血浆补体因子H相关蛋白2在先天性心脏病合并肺动脉高压儿童中的改变

尉新华 ，张伟涛 ，张金涛 ，徐红亮 ，杨玉齐 ，范顺阳 ，李群

(1、阜外华中心血管病医院儿童心脏中心，河南 郑州450000；2、郑州大学第三附属医院心外科，河南 郑州 450052)

先天性心脏病（congenital heart disease，CHD）是胎儿时期出现的心血管发育异常的一种先天畸形，也是儿童最常见的先天畸形[1]。我国CHD发病率为0.6%～0.8%。有研究表明，10%的CHD患儿合并肺动脉高压 （(pulmonary arterial hypertension，PAH）[2]。CHD患儿合并PAH，尤其是出现艾森曼格综合征时，其致残率和病死率显著升高，严重危害儿童的身心健康[3]。CHD患儿选择药物保守治疗或介入、手术等治疗方式，主要取决于对PAH的准确诊断和评估[4]。PAH诊断的金标准为右心导管检查，但属于有创性检查，临床应用受到限制[5]。PAH相关生物标志物的研究成为近年来的热点。既往研究显示，CHD-PAH患儿血浆中与炎症、补体激活系统和凝血机制密切相关的CFH-R2水平降低[6]。因此，本研究旨在综合评价血浆补体因子H相关蛋白2在先天性心脏病合并肺动脉高压儿童中的变化情况，为临床后续研究提供思路和方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2015年6月到2016年12月期间我院心内科和心外科收治的89例CHD患儿。选取同时期来我院体检的健康儿童40例作为对照组。入选标准：①所有入选患儿均符合2010年欧洲心脏病学会制定的CHD诊断标准[7]，CHD合并PAH诊断标准符合美国心脏病协会制定的PAH诊疗指南[8]；②年龄：6月～12岁；③患儿家属均签署知情同意书。排除标准：①合并其他脏器严重疾病者；②患儿为原发性肺动脉高压，或其他原因导致的肺动脉高压；③入院前1月内服用降低肺动脉压药物者。本研究经过本院伦理委员会审核通过。

1.2 方法 收集所有入选研究对象的基线资料，包括年龄、性别、身高、体重、血压等。CHD患儿术前采用心导管测量肺动脉压，并根据肺动脉压值进行分组：无肺动脉高压组，肺动脉压＜30mmHg；轻度组，肺动脉压30～39mmHg；中度组，肺动脉压40～69mmHg；重度组，肺动脉压＞70mmHg。CFH-R2采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定，ELISA试剂盒购自美国Cusabio biotech公司。采集外周静脉血，全血分离后取上层血浆进行检测，严格按照试剂盒说明书进行检测。

1.3 统计学方法 对所有数据采用SPSS 17.0进行分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用ANOVA检验，两两比较采用LSD-t检验；计数资料用率来表示，采用χ2检验；以P＜0.05有统计学差异。

2 结果

2.1 一般基线资料比较 本研究共纳入129例研究对象，其中对照组40例，CHD组患儿89例。两组年龄、性别构成、身高、体重、血压等比较无统计学差异（P＞0.05），见表 1。

2.2 4组肺动脉压及CFH-R2水平比较 CHD患儿无肺动脉高压组、轻度组、中度组、重度组血浆CFH-R2水平显著低于对照组，比较差异有统计学意义 （P＜0.05）；CHD患儿中， 无肺动脉高压组CFH-R2水平最高，重度组CFH-R2水平最低，差异比较有统计学意义（P＜0.05），见表 2。

2.3 血浆CFH-R2水平与肺动脉压相关性 Pearson相关分析表明，CHD患儿肺动脉压与血浆CFH-R2 水平负相关（r=-0.638，P＜0.05）。 见图 1。

3 讨论

目前，临床上对CHD-PAH的研究主要以临床诊断、治疗以及预后的评估方面，对其发病的病理基础研究，尤其是基因和蛋白水平领域较少。Lavoie等[9]通过诱导PAH动物模型，发现PAH鼠肺组织中存在 CapZα、cathepsin、annexin A4 等差异蛋白，分别与肺组织内蛋白酶体、细胞膜骨架蛋白有关，提示这些蛋白可能参与了PAH时肺组织血管的重塑过程。该研究同时采用定量的蛋白组学研究方法，发现了健康人群与单纯CHD患儿和CHD合并PAH患儿之间血浆蛋白谱的差异，并认为有差异的蛋白与凝血机制、炎症和免疫系统密切相关。本研究中，单纯CHD患儿和CHD合并PAH患儿血浆CFH-R2水平显著低于健康儿童，考虑CFH-R2可能与患儿的免疫系统或凝血机制缺陷相关。

表1 一般基线资料比较

表2 4组肺动脉压及CFH-R2水平比较（±s）

表2 4组肺动脉压及CFH-R2水平比较（±s）

组别对照组无肺动脉高压组轻度组中度组重度组例数40 26 27 19 17肺动脉压（mmHg） CFH-R2（ug/L）-26.7±8.1 35.2±7.4 54.6±10.3 78.9±14.6 194.4±26.1 137.3±21.5 107.8±14.3 84.4±9.7 43.9±5.3

图1 CFH-R2水平与肺动脉压的相关性分析

补体系统是血清中的多种糖蛋白组成的蛋白酶降解系统，是免疫系统的重要组成部分。包括3条途径：经典途径、凝集素途径以及旁路途径。补体因子H（CFH）是旁路途径的重要调控因子，抑制旁路途径的活化和放大反应[10]。CFH相关蛋白由CFH-R1、CFH-R2、CFH-R3、CFH-R4、CFH-R5 等5中相关蛋白构成，每种相关蛋白均可与补体C3b结合。CFH-R2是新型的补体调节因子，在宿主细胞膜的表层通过多价阴离子进行结合，与B因子等竞争性结合补体C3b，干扰C3转化酶功能，调节补体系统的活化[11]。此外，CFH与I因子协同作用可加速C3b的灭活，防止旁路途径过度活化和放大效应损伤集体细胞[12，13]。本结果中可见，CHD患儿血浆中CFH-R2水平显著低于健康对照组儿童，提示CFH-R2在CHD患儿发病的病理生理中起到一定的作用。血浆CFH-R2水平降低考虑可能与其抑制补体系统的激活，进而导致该蛋白过度消耗有关，补体系统活化能能够加速肺组织内血管的重塑，同时促进凝血过程[14]。Humbert[15]研究结果表明，PAH患儿肺部病理学表现为原位微小血栓的形成。CHD患儿中，无肺动脉高压组CFHR2水平最高，重度组CFH-R2水平最低，提示，且病情越严重，也越严重。Pearson相关分析表明，CHD患儿肺动脉压与血浆CFH-R2水平负相关。由此可推测，CHD患儿随着病情进展，心脏损害程度加重，CFH-R2被消耗用于抑制补体系统的活化，延缓肺内血管的重塑和凝血过程；但随着病情加重，肺动脉压升高，CFH-R2大量消耗，水平显著降低。

综上所述，CHD合并PAH患儿血浆CFH-R2水平显著降低，CFH-R2水平与肺动脉压呈负相关，有可能作为CHD合并PAH的生物学标志之一。但本研究仍存在一些不足之处，按照严格的入选标准，样本量较少，导致结果可能存在偏倚，需进一步研究。