核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果评价

陈艳萍

(安阳市中心血站检验科，河南 安阳 455000)

输血传播病原体筛查是为确保血液及血液制品的安全，对输血相关传染病进行预防和控制的一种保障血液安全的重要手段，且一直以来备受世界各国关注[1]。目前，国内对献血者往往常规采用酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)开展梅毒螺旋体血清学及HIV、HBV、HCV检测，虽然此种筛查模式能够使输血传播疾病的风险得到极大地降低，有较高的敏感度，但对血液的准确筛查仍存在一定的局限性[2]。而近年来发展的核酸扩增技术 (nucleic acid amplification techniques，NAT)，具有高度敏感及特异性，可明显缩短梅毒螺旋体血清学及HIV、HBV、HCV病毒的检测窗口期，保障血液制品的安全性[3]。为了进一步提高筛查血液的敏感度，为此，本文探讨核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果评价。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取2016年1月－2017年7月本基层血站无偿献血者标本34680例，献血者均符合国家《献血者健康检查要求》中相应的要求。均对每位献血者进行血液采集的同时留取ELISA和NAT两种样管，所有血液标本采集后保存于2～8℃冰箱，采样后4h内进行1500g室温离心20min低温离心，离心后临时保存于2～8℃，并在24h内进行NAT检测。

1.2 方法

1.2.1 仪器 ELISA检测使用 (瑞士HAMILTON公司)Hamilton Star全自动加样仪和FAME酶免分析仪)。核酸检测使用 (瑞士HAMILTON公司)的Hamilton Star全自动混样仪，Cobas Taq Man Analyzer核酸扩增检测仪，其通过混样和数据管理服务器(PDM)连接组成罗氏诊断Cobas's 201血液核酸血筛平台(CAP/CTM)，Cobas Amp Li Prep核酸提取仪，(美国ABI公司)ABI 7500实时荧光定量PCR仪，(日本KUBOTA公司)低温大容量离心机KUBOTA 8730。

1.2.2 试剂 上海科华生物工程股份有限公司批号200909051、200912011、201003041 的 HBsAg 检测试剂；北京万泰生物药业有限公司批号：C20121221、C20130305、C20130406 等 抗-HCV 检测试剂盒；上海科华生物工程股份有限公司，批号：201212031、201303021、201304011 等) 等 抗-HIV1/2检测试剂盒；美国罗氏诊断公司批号P011692、R01529、R01528 等 NAT 试剂)，配套耗材均由各试剂公司提供，(美国雅培公司)乙肝血清学补充试验试剂。

1.3 观察指标

1.3.1 对献血者标本进行核酸检测与酶免检测平行检测，按试剂盒说明书严格操作，结果判定：标本HBsAg/抗-HCV/抗-HIV1/2对2种试剂反应为阳性则判为阳性，反应均为阴性则判为阴性，对于反应阴性或只有1种试剂反应阳性的标本均进行NAT。

1.3.2 NAT检测 实验严格按照操作仪器及试剂盒说明书步骤，若单个Pool结果为阳性的再对其进行拆分，结果判定：NAT阴性：混样有阳性而拆分阴性的标本；NAT阳性：混样有阳性拆分也有阳性的标本。

1.3.3 将核酸检测阳性标本进行分项定量检测和乙肝血清学补充试验，检测出的阳性标本作HBV DNA、HCVRNA和HIV RNA分项定量检测和乙肝5项检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19．0软件分析本研究的所有数据，采用χ2检验计数资料，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 核酸检测结果 经ELISA筛查HBsAg、抗-HCV和抗-HIV-1/2无反应性及仅1种试剂为反应性的标本共32456例，经核酸NAT检测阳性标本72例，阳性检出率为0.21%；如表1所示。

表1 核酸检测结果

2.2 分项定量检测筛查结果 72例NAT检测阳性标本进行分项定量检测，定量检测HBV DNA阳性36例，阳性率为75.00%(36/48)，未检测出HIV RNA阳性和HCV RNA阳性。

2.3 乙肝血清学补充试验 72例NAT检测阳性标本 ELISA 筛查 HBsAg，抗-HBs，抗-HBe，HBeAg，抗-HBc，最终确认阳性标本48例，确认阳性率为66.67%（66/72）（阳性率比较 χ2=239.68，P＜0.05），见表2。

表2 48例标本乙肝“两对半”血清学模式

3 讨论

核酸扩增检测技术（NAT）是直接通过采用分子诊断技术对病原体核酸进行检测的一系列技术的方法的总称，包括核酸提取、扩增和检测三种基本步骤[4]。因为病毒抗原及抗体蛋白结构的变异，易导致“窗口期”漏检，而NAT具有较高的敏感性、特异性和自动化的特点，在病毒感染后数天便可检测出标本中极微量的病毒核酸，从而使 “窗口期”缩短，减少漏检导致的输血后病毒感染[5-7]。

本研究探讨核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果评价，结果发现，经ELISA筛查HBsAg、抗-HCV和抗-HIV-1/2无反应性及仅1种试剂为反应性的标本共32456例，经核酸NAT检测阳性标本72例，阳性检出率为0.21%，远低于东莞(0.9%)[7]，而高于我国其他地区报道的数据0.06%、0.081%，分析原因可能是人群分布的区域差异所致[8，9]。

本研究还发现72例NAT检测阳性标本进行定量检测，ELISA 筛查 HB-sAg，抗-HBs，抗-HBe，HBeAg，抗-HBc，最终确认阳性标本48例。可见该NAT的灵敏度是很高的，可使病毒检测的 “窗口期”缩短，有利于筛出隐匿性HBV感染的[10-12]。对75例标本通过补充实验和追踪检测进行确认，确认HBV感染36例，确认阳性率75.00%，未能确认HBV感染12例，可能原因包括：由于工作人员不当的操作造成检测结果显示假阳性；或送往确认标本时对血样的运输、保存不当造成，如过长的运输时间、过高的环境温度等使核酸物质分解；或在留存确认血样时因为在血浆中病毒颗粒的泊松分布使病毒浓度分布不均，致使留取血样病毒浓度降低，使确认时未能检出[13-15]。

综上所述，核酸检测与酶免检测平行筛查，两种手段相互补充，可使输血传播疾病残余风险极大得到降低，预防经输血传播的病毒性疾病，从可有效地保障血液安全。