关。我们的结果证实DEK表达情况联合这些指标的检查更加有利于CRC预后的评估。

肿瘤分期是CRC预后不良的重要的组织学特征之一，我们证实高分期中的DEK表达比低分期的CRC接近3倍，且分期高的CRC 5年生存率较低，更重要的是，细胞分期高且伴有DEK表达的CRC 5年生存率较不伴有DEK表达的CRC低，这些结果说明，肿瘤分期与DEK表达共同预示患者的生存情况。另外，肿瘤分期是一个独立的预后影响因素，我们也证明DEK表达与高分期CRC的不良预后有关。因此可以推测DEK 蛋白对评估CRC预后有一定的参考价值，相信通过进一步研究 DEK 在肿瘤发生、发展中的作用及机制，将会为临床CRC的预后评估及分子靶向治疗提供有价值的依据。