氟唑环菌胺原药高效液相色谱分析方法研究

董文凯，韩金涛，王胜翔，柴洪伟，解银萍，张 强，李旭坤

(1.山东省农药科学研究院，山东省化学农药重点实验室，山东 济南 250100；2. 农业部农药检定所，北京 100125)

1 前言

氟唑环菌胺ISO通用名：sedaxane，CAS号：874967-67-6，分子式：C18H19F2N3O，化学名称：N-[2-[1,1’-联环丙基]-2-基苯基]-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺，结构分为顺式和反式结构，以反式结构为主[1-3]。氟唑环菌胺是一种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂。通过抑制病原菌线粒体呼吸电子传递链上的蛋白复合体Ⅱ(即琥珀酸脱氢酶)来影响病原菌线粒体呼吸电子传递系统，阻碍其能量的代谢，抑制病原菌的生长并致其死亡。适用于谷物、大豆、油菜、玉米、马铃薯、甘蔗和果蔬作物，用作种子处理，防治黑粉病、丝黑穗病、黑星病、灰霉病等病害[2]。目前已在多个国家和地区登记使用，商品名为Vibrance。

氟唑环菌胺可用气相色谱法进行分析检测[4]。本文采用高效液相色谱法，用外标法对有效成分进行定性定量分析。该方法操作快速、简便、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 乙腈(色谱纯)；磷酸(分析纯)；超纯水(电阻率18.2 MΩ·cm，25℃)；氟唑环菌胺标准物质(质量分数99.5%)，由农业部农药检定所提供。氟唑环菌胺原药由某公司提供。

2.2 试验仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1200，具有二极管阵列检测器和自动进样器；Agilent色谱工作站；Millipore超纯水制备系统；色谱柱：250mm×4.6mm(id)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C185μm填充物；微孔滤膜：0.45 μm有机膜。

2.3 液相色谱操作条件 流动相：ψ(乙腈:0.1%磷酸溶液)=65:35；流量：1.5mL/min；柱温：30℃；检测波长：220nm；进样体积：5μL；保留时间：氟唑环菌胺约4.2min(反式)和4.7min(顺式)(图1)。

图1 氟唑环菌胺原药高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制 准确称取氟唑环菌胺标样0.03 g(精确至0.000 2 g)置于100 mL容量瓶中，先加5 mL水再用乙腈稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 线性试验系列溶液配制 在2.4.1标准溶液配制的条件下，称取不同量的标准品，配置成一系列校正曲线溶液，使氟唑环菌胺的质量浓度分别为0.121 1、0.181 4、0.302 3、0.483 7、0.604 6 g/L用于制作校正曲线。

2.4.3 试样溶液的配制 称取试样0.03g(精确至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，先加5 mL水再用乙腈稀释至刻度，摇匀。

2.4.4 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.5 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中氟唑环菌胺峰面积分别进行平均。试样中氟唑环菌胺的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

式中：

A1──标样溶液中氟唑环菌胺峰面积的平均值；

A2──试样溶液中氟唑环菌胺峰面积的平均值；

m1──标样的质量，g；

m2──试样的质量，g；

P──标样中氟唑环菌胺的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择 使用Agilent 1200高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得氟唑环菌胺的紫外吸收谱图(图2)。从图中可见氟唑环菌胺在190～220nm处有较大的吸收，为避免溶剂干扰，且氟唑环菌胺有较强吸收峰，选择220nm为检测波长。

图2 氟唑环菌胺紫外吸收谱图

色谱柱选择常规的ZORBAX SB-C18反相柱。依据氟唑环菌胺物化性质，用乙腈作为溶剂溶解样品，并选择乙腈和水作为流动相，为了得到更好的分离效果和峰形，在1 000 mL水中加入1 mL磷酸，将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，最终确定流动相为ψ(乙腈:磷酸溶液)=65:35，在流速1.5mL/min时，有效成分与杂质能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，能在短时间能得到满意的分析结果，提高了工作效率。

3.2 方法的线性相关性试验 在2.3的色谱条件下，将2.4.2中系列线性试验溶液依次注入5 μL，以氟唑环菌胺的质量浓度(x，g/L)为横坐标，峰面积(y, mAU)为纵坐标，绘制校正曲线。试验测得氟唑环菌胺线性方程为y=12 058.86x+10.46，相关系数为1.000 0。结果表明氟唑环菌胺在测试的质量浓度范围内线性关系良好。

3.3 方法的精密度试验 从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析，计算氟唑环菌胺质量分数的标准偏差和变异系数。氟唑环菌胺标准偏差为0.06，变异系数为0.06%(表1)。

表1 分析方法的精密度试验结果

3.4 方法的准确度试验 从已知质量分数的氟唑环菌胺(98.51%)中称取5个试样，分别加入一定量的氟唑环菌胺标样(99.5%)，在上述色谱操作条件下进行分析，测得氟唑环菌胺的平均回收率为100.08%(表2)。

表2 分析方法的准确度试验结果

4 结论

本方法建立的分离并检测氟唑环菌胺原药中有效成分质量分数的高效液相色谱分析方法，线性关系良好，准确度和精密度较高，具有快速、简便、分离效果好，精密度和准确度高的特点，适用于产品的质量控制。