血清VEGF、NO水平变化与喉癌患者颈淋巴结转移的关联性分析

陈英杰

(郑煤集团总医院检验科，河南 新密 450371)

喉癌为头颈部多发恶性肿瘤疾病，其发病率约占恶性肿瘤总发病率的1%～5%，对患者身心健康及生活质量均造成了极大影响[1，2]。临床经验得知，喉癌病灶侵袭及转移是对患者临床疗效及预后造成不利影响的重要原因，因此临床将研究重点转向肿瘤发生及转移分子机制方面。同时，林少雄等[3]研究显示，若喉癌发生颈淋巴结转移，则5年生存率会降低约50%，而准确评估颈淋巴结转移发生、及早确定有效干预方案，则可延长患者生存期限，改善生存质量。目前，临床用于喉癌颈淋巴结转移评估的措施主要包括MRI及CT检查，但准确度及敏感度较低。多种恶性肿瘤疾病血清NO含量均异常增高，且在机体抗肿瘤免疫、肿瘤发生及进展等中具有重要作用；而VEGF被称为特异性新生淋巴管刺激因子，包括PDGF、PIGF等多个成员，可对肿瘤淋巴结转移产生刺激作用[4，5]。为此，选取我院61例喉癌患者，通过设置对照组，探讨血清VEGF、NO水平变化与喉癌患者颈淋巴结转移的关联性。如下报告。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2015年10月-2017年8月喉癌患者61例设为观察组、喉部良性病变者61例设为对照组，另选取同期于我院健康体检者61例设为健康组。观察组男39例，女22例；年龄39～71 岁，平均（54.82±12.60）岁；TNM 分期：Ⅱ期 21例，Ⅲ期24例，Ⅳ期16例；颈淋巴结转移情况：转移者25例，未转移者36例。对照组男37例，女24例；年龄 39～71 岁，平均（55.27±11.90）岁。 健康组男41 例，女 20 例；年龄 40～73 岁，平均（54.33±12.24）岁。3组年龄、性别等临床资料比较无明显差异（P＞0.05），且本研究经我院伦理委员会审批通过。

1.2 选取标准

1.2.1 纳入标准 ⑴观察组经病理检查确诊；⑵既往未接受放化疗治疗；⑶观察组与对照组均接受手术治疗；⑷知晓本研究，签署同意书。

1.2.2 排除标准 ⑴并发其他恶性肿瘤疾病者；⑵并发血液系统、内分泌系统严重病变者；⑶并发全身性严重感染性疾病者。

1.3 方法 入院后第2d晨起时抽取各组受检者空腹静脉血4ml，常温下放置约40～55min，离心处理（400g，5min），取上清液，置于-70℃环境中储存待检；以酶联免疫吸附法测定血清血管内皮生长因子（VEGF）水平，以硝酸还原酶法检测血清一氧化氮（NO）水平，试剂盒均购于南京生物工程研究所。

1.4 观察指标 ⑴统计对比3组血清VEGF及NO水平。⑵统计对比不同颈淋巴结转移情况喉癌患者血清VEGF及NO水平。⑶统计分析血清VEGF及NO水平与喉癌颈淋巴结转移的关联性。

1.5 统计学分析 通过SPSS 20.0对数据进行分析，以（±s）表示计量资料，t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多重比较采用LSD-t检验，血清VEGF及NO水平与喉癌颈淋巴结转移相关性以Person予以分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组血清VEGF及NO水平比较 单因素方差分析可知，3组血清VEGF及NO水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。观察组血清VEGF及NO水平较对照组、健康组高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 1。

表1 3组血清VEGF及NO水平比较（±s）

表1 3组血清VEGF及NO水平比较（±s）

组别观察组对照组健康组n 6 1 6 1 6 1 F P V E G F（u g/L） N O（u m o l/L）4.7 2±0.5 5 2.6 7±0.4 6 0.8 7±0.3 3 1 0 9 0.0 2 0 0.0 0 0 1 1 8.3 2±2 0.1 1 8 8.6 3±1 8.6 3 6 4.5 3±1 4.7 9 1 3 6.9 2 4 0.0 0 0

2.2 不同颈淋巴结转移情况患者血清VEGF及NO水平比较 淋巴结转移患者血清VEGF及NO水平较未结转移患者高，差异有统计学意义 （P＜0.05）。 见表 2。

表2 不同颈淋巴结转移情况患者血清VEGF及NO水平比较（±s）

表2 不同颈淋巴结转移情况患者血清VEGF及NO水平比较（±s）

组别淋巴结转移患者淋巴结未转移患者n 25 36 t P VEGF（ug/L） NO（umol/L）5.10±0.61 4.33±0.49 5.457 0.000 128.41±22.14 112.34±19.76 2.973 0.004

2.3 血清VEGF及NO水平与喉癌颈淋巴结转移关联性分析 Person检验可知，血清VEGF及NO水平与喉癌颈淋巴结转移存在明显正相关关系（P＜0.05）。 见表 3。

表3 血清VEGF及NO水平与喉癌颈淋巴结转移关联性分析（n=61）

3 讨论

早期对喉癌进行确诊，并及时制定有针对性干预措施，是确保患者可取得良好临床疗效及预后效果的重要前提[6，7]。喉癌预后效果影响因素较多，其中颈淋巴结转移是造成喉癌病死率居高不下的重要原因，因此如何早期检出颈淋巴结转移病灶，并对其进行规范处理成为当前研究重点，同时是临床公认的喉癌治疗关键所在。Gandouredwards R等[8]研究显示，MRI及CT均为临床诊断喉癌的常用检查措施，但准确度及敏感度均不佳，其中MRI检查在直径不足10mm的淋巴结中准确度仅约50%，而CT检查更低。

结果显示，观察组血清VEGF水平较对照组及健康组高，且疾病出现颈淋巴结转移后增高幅度更明显，表明喉癌患者血清VEGF含量异常增高，且发生颈淋巴结转移后可进一步。相关学者认为，肿瘤血管生成在肿瘤发生及进展过程中具有重要作用，若无新生血管出现，则单个肿瘤克隆灶体积通常≤2mm3，而VEGF为当前临床所发现的最重要血管生成因子，多将其作为肿瘤转移、代谢等标志物[9]。此外，微血管生成和肿瘤持续生长及转移、侵袭关系密切，受部分基质水解酶影响，肿瘤细胞自身不仅能对基底膜MMPs产生分泌降解作用，还可活化VEGF等，间接促使血管内皮细胞生成MMPs，并将细胞外基质、基底膜等予以降解，以此促进肿瘤新生血管形成。VEGF可结合于受体后特异性作用于血管内皮，提高血管通透性，刺激血管内皮细胞增殖，加速新生血管形成，临床多项研究指出，VEGF为功能较为强大，同时可造成多种生物学效应的一种细胞因子，为PDGF（血小板衍生生长因子）家族重要成员，在人与动物骨骼、胰腺、脾脏、肝脏、肾脏、大脑及其他组织内均有广泛分布，是特异性高、作用最强的血管形成调控因子类型，在肿瘤发生及转移等中均具有重要作用[10，11]。另有相关研究证实，前列腺癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌及其他肿瘤组织内VEGF均呈高表达状态，且可促进肿瘤新生血管形成，诱导肿瘤细胞失控增殖[12-14]。

另由研究结果可知，观察组血清NO含量较高，且其表达水平随着颈淋巴结转移而增高，表明喉癌发病后NO含量也可导致血清NO含量异常增多，且两者间存在正相关关系，提示临床可通过测定血清NO水平诊断喉癌，并对颈淋巴结转移情况予以评估。NO为临床新发现的生物活性因子及信使分子，在机体多种病理及生理过程中均有所参与，特别是在肿瘤病理过程中。机体中NO主要经一氧化氮合成酶（NOS）催化生成，NOS可分为结构型NOS（cNOS）及诱导型 NOS（iNOS），其中 iNOS 为NOS最活跃亚型，其于正常组织内几乎无表达，而机体发生病变后则会生成大量NO。同时，Bayramoglu I等[15]研究显示，NO可作为信使分子于淋巴管内皮细胞中发挥重要的信息传递功能，是淋巴管内皮细胞增生最直接的信号，而内皮细胞具备该信号传递，可确保淋巴管内皮细胞增生，进而促进淋巴管形成，促使淋巴结转移。李文媛等[16]表明，iNOS所诱导产生的NO能经多种机制对肿瘤发生与进展产生促进作用，主要包括：⑴扩大肿瘤血管，进而改善肿瘤内部微循环状态；⑵促使肿瘤转移；⑶抑制肿瘤细胞凋亡；⑷抑制肿瘤抑制基因及DNA修复酶；⑸激活癌基因；⑹加剧DNA损伤。

综上所述，喉癌患者血清VEGF、NO水平异常增高，且发生颈淋巴结转移的患者增高更为明显，其增高水平与颈淋巴结转移存在明显正相关关系，但为单中心研究，且样本量选取较少，因此研究结果是否具有广泛效力仍需多中心扩大样本量进一步探究证实。